超高效液相色谱-串联质谱测定桑葚中唑螨酯残留量

◎ 王 森，李国烈，陈纬成

（南充农产品质量监测检验中心，四川 南充 637000）

唑螨酯化学名称为(E)-α-(1,3-二甲基-5-苯氧基吡唑-4-基亚甲基氨基氧)对甲苯甲酸异丁酯，又名Kiron、Ortus、杀螨王和霸螨灵[1]。唑螨酯作为广谱杀螨剂，速效性好，持效期长，与其他药物无交互抗性，主要用于防治红蜘蛛、锈壁虱等病害[2]。

桑葚，又名桑果，富含维生素、氨基酸和人体所需的微量元素，既可直接食用，也可用于加工制作桑果汁、桑果酒等。近年来，桑果市场发展前景广阔[3-5]。在桑果生产中，主要通过使用化学药物来防治病虫害，不规范的使用化学药物可能会造成桑葚中农药残留超标，危害人体健康[6]。朱兴江等[7]采用高效液相色谱法测定了柑桔和白菜中唑螨酯的残留量。李国烈等[8]报道了桑葚中醚菌酯等药物的残留测定。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Waters Xevo TQS超高效液相色谱-串联质谱仪；Sigma3-18KS离心机；Mettler ToledoML802分析天平；IKA Vortex Genius 旋涡混合器；安捷伦石墨化炭黑氨基复合柱500 mg/6 mL。

唑螨酯标准品；甲醇和乙腈（质谱级，霍尼韦尔）；甲苯（色谱级，霍尼韦尔），甲酸（色谱级，阿拉丁）；超纯水（屈臣氏）。

1.2 样品前处理

称取10 g样品（精确至0.05 g）至50 mL离心管中，加入5 g氯化钠、1颗均质子，再加入20.00 mL乙腈，涡旋振荡提取 15 min，高速离心 5 min（6 000 r·min-1），吸取上清液10.00 mL过柱（预先用10 mL乙腈＋甲苯（75+25）活化小柱，弃去废液），再用20 mL乙腈＋甲苯（75+25）洗脱，收集所有流出液，40 ℃水浴旋蒸至近干，用5.00 mL 85%甲醇溶液溶解残渣，涡旋混匀后过滤膜，装入样品瓶待检测。

1.3 仪器条件

色谱柱：Waters Xbridge C18（3.0 mm×50 mm×3.5 μm）。采用0.1%甲酸乙腈溶液（A）、0.1%甲酸水溶液（B）作为流动相，梯度洗脱程序见表1。柱温：35 ℃；进样量：1.00 μL；扫描模式：多反应监测模式（MRM）；雾化气流速：1 200 L·h-1；锥孔气流速：200 L·h-1；碰撞气流速：0.10 mL·min-1；鞘气温度为500 ℃。其他相关参数见表2。

表1 流动相及梯度洗脱程序表

表2 质谱参数表

1.4 标准曲线和检测限

取唑螨酯标准品 1 mL（1 000 μg·mL-1）于 10 mL容量瓶，用色谱级甲醇定容，得100 μg·mL-1标准储备溶液，-20 ℃保存，3个月内可使用。根据需要，将储备液用桑叶空白基质配制为一定浓度的标准溶液，按照1.3中仪器条件进行分析。以质量浓度为横坐标、对应色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。通过添加一系列已知质量浓度的样品进行测定，以3倍信噪比（S/N=3）时的样品质量浓度为检出限。

1.5 回收率和精密度

在桑葚空白样品中，选择 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-13个浓度的添加水平进行加标回收试验，每个水平进行6个平行实验，计算回收率和精密度。

1.6 基质效应

使用85%甲醇水溶液配制的标液称为试剂标液（A），使用桑葚空白基质配制的标液称为基质标液（B），以两者峰面积比值来评价基质效应。

2 结果与分析

2.1 方法选择性

桑葚样品经前处理、上机分析，得色谱图见图1-图4。结果表明，采取该方法检测样品净化效果好、基质干扰小、峰形及分离度良好，同时可获得较强的信号响应。

图1 唑螨酯标液图谱（1.00 μg·L-1，试剂标）图

图4 唑螨酯加标样品图谱（1.00 μg·kg-1）图

2.2 线性范围和检测限

该试验条件下，唑螨酯在质量浓度1.00～100.00 μg·L-1时线性关系良好，标准曲线回归方程为y=2.042 55×107x+2 719.46，R2=0.999。 检 测 限（S/N=3）为 0.25 μg·kg-1，以 4倍检测限为定量限，则定量限为 1.00 μg·kg-1[9]。

2.3 方法回收率和精密度

在 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-1共 3 个添加浓度水平下，唑螨酯的回收率为83.9%～89.2%，相对标准偏差（RSD）为3.13%～4.31%，见表3。结果表明，该方法具有较高的回收率和准确度。日内精密度RSD（n=6）为2.99%～4.39%，日间精密度RSD（n=3）为2.76%～3.26%，见表4。结果表明，该方法具有很好的重现性和稳定性，满足质量控制要求。

表3 方法回收率表（n=6）

表4 方法精密度表（n=6）

2.4 基质效应

基质效应结果见表5。在不同浓度条件下，唑螨酯在桑葚中的基质效应分别为80.38%～84.50%，即基质抑制作用。因此为了提高方法的准确性和灵敏度，采用本方法测定桑葚中的唑螨酯时应采用桑葚基质匹配标准曲线对实际样品进行定量。

表5 方法基质效应表（n=5）

图2 桑葚空白样品图谱图

图3 唑螨酯标液图谱（1.00 μg·L-1，桑葚基质标）图

3 结论

本试验建立了测定桑葚中唑螨酯残留量的超高效液相色谱-串联质谱方法，样品经乙腈提取，固相萃取小柱净化，超高效液相色谱分离，质谱多反应监测模式检测，外标法定量。方法检出限为0.25 μg·kg-1，定量限为 1.00 μg·kg-1，符合残留限量的要求（0.1 mg·kg-1），平均回收率为83.9%～89.2%，精密度为2.76%～4.39%，适用于桑葚中唑螨酯残留量的测定。