促红细胞生成素基因rs1617640多态性与国人肾上腺肿瘤遗传易感性的关系*

何永欢，朱欧奇，曹 滨，陶湘炜，张雨生，丁 勇，居小兵，刘 欣**

（1靖江市人民医院泌尿外科，江苏 214500；2江苏省人民医院泌尿外科）

肾上腺肿瘤是较常见的泌尿系统肿瘤，按有无内分泌功能分为非功能性肿瘤和功能性肿瘤。寻找肾上腺肿瘤的生物学靶标对早期诊断、早期治疗有着重要意义。目前关于肾上腺肿瘤的发病机制尚未明确，虽然很多人具有相同的危险因素，但最终仅有少数人发生肾上腺肿瘤，提示个体易感性存在差异。已发现与肾上腺肿瘤发生相关的多种基因，如Plkl、VEGF[1-2]、VHL[3]、SHDH[4]和p53[5]等。近年来促红细胞生成素（EPO）基因在肿瘤发生发展中的作用受到广泛研究[6-7]。最近报道位于EPO启动子区的单核苷酸多态性rs1617640G＞T与肝癌发病的易感性相关[8]。本研究收集靖江市人民医院及江苏省人民医院2015—2019年诊治的肾上腺肿瘤患者144例，探究EPO rs1617640G＞T多态性与中国人群肾上腺肿瘤易感性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 肾上腺肿瘤患者144例为观察组，228例正常人为对照组，均为汉族。观察组中男性71例，女性73例；年龄26～81岁，平均47.1±12.6岁，<48岁74例，≥48岁70例；有吸烟史38例，饮酒史112例。对照组中男性113例，女性115例；年龄28～79岁，平均48.3±9.9岁，<48岁110例，≥48岁118例；有吸烟史60例，饮酒史54例。两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究通过医院医学伦理委员会审批，获得患者或其亲属参加本研究的知情同意。

1.2 基因型分析 抽取两组研究对象5 mL外周静脉血，使用蛋白酶K消化，苯酚-氯仿法提取基因组DNA贮存于-20℃冰箱备用。采用Taqman MGB探针检测方法，分析EPO rs1617640各种基因型。相应位点的TaqMan引物及探针由美国Applied Biosystems公司合成和校验，DNA扩增使用384孔Applied Biosystems 7900HT快速实时PCR仪，SDS 2.3软件用于样本等位基因分型。为了保证基因分型的准确性，每次检测设置两个空白对照及两个重复样本作为阳性对照，随机抽取10%样本进行盲法复测，检测结果一致率为100%。

1.3 统计学处理 应用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析处理。计量资料以±s表示，组间比较采用t检验；计数资料以频数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。采用Logistic回归进行影响EPO rs1617640多态性与肾上腺肿瘤发病风险关系的多因素分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组EPO rs1617640G＞T等位基因频率及基因型分布 观察组中EPO rs1617640位点等位基因GG、GT、TT频率分别为65.97%、29.86%、4.17%，对照组中GG、GT、TT频率分别为77.63%、20.17%、2.20%，差异均有统计学意义（P<0.05）。以GG基因型为对照，显示GT基因型肾上腺肿瘤的发病风险明显增加（OR=1.25，95%CI=1.13～2.24），而TT基因型发病风险降低（OR=0.72，95%CI=0.68～4.02）。与GG基因型比较，GT+TT基因型肾上腺肿瘤的发病风险明显增加（OR=1.19,95%CI=1.13～2.21），差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组EPO rs1617640等位基因频率及基因型分布 例（%）

2.2 影响EPO rs1617640多态性与肾上腺肿瘤发病风险关系的多因素分析 对患者年龄、性别、吸烟史、饮酒史等因素对EPO rs1617640多态性与肾上腺肿瘤发病风险关系的影响进行分析，发现在≥48岁（OR=3.36,95%CI=1.75～6.45，P=0.004）、女性（OR=3.98,95%CI=2.12～7.47，P<0.001）、无吸烟史（OR=2.46,95%CI=1.51～4.01，P=0.006）、无饮酒史（OR=2.36,95%CI=1.48～3.77，P=0.007）患者中，EPO rs1617640多态性与肾上腺肿瘤发病风险具有明显相关性，进一步表明GT、TT基因型增加了肾上腺肿瘤的发病风险。见表2。

表2 EPO rs1617640基因型与肾上腺肿瘤发生风险的多因素分析 例

3 讨 论

人类促红细胞生成素（EPO）基因位于7号染色体长臂，由4个内含子和5个外显子组成，全长3 000个碱基对。EPO与骨髓红系祖细胞、幼红细胞表面红细胞生成素受体（EPOR）结合，通过JAK/STAT和Ras/MAPK等途径调节红系增生和分化，增加红细胞数和血红蛋白生成，稳定红细胞膜，提高抗氧化酶功能。研究表明，EPO和EPOR在神经细胞、上皮细胞、心肌、平滑肌、肿瘤等细胞中也有表达[9]。肿瘤细胞可能存在自分泌或旁分泌生长激素刺激EPO/EPOR环路。EPO通过调节原癌基因和抑癌基因的表达而调控细胞代谢、分化、生长和凋亡等过程。ZHAO等[10]研究表明，在脑部肿瘤中EPO经Akt路径激活GATA-1活性及磷酸化。研究证实乳腺癌、肾癌、胃癌及中枢神经系统肿瘤中EPO及其受体高表达[11-13]。恶性肿瘤组织生长代谢旺盛极易出现局部缺氧，EPO高表达可以改善肿瘤细胞在缺氧环境中的生存。ZHONG等[14]发现29%原发乳腺癌和69%乳腺癌转移灶中低氧诱导因子-1（HIF-1）过表达，而良性肿瘤（乳腺纤维瘤和子宫肌瘤）表达阴性。

大量研究表明EPO基因启动子区域的单核苷酸多态性可以改变EPO的表达和功能，进而影响个体对肿瘤的易感性[15]。位于EPO启动子区的单核苷酸多态性rs1617640G＞T和肝癌发病的易感性相关，TONG等[16]研究发现EPOrs1617640G＞T多态性可以增加EPO表达，可能与肿瘤易感性及预后相关。本研究发现，观察组EPO rs1617640位点等位基因GG、GT、TT频率分别为65.97%、29.86%、4.17%，对照组中GG、GT、TT频率分别为77.63%、20.17%、2.20%，差异均有统计学意义（P<0.05）。以GG基因型为对照，显示GT基因型肾上腺肿瘤的发病风险明显增加（OR=1.25，95%CI=1.13～2.24），而TT基因型发病风险降低（OR=0.72，95%CI=0.68～4.02）。与GG基因型比较，GT+TT基因型肾上腺肿瘤的发病风险明显增加（OR=1.19,95%CI=1.13～2.21），差异均有统计学意义（P<0.05）。年龄≥48岁、女性、无吸烟史、无饮酒史者EPO rs1617640多态性与肾上腺肿瘤发病风险具有明显相关性，均有统计学意义（P<0.05）。说明EPOrs1617640多态性与国人肾上腺肿瘤易感性相关，相对于野生等位基因（GG），纯合突变基因型及携带者（TT/GT）肾上腺肿瘤发病风险明显增高，肾上腺肿瘤发病风险可能与年龄、性别、烟酒史有关。

本研究也有不足之处，如样本量偏少，未检测EPO表达水平，有待于今后进一步深入研究。