高危型HPV感染不孕患者免疫功能状态及辅助生殖临床结局

张烨琳 沈醒杭 姚冬莉

浙江省杭州市中医院(310007)

人乳头瘤病毒(HPV)与女性不孕症有关[1]。持续高危HPV感染是发生宫颈癌的高危因素[2]。机体清除HPV感染细胞主要依靠T淋巴细胞亚群，并与其数量及功能有关[3]。有研究表明，高危型HPV感染会导致免疫功能异常，是引起女性不孕的危险因素[4]。国外有实施辅助生殖技术(ART)对妊娠结局影响的研究，但国内少有HPV感染不孕患者采用ART对免疫功能的影响报道。基于此，本文以高危型HPV感染不孕患者为观察对象，探讨其免疫功能状态及采用ART的临床结局。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017年1月—2019年12月在本院诊治的高危型HPV感染不孕患者97例(感染组)。纳入标准：①有正常性生活没有妊娠≥1年；②高危型HPV核酸检查阳性；③有ART指征且接受治疗。排除标准：①免疫系统、阴道炎症、其他感染性疾病；②合并宫颈癌；③高血压、糖尿病等慢性疾病；④近期使用过免疫制剂或抗菌药物；⑤智力障碍、精神疾病等。同期HPV阴性不孕患者97例为对照组。患者均签署知情同意书。本研究经本院伦理委员会审批。

1.2 免疫功能指标检测

采集两组孕妇静脉血抗凝，采用CytoFLEX流式细胞仪(美国贝克曼库尔特公司)检测CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、自然杀伤细胞(NK)。

1.3 体外受精-胚胎移植(IVF-ET)

在月经第19～21d 1.0～1.8mg注射用醋酸曲普瑞林(Ipsen Pharma Biotech)对垂体降调节，14d后150～300U重组促卵泡素β注射液(荷兰欧加农)启动。当有卵泡径线≥18mm 2个卵泡，给予5000～10000U促性腺激素(郑州博赛生物技术股份有限公司)，34～36h后取卵。取卵4～6h授精，在授精16～18h对授精观察，2～6d对胚胎质量评估并(选1～3个)胚胎移植。胚胎移植14d检测血HCG，血绒毛膜促性腺激素(HCG)>25U/L，妊娠6～8周B超监测，有妊娠囊为临床妊娠，临床妊娠12周前失去胚胎则早期自然流产。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般临床资料

感染组年龄(31.3±6.1)岁(20～45岁)，不孕(4.5±1.4)年(1～7年)；体质指数(BMI)(22.8±1.3)kg/m2(21～24kg/m2)；有孕产史82例(84.5%)。HPV16 39例、HPV18 31例、其他27例；合并解脲支原体(UU)感染33例，单一HPV感染64例。对照组年龄(31.7±5.0)岁(24～44岁)；不孕(4.7±1.4)年(2～8年)，BMI(22.5±1.6)kg/m2(20～25kg/m2)，有孕产史87例(89.7%)。两组年龄、BMI及孕产史等比较无差异(P>0.05)。

2.2 免疫功能指标比较

感染组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均低于对照组，CD8+高于对照组(均P<0.05)(表1)。

表1 两组免疫功能指标比较

2.3 感染组不同HPV高危型感染免疫功能指标比较

感染组不同高危型HPV感染者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK比较均无差异(P>0.05)。单一感染HPV者 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于合并UU感染者，CD8+低于合并UU感染者(P<0.05)。见表2。

表2 不同高危型HPV感染者免疫功能指标比较

2.4 高危型HPV感染不孕患者免疫功能与妊娠结局

辅助生殖后，高危型HPV感染不孕患者妊娠成功38例(39.2%)，妊娠成功孕妇CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于妊娠失败者，CD8+低于妊娠失败者(P<0.05)。见表3。

表3 高危型HPV感染不孕患者ART不同妊娠结局免疫功能指标比较

3 讨论

HPV感染分为高危型及低危型HPV感染[6-7]。HPV持续感染会对宫颈上皮细胞造成破坏，使机体免疫应答失去平衡。研究表明，机体的免疫功能在宫颈病变的发生以及发展中起到重要作用，高危型HPV感染会大幅增加患者由CIN发展为宫颈癌风险[8]。因此，机体的免疫功能变化在宫颈病变中的作用越来越受关注。

T淋巴细胞亚群在机体免疫调节中具有重要的维持作用，其中CD3+能够识别特异性抗原，形成的信号传递到T细胞内部[9]；CD4+能够将Th类细胞因子分化，并且能够和抗原提呈细胞进行结合作用，在免疫调节中具有较大作用[10]；CD8+能较强识别外来病毒的抗原，在感染机制中有较高检测意义[11]；CD4+/CD8+能够反映机体的免疫力，直观反映感染程度，其比值下降提示T细胞免疫功能出现障碍，免疫系统发生紊乱[12]。NK细胞是杀伤靶细胞，对肿瘤细胞起到杀伤以及抑制作用，经过淋巴因子作用后杀伤力更强[13-14]。本研究中，感染组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均低于对照组，CD8+高于对照组，可见高危型HPV感染不孕患者的免疫功能出现紊乱，免疫平衡被破坏。

孙伟等[15]研究表明，高危型HPV感染以HPV16、HPV18、HPV52、HPV58感染为主。有研究表明，HPV16和HPV58感染对免疫微环境会造成影响[16]。本文高危型HPV感染以HPV16型、HPV18型为主，不同高危型HPV感染患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK未见差异，提示不同类型高危型HPV感染对患者免疫功能的影响未有差异。

泌尿系统感染最常见的致病微生物是支原体，其中以合并UU感染对不孕不育影响最大[17]。本研究高危型HPV感染患者合并UU感染占34.0%，单一高危高危型HPV感染患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK高于合并UU感染，CD8+低于合并UU感染。表明合并UU感染患者机体免疫能力更低。由于免疫系统难以将体内HPV自行清除，使得患者辅助生殖时易造成着床失败，导致妊娠率降低。流产和免疫因素有关。本研究高危型HPV感染不孕患者辅助生殖的妊娠成功者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均高于妊娠失败患者，CD8+低于妊娠失败患者，表明ART治疗妊娠不良结局与患者免疫功能紊乱可能有关。

综上所述，高危型HPV感染不孕患者存在免疫功能紊乱，且合并UU感染患者免疫功能更差，行ART后妊娠失败与免疫功能紊乱有一定关系。但本文研究样本量较少，仍有待大样本检验研究结论。