贝那鲁肽治疗肥胖型多囊卵巢综合征合并糖尿病对患者血清mir-155、IGFBP-3水平影响

辛丽娟 宁建峰 唐宏霞 左源渊 夏 冬 彭 一 吴嘉鸣 鲍喜静

河北省张家口市第一医院 (075000)

多囊卵巢综合征(PCOS)是引起高雄激素血症和无排卵性不孕的主要原因。肥胖型PCOS与胰岛素抵抗有关，也与2型糖尿病发生相关。据报道，胰岛素抵抗是肥胖型PCOS的病理基础，胰岛素敏感性降低会导致患者发生胰岛功能障碍，卵巢分泌过多雌性激素[1]。近年来发现，微小RNA(miRNA)在PCOS中发挥关键作用[2]。廉红梅等研究显示PCOS患者血清微小RNA-155(mir-155)高表达，与胰岛素抵抗相关[3]。胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)是低分子多肽类物质。有报道IGFBP-1降低增加2型糖尿病发生风险[4]。另外新型调节肠促胰岛素类降糖药物在肥胖型PCOS合并2型糖尿病中应用越来越广泛，其中贝那鲁肽是全球第一个全人源氨基酸序列的胰高糖素样肽-1(GLP-1)药物。目前已有报道治疗肥胖型2型糖尿病[5]。基于此，本研究分析贝那鲁肽治疗肥胖型PCOS合并糖尿病对患者mir-155、IGFBP-3水平影响，探讨二者治疗作用的可能机制。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2021年3月在本院就诊的PCOS合并2型糖尿病患者78例，年龄(29.6±5.1)岁(33～39岁)，病程(3.7±0.9)年(2～5年)。本研究经本院伦理委员会批准。纳入标准：①符合PCOS诊断标准[6]；②经口服葡萄糖耐量试验，符合2型糖尿病诊断标准[7]；③体质指数(BMI)>25kg/m2。排除标准：①合并糖尿病急性并发症、糖尿病酮症酸中毒；②正在服用降糖、激素类及调脂药；③合并严重肝、肾功能障碍、恶性肿瘤患；贝那鲁肽过敏及妊娠、哺乳期。患者均签署知情同意书。

1.2 治疗方法

初次给予患者注射贝那鲁肽(上海仁会生物制药公司，2.1 ml：4.2 mg)，每次0.1 mg(3餐前5 min)；2周后剂量增加为每次0.2 mg，治疗1个月。治疗期间要求避孕。

1.3 临床资料收集

所有患者于月经后3 ～7d开始治疗。检测患者治疗前、后24 h内空腹血糖FPG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、空腹胰岛素(FIns)、促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、睾酮(T)、BMI等。采用日立7020全自动生化分析仪(日本)检测FPG、HbA1C水平。采用化学发光分析法检测FIns、LH、FSH、T水平。计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)，HOMA-IR=FIns×FPG/22.5，HOMA-IR>2.8即为胰岛素抵抗[8]。

1.4 方法

1.4.1样本采集治疗前、治疗后24 h内，采集患者静脉血离心处理后置-80℃待测。

1.4.2血清mir-155水平实时荧光定量PCR法检测。RNA提取试剂盒(美国GeneCopoeia公司)提取血清总RNA，依据反转录试剂盒(Primescript RT Reagent Kit，日本TaKaRa公司)反转录RNA得到cDNA。采用CFX96实时荧光定量PCR仪(德国Bio-Rad公司)对mir-155及内参U6进行扩增反应。反应条件：95℃，3min；95℃，30s；60℃，30s；72℃，30s；38个循环。对mir-155相对表达量用2-△△CT法计算。引物由上海生工合成。见表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.4.3血清IGFBP-3水平酶联免疫法测定血清IGFBP-3水平，试剂盒由上海广锐生物技术有限公司生产。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 代谢指标及性激素水平

治疗前后患者血清FSH水平无差异(P>0.05)，治疗后FPG、HbA1C、FIns、LH、T、HOMA-IR、BMI均低于治疗前(P<0.05)。见表2。

表2 治疗前后患者各代谢指标及性激素水平比较

2.2 血清mir-155、IGFBP-3水平

治疗后患者血清mir-155水平(0.41±0.11)低于治疗前(1.02±0.26)，IGFBP-3水平(4367.28±891.11 ng/ml)高于治疗前(3194.72±760.07 ng/ml)(t=19.083、8.842，均P<0.001)。

2.3 治疗后血清mir-155与IGFBP-3及各代谢指标、性激素相关性

Pearson分析显示，治疗后患者血清mir-155与IGFBP-3呈负相关(r=-0.684，P<0.05)，见图1。mir-155与HOMA-IR、BMI、HbA1C、FIns、FPG呈正相关(P<0.05)，IGFBP-3与HOMA-IR、BMI、HbA1C、FIns、FPG呈负相关(P<0.05)。见表3。

图1 治疗后血清mir-155与IGFBP-3相关性分析

表3 各指标相关性分析

3 讨论

PCOS主要表现为排卵功能障碍、HOMA-IR及血清睾酮异常升高，发生率为5%～10%。糖尿病是代谢性疾病，患者体内长时间高血糖损伤机体组织器官可造成功能降低。肥胖是PCOS、2型糖尿病的危险因素[9-10]。GLP-1是一种小肠分泌的肠促胰岛素，具有降低血糖、饥饿感和能量摄入的作用；可与葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽共同促进胰岛β细胞产生胰岛素。以往研究显示GLP-1类似物(利拉鲁肽)作用机制广泛，具有保护胰岛β细胞、降低血糖、减轻患者体质量作用。贝那鲁肽是于2017年上市的GLP-1药物，能显著降低血糖，可用于治疗2型糖尿病[11]。

miRNA表达具有高度特异性，可影响整个细胞生物过程。有研究发现单个miRNA可同时靶向调控数百个mRNA，通过调控特定的mRNA可影响机体脂肪积累的细胞内信号通路[12]。mir-155是与肥胖有密切关系的miRNA，可通过多个信号通路调节肥胖的发展和维持[13]。Tryggestad等[14]研究显示高表达mir-155可通过靶向调节过氧化物酶体增殖物激活受体γ而影响脂肪细胞代谢，并促进肥胖发生。另外mir-155与机体免疫、炎症有密切关系。邓红艳等研究显示，2型糖尿病患者经西格列汀治疗后，血清mir-155水平明显低于治疗前，且mir-155与HOMA-IR、BMI、HbA1C呈正相关性，mir-155可能与患者血糖变化有关[15]。本研究发现肥胖型PCOS合并2型糖尿病患者治疗后血清mir-155水平较治疗前降低，且mir-155与患者代谢指标HOMA-IR、BMI、HbA1C、FIns、FPG均呈正相关，提示mir-155可能影响肥胖型PCOS合并2型糖尿病的发生。推测mir-155可能通过影响患者血糖水平或胰岛素分泌而影响肥胖型PCOS合并2型糖尿病。

IGFBP-3位于染色体7p12.3上，以依赖或不依赖胰岛素样生长因子的方式调控机体的生长发育。IGFBP-3是血液中重要结合蛋白，也是妊娠晚期胰岛素生长因子(IGF-1)的最主要调节蛋白，IGF-1的生理作用主要依靠与IGFBP-3结合而发挥生物学作用[16]。有学者发现高浓度IGFBP-3与IGF-1结合后，可导致游离IGF-1浓度降低，抑制细胞生长；另一方面可使IGF-1免受酶类物质降解，增强IGF-1生物功能，从而促进细胞的生长和分化[17]。陶丽静等研究发现妊娠糖尿病患者血清IGFBP-3水平高于健康妊娠者，妊娠糖尿病孕妇新生儿脐带血中IGFBP-3水平高于健康妊娠者的新生儿，且妊娠晚期脐带血中IGFBP-3水平可能影响新生儿体重及生长发育[18]。国外学者发现，胎儿脐血中IGFBP-3水平与新生儿体重呈正相关[19]。本研究发现肥胖型PCOS合并2型糖尿病患者治疗后血清IGFBP-3水平较治疗前升高，且IGFBP-3与HOMA-IR、BMI、HbA1C、FIns、FPG呈负相关，提示IGFBP-3可能与肥胖型PCOS合并2型糖尿病有关。推测IGFBP-3可能通过影响患者体质量而影响肥胖型PCOS合并2型糖尿病，但具体影响机制本研究尚未探讨。El Tayebi等研究发现在肝癌细胞中mir-155高表达可抑制IGFBP-3表达[20]。本研究发现治疗后患者血清mir-155与IGFBP-3呈负相关，提示mir-155与IGFBP-3可能共同影响着肥胖型PCOS合并2型糖尿病病情。

综上所述，贝那鲁肽治疗肥胖型多囊卵巢综合征合并糖尿病后患者血清mir-155水平下降、IGFBP-3水平上升，贝那鲁肽可能对mir-155及IGFBP-3变化有影响。但本研究尚未深入探讨贝那鲁肽如何影响mir-155及IGFBP-3变化，后续还需进一步探索。