硒化甘草多糖对雏鸡血液生理生化指标的影响

武梦丽 ， 王新峰 ， 丁 艳 ， 王 虹 ， 罗 燕 ， 连科迅 ， 谷新利

(石河子大学动物科技学院 ， 新疆 石河子 832003)

甘草(GlycyrrhizauralensisFisch)是一种可食用和药用的植物，距今已有2 000多年的历史，它具有良好的药用价值，是中药中应用最为广泛的药用植物之一。甘草多糖 (Glycyrrhiza polysaccharide，GP)是甘草的主要有效成分之一，具有调节免疫、抗病毒、降血脂、降血糖等功能[1]。硒是动物必需的微量元素，在机体生长、免疫等方面发挥重要作用。自然界中硒的存在形式主要分为无机硒和有机硒，与无机硒相比有机硒毒性低，更容易被机体吸收。硒化多糖主要通过化学修饰的方法将多糖与无机硒结合成有机化合物，研究表明，经过硒化修饰后的多糖免疫调节能力和抗凝血活性均显著增强[2]，雏鸡注射1 mL(2 mg/mL)硒化甘草多糖可以提高疫苗免疫后的抗体效价[3]。本试验旨在探讨硒化修饰后的硒化甘草多糖对雏鸡血液指标的影响，同时探究其是否能提高多糖的活性，为硒化多糖在临床上的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 甘草多糖和硒化甘草多糖，均由石河子大学动物科技学院中兽医实验室制备,含糖量为86%,试验时分别稀释成2 mg/mL；黄芪多糖，由上海源叶生物科技有限公司提供，试验时稀释成2 mg/mL；饲粮，购自新疆泰昆集团股份有限公司。

1.2 仪器 兽用全自动血细胞分析仪PE-6800VET，深圳市普康电子有限公司；全自动生化分析仪V1，天津维纳芯科技有限公司。

1.3 试验动物与饲养管理 1日龄的京红1号雏鸡，购自新疆中盛裕口禽业有限公司；试验各组在同一栋鸡舍进行常规饲养。雏鸡入舍前用甲醛对鸡舍进行熏蒸消毒。7日龄时用鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗滴鼻免疫，同时颈部皮下免疫鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗；14日龄时进行鸡传染性法氏囊滴口免疫；21日龄时进行新城疫饮水免疫；28日龄时进行法氏囊饮水免疫。

1.4 试验方法

1.4.1 试验设计 选取300只1日龄的京红1号雏鸡，随机分为4组，每组5个重复，每个重复14只鸡，其中I组为空白组，Ⅱ组为黄芪多糖组，Ⅲ组为甘草多糖组、Ⅳ组为硒化甘草多糖组。各组雏鸡先进行7 d的适应性饲养，第8天开始第I组肌内注射与试验组等容量的生理盐水、Ⅱ～Ⅳ组分别肌内注射1 mL黄芪多糖、甘草多糖和硒化甘草多糖，连续注射7 d，试验周期45 d。

1.5 指标测定与方法

1.5.1 血液常规指标 试验期间的第15、22、29、36天和第43天，采样前禁食12 h，保证饮水，每组随机选取体重相近的10只鸡(每个重复选取2只)，采集血液于EDTA采血管中，用兽用全自动血细胞分析仪进行雏鸡血液常规指标的测定。

1.5.2 血液生化指标 试验期间的第15、22、29、36天和第43天，采样前禁食12 h，保证饮水，每组随机选取体重相近的10只鸡(每个重复选取2只)，采集血液于肝素锂采血管中，用全自动血液生化分析仪和试剂盒进行白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、总胆红素(TB)、谷丙转氨酶(GLT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、葡萄糖(GLU)、钙(Ca)、无机磷(PHOS)等生化指标的测定。

1.6 统计分析 采用SPSS 20.0统计软件对试验数据进行单因素方差分析，以P<0.05作为差异显著性判断标准，试验数据以平均数±标准差表示。

2 结果

2.1 硒化甘草多糖对雏鸡血液白细胞、淋巴细胞比率和淋巴细胞数量的影响 由表1可知，整个试验周期中Ⅱ～Ⅳ组雏鸡血液中的白细胞数(WBC)较空白组增多，第15、22天和第36天经过硒化处理过的甘草多糖组与空白组相比差异显著(P<0.05)。第15天和第43天时，各组雏鸡血液中淋巴细胞比率(LYM%)差异不显著(P>0.05)；第22、29天和第36天时，Ⅳ组与空白组比较可显著提高淋巴细胞比率(LYM%)(P<0.05)。第36天和第43天时，Ⅳ组淋巴细胞数量(LYM)显著高于空白组(P<0.05)；第43天时，Ⅳ组淋巴细胞数量(LYM)显著高于其他各组(P<0.05)。

表1 雏鸡血液白细胞总数、淋巴细胞比率和淋巴细胞数Table 1 Total white blood cell count,lymphocyte ratio and lymphocyte count in chicken blood

2.2 硒化甘草多糖对雏鸡肝功能指标的影响 由表2可知，整个试验周期中各组雏鸡血液中白蛋白(ALB)的含量呈上升趋势，Ⅱ～Ⅳ组白蛋白(ALB)的含量高于空白组；第15天和第22天时Ⅳ组与空白组相比差异显著(P<0.05)。第22、29天和第36天时，Ⅳ组中总蛋白(TP)的含量高于其他各组，且与空白组比较差异显著(P<0.05)。Ⅱ～Ⅳ组球蛋白(GLB)的含量高于空白组，第22天和第29天时Ⅳ组显著高于空白组(P<0.05)。第15天和第29天时，Ⅳ组总胆红素(TB)含量显著高于空白组(P<0.05)。各组间谷丙转氨酶(GLT)的含量差异不显著(P>0.05)。雏鸡血液中碱性磷酸酶(ALP)的含量在不同阶段，Ⅱ～Ⅳ组均高于空白组；第29、36天和第43天时，Ⅳ组中碱性磷酸酶(ALP)含量显著高于空白组(P<0.05)。

表2 雏鸡肝功能指标检测结果Table 2 Detection results of chicken liver function indexes

2.3 硒化甘草多糖对雏鸡肾功能及血脂的影响 由表3可知，整个试验过程中各组雏鸡血液中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量差异不显著(P>0.05)。Ⅱ～Ⅳ组中葡萄糖(GLU)的含量高于空白组，尤其在第15天Ⅳ组中葡萄糖(GLU)的含量显著高于其他组(P<0.05)。Ⅱ～Ⅳ组中胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)的含量低于空白组；第29天和第43天时Ⅳ组雏鸡血液中胆固醇(CHOL)的含量显著低于空白组(P<0.05)。整个试验过程中Ⅳ组血液中甘油三酯(TG)的含量低于其他各组，第36天时显著低于空白组(P<0.05)。

表3 雏鸡肾功能及血脂检测结果Table 3 Renal function and blood lipid detection results of chickens

2.4 硒化甘草多糖对雏鸡血液中钙、无机磷和免疫指标的影响 由表4可知，第15、29天和第43天时，Ⅳ组中钙(Ca)的含量与空白组比较差异显著(P<0.05)；第15天和第36天时，Ⅳ组血液中无机磷(PHOS)的水平显著高于空白组(P<0.05)。试验过程中，Ⅱ～Ⅳ组血液中溶菌酶(LZM)的含量高于空白组；第29天时，Ⅳ组溶菌酶(LZM)的含量显著高于空白组(P<0.05)。整个试验过程中各组雏鸡血液中α-酸性糖蛋白(AAG)的含量之间差异不显著(P>0.05)。

表4 雏鸡血液中钙、无机磷和免疫指标检测结果Table 4 Detection results of blood calcium,inorganic phosphorus and immune indexes of chickens

3 讨论

3.1 硒化甘草多糖对雏鸡血液生理指标的影响 白细胞是机体抵御病原微生物等异物入侵的主要防线，具有参与细胞免疫、吞噬、产生抗体、传递免疫信息等功能[4]。白细胞的总数直接反映机体的免疫状态，本试验结果表明，Ⅱ～Ⅳ组雏鸡血液中白细胞的数量高于空白组，试验第15、22天和第36天时硒化甘草多糖组血液中白细胞的数量较空白组显著提高，这与刘师旗等[5]研究发现车前草多糖可刺激早期鸡白细胞增长的结果一致。淋巴细胞数量也是机体免疫应对功能的重要组成部分，其数量的增加代表动物机体抵抗力的增强，整个试验过程中注射多糖的试验组血液中淋巴细胞数量高于空白组，第36天和第43天时硒化甘草多糖组的淋巴细胞数量显著高于空白组，表明硒化甘草多糖能提高动物机体的免疫力且效果要优于甘草多糖。

3.2 硒化甘草多糖对雏鸡血液生化指标的影响 白蛋白由肝脏合成，用于组织修补和能量的供给；球蛋白由浆细胞分泌形成，反应机体的抵抗力；总蛋白主要由白蛋白和球蛋白组成，在一定程度上反映了动物对蛋白质的消化吸收程度。研究发现，总蛋白的含量升高表明动物对日粮中蛋白质的消化吸收能力增强[6]，从而促进组织蛋白质的合成，利于提高生长速度和饲料转化率。本试验结果表明，雏鸡注射多糖类药物可以提高雏鸡血液中总蛋白、白蛋白和球蛋白的含量，经过硒化处理过的硒化甘草多糖组，提升血液中总蛋白、白蛋白和球蛋白的能力高于其他各处理组，结果表明硒化多糖活性明显优于多糖，这与于绍帅等[7]的研究结果相一致。

肝脏功能的变化影响酶的代谢，当肝功能受到影响时，谷丙转氨酶的活性会发生变化。本试验中各组间谷丙转氨酶的活性差异不显著，说明给雏鸡注射多糖以及硒化甘草多糖类药物并不会对雏鸡的肝脏产生损害，这为硒化甘草多糖在临床上的应用提供理论依据。

碱性磷酸酶广泛分布于机体肝脏、骨骼、肾等组织，可用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断，同时也是机体消化代谢的关键酶类，参与脂肪的代谢，它的高低反应动物机体的代谢强度和生产性能[8]，碱性磷酸酶能提高物质摄取和转运的速度[6]。研究发现给雏鸡注射多糖类药物糖能通过提升碱性磷酸酶来促使体内钙动力增强，从而促进骨骼生长，满足雏鸡快速生长的需要[9]。本试验结果表明，经过硒化处理过的甘草多糖提升血液中碱性磷酸酶含量的效果更佳，经过硒化处理过的甘草多糖增强雏鸡生长的能力高于未经硒化处理过的多糖组。

有研究认为，血清尿素氮含量与蛋白质的利用率之间存在显著的负相关，当肝脏中蛋白质代谢和肾脏排泄功能正常时，其在血清中的含量通常维持在一定范围内[10]，肌酐是肌肉在人体内代谢的产物，主要由肾小球滤过排出体外，血清尿素氮和肌酐是临床上评价肾功能的重要指标，当血清中尿素氮和肌酐浓度升高时，则表明肾功能可能出现异常[11]。本试验结果显示，各组雏鸡血液中尿素氮和肌酐的含量较空白组均无显著差异，表明多糖类药物并不会对动物机体产生不利影响。

血糖是机体供能和合成蛋白质的重要底物，被机体吸收后可转化为动物生长所需的能量[12]，血糖水平的高低直接关系着其生长速度。研究发现试验中添加400 mg/(kg·bw)黄芪多糖可以提高血糖浓度[12]。黄小流等[13]研究发现，马齿苋多糖能显著提高断奶大鼠血清中葡萄糖的含量。本试验结果表明，硒化甘草多糖组血糖质量浓度较空白组有所提高，说明硒化甘草多糖在一定程度上能够促进血糖浓度增加，有利于营养物质吸收。

张利娟等[14]试验发现，日粮中添加黄芪多糖对蛋鸡血脂水平有一定的调节作用，可以降低血清中甘油三酯和胆固醇的含量。刘会娟等[15]的试验发现，饮水中加入米糠多糖，可以降低雏鸡血液中甘油三酯和胆固醇水平。这与本试验结果发现硒化甘草多糖可以降低雏鸡血液中胆固醇、甘油三酯含量的研究结果一致。

溶菌酶能水解细胞壁中黏肽的乙酰氨基多糖并使之裂解被释放出来从而破坏和消除侵入体内的异物，实现机体防御功能[16]，能部分反映细胞免疫功能和机体抗感染能力。可以通过血清中溶菌酶的含量来评价机体的非特异性免疫功能，研究发现，0．15%和0．20%浓度的马尾藻多糖能显著增强奥尼罗非鱼溶菌酶的含量[17]。本试验结果表明，多糖类药物可以提高雏鸡血液中溶菌酶的含量，从而提高了雏鸡的免疫功能。

α-酸性糖蛋白为急性时相反应物之一，在急性炎症时含量增高，与免疫防御功能有关。本试验发现，各组雏鸡血液中α-酸性糖蛋白无显著差异，表明注射多糖类药物不会对雏鸡的健康产生危害。

综上所述，硒化甘草多糖能提高雏鸡血液中与机体免疫有关的各项指标，如白细胞、淋巴细胞、溶菌酶等的含量，同时对肝脏、肾脏无不良影响，还具有一定的降血脂作用，表明经过硒化处理过的甘草多糖可以改善雏鸡的血液指标，提高机体的抵抗力且效果优于未经处理过的甘草多糖。