尖锐湿疣人乳头瘤病毒感染与妊娠结局关系及外周血Th1/Th2细胞因子变化

王海霞 曾 霞 王 娟

1.四川省自贡市第一人民医院(643000)；2.上海交通大学医学院附属瑞金医院无锡分院

尖锐湿疣是因人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的病变，具有治疗时间长、易复发等特点，严重影响患者生殖健康[1]。研究表明[2]，HPV基因分型多样化，致病能力分为低危型和高危型，可通过垂直传播感染胎儿，但关于HPV感染亚型与妊娠结局的关系尚未明确。既往研究显示[3]，HPV可通过多种机制免除免疫监视，使机体无法发挥免疫应答反应，其中以Th1、Th2为代表的细胞免疫失衡是HPV逃逸重要机制。虽有研究显示妊娠会削弱尖锐湿疣HPV感染患者Th1型反应，加重病情，但对妊娠结局无明显影响[4]。而关于尖锐湿疣HPV感染亚型对Th1/Th2细胞因子的变化影响机制尚未明确。本文分析HPV感染亚型与妊娠结局的可能关系以及Th1/Th2细胞因子的变化。

1 资料和方法

1.1 资料

回顾性分析2010年2月—2020年10月本院收治的妊娠期合并尖锐湿疣HPV感染孕妇122例(HPV组)、健康产妇121例(对照组)临床资料，符合《赫尔辛基宣言》的伦理审查。纳入标准：①符合尖锐湿疣临床诊断标准[5]；②病例资料完整。排除标准：①入院前1个月有激素类药物用药史；②合并恶性肿瘤或急慢性传染病。

1.2 检测方法

1.2.1试剂和仪器美国ABI公司生产的PCR扩增仪(9700型号)；上海罗氏有限公司提供HPV DNA试剂盒和多功能流式电针仪(Luminex200型号)；深圳亚能生物科技公司提供HPV核酸分型检测试剂盒，可检测17种高危亚型(HPV82、68、66、59、58、56、53、52、51、45、39、35、33、31、26、18、16)、10种低危亚型(HPV83、81、61、55、44、43、42、40、11、6)、混合型(HPV6+11、18+11)。

1.2.2样本采集充分暴露孕妇宫颈，常规取材后放入离心、封闭。胎儿娩出后，立即取新生儿生殖器和口咽部分泌物，放于离心管内保存，均在24h内检测完毕：①提取PCR反应模板：离心弃上清，加入核酸50μl，混匀提取液，温育10min，再次离心处理，加入上清液5μl作为HPV DNA模板。②PCR扩增：Taq酶0.8μl、引物5μl、扩增反应液10μl、PCR反应模板5μl，反应条件95℃预变形5min，再反应15s(95℃)，反应30s(60℃)，72℃延伸3min，循环30个；③核酸杂交：选取3μl扩增产物，加入22μl微球杂交液，温育10min(85℃)，保温30min(40℃)；④荧光素标记：加入链霉亲和素75μl，保温15min；⑤分析结果：使用多功能流式点阵仪检测，配套软件分析。阳性质控成功标识，对照珠蛋白信号超过500；阴性质控，低于背景信号值；亚型阳性：HPV亚型>2.5倍背景信号值，且探针信号>150，其中有≥2种型感染为多型感染。

1.2.3Th1/Th2细胞因子检测取静脉血，制备处理血样(采用磷酸盐缓冲液及淋巴细胞分离液)，Th2、Th1细胞分别为CD4+IL-4+抗体、CD4+IFN-γ+抗体，采用美国BD公司提供的FACSC ALIUR流式细胞仪检测Th2、Th1所占比，检测结果由CELL QUESR软件得出。

1.3 观察指标

①分析孕妇、新生儿HPV感染分型；②对比两组孕妇及不同HPV感染分型者分娩方式和妊娠结局(呼吸窘迫、胎儿生长受限、早产、胎膜早破、产后出血率)；③对比两组孕妇、不同HPV感染分型孕妇Th1/Th2细胞因子。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 一般情况

HPV组年龄(26.7±2.7)岁(22～32岁)，孕次(2.5±0.4)次(1～4次)，产次(1.2±0.1)次(0～2次)。对照组年龄(26.7±2.4)岁(21～33岁)，孕次(2.4±0.3)次(1～4次)，产次(1.3±0.1)次(0～2次)。两组孕妇一般资料无差异(P>0.05)。

2.2 孕妇HPV分型

HPV组122例，孕晚期(孕29～34周)检测HPV阳性19例(15.6%)，孕中期(孕14～28周)检测HPV阳性71例(58.2%)，孕早期(孕<14周)检测HPV阳性32例(26.2%)。孕35～40周复查时，122例均显示阳性，共10种基因分型，混合型2种，HPV基因感染率9.8%(12/122)；低危型2种，HPV基因感染率13.1%(16/122)；低危型6种，HPV基因感染率77.1%(94/122)。见表1。

表1 HPV组孕妇HPV感染分型

2.3 新生儿HPV分型

HPV组122例孕妇分娩的新生儿，出现高危型HPV感染37例(30.3%)，低危型6例(4.9%)，混合型4例(3.3%)。见表2。

表2 分析两组新生儿HPV感染分型

2.4 孕妇妊娠结局

HPV组剖宫产率高于对照组，早产、胎膜早破、呼吸窘迫、胎儿生长受限、产后出血率低于对照组(均P<0.05)。见表3。

表3 两组孕妇妊娠结局比较[例(%)]

2.5 不同HPV感染分型孕妇妊娠结局

不同HPV感染分型孕妇的分娩方式、母婴结局均未见差异(P>0.05)。见表4。

表4 HPV组不同HPV感染分型孕妇妊娠结局比较[例(%)]

2.6 两组Th1/Th2细胞因子

HPV组血清Th1、Th1/Th2水平低于对照组，Th2高于对照组(P<0.05)，但不同HPV感染分型孕妇血清Th1/Th2细胞因子水平无差异(P>0.05)。见表5。

表5 不同感染HPV孕妇血清细胞因子比较

2.7 HPV感染与细胞因子相关性分析

经Spearman法分析，HPV感染率与Th1、Th1/Th2呈负相关性，与Th2呈正相关性(P<0.05)；HPV感染分型与Th1、Th2、Th1/Th2不存在相关性。见表6。

表6 HPV感染与Th1/Th2细胞因子相关性分析

3 讨论

HPV根据致癌危险性和致病力强度分为高危型、低危型[6]。HPV感染主要通过母婴及间接、直接接触传播，虽大部分患者在感染HPV后会在短期消失，但妊娠期女性可因为机体免疫功能降低，体内血供丰富、性激素水平较高，更易发生HPV感染。

分析本次结果，尖锐湿疣HPV感染孕妇主要以高危型16、18、58、52型感染及11、6型低危型为主，与杨洪学者[7]研究结果大致相似，说明高危型HPV更易引起女性持续性感染。但张宏伟[8]研究中孕妇HPV感染主要以低危型为主，与本次结果存在差异，可能与选取病例局限性有关，本研究收集为妊娠期合并尖锐湿疣HPV感染孕妇。本文比较孕妇和新生儿HPV感染分型时存在差异，新生儿感染高危型以16、35、39型为主，低危型以6、42型为主，有20例与孕妇感染亚型一致(42.6%)，27例不一致。可见部分新生儿可经产道接触、胎盘、羊水等途径引发感染，而另一部分新生儿属隐性感染，提示孕妇感染HPV易对新生儿形成隐性垂直感染；不同亚型HPV感染孕妇其不良妊娠结局未见差异。但仍建议HPV阳性孕妇行治疗并观察，尽可能减少妊娠不良结局，保证新生儿健康[9-10]。有研究表明[11]，HPV感染不仅可诱发宫颈癌、癌前病变、生殖器尖锐湿疣等疾病发生，还可导致新生儿喉乳头状瘤疾病发生。目前针对HPV感染是否影响妊娠结局仍处于争论阶段。本次结果显示，HPV组阴道分娩率低于对照组，妊娠结局不良率高于对照组，说明尖锐湿疣HPV感染可在一定程度上影响妊娠结局。推测原因：一方面女性感染HPV后，各种相关蛋白酶极易出现释放失衡，致使细胞外基质降解，破坏宫颈完整性，从而导致胎儿生长受限、胎膜早破等不良结局；另一方面生殖道感染，可增加内源性前列腺素合成，从而诱发胎膜早破、子宫收缩。因此做好孕前HPV筛查、积极干预，有利于优生优育[12-13]。李娟[14]学者佐证了本次研究结果，提出及时治疗干预，可减轻对妊娠结局的影响。此外，本次分析不同HPV亚型对妊娠结局影响时未见到差异，说明HPV不同亚型对妊娠结局没有造成直接影响。

有学者发现[15]，免疫失衡是HPV持续感染、免疫逃逸的关键途径之一，当HPV感染患者出现免疫反应改变后， Th1型免疫反应向Th2型转变，目前已有研究证实高危型HPV可致使宫颈癌中Th1/Th2细胞因子改变，但较少研究对尖锐湿疣的影响。本次分析结果，相较于对照组，HPV组Th2水平更高，Th1、Th1/Th2水平更低，说明患有尖锐湿疣合并HPV感染孕妇更易出现Th1/Th2细胞因子变化。Th1型免疫应答主要在控制肿瘤阶段发挥作用，可抑制血管生成，激活细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞；Th2型免疫反应揭示了在尖锐湿疣影响下，出现免疫抑制，需通过增强自发诱变或支持新疣体生长促进尖锐湿疣不良进展[16-17]。分析不同HPV感染亚型对Th1/Th2细胞因子影响时未见差异，说明HPV不同分型对Th1/Th2细胞因子影响不大，关于相关因子作为免疫靶向治疗潜力还有待探索。

综上所述，妊娠期合并尖锐湿疣HPV感染孕妇存在明显Th1/Th2免疫失衡，但与HPV感染亚型无关，同时HPV感染也严重影响孕妇妊娠结局，存在一定相关性，但与感染亚型无直接相关性，因此建议女性孕期进行HPV检测，改善妊娠结局。