阿昔洛韦平衡溶解度和表观油水分配系数的测定*

谢娜娜，黄玉香，林水森，谢志新

(泉州医学高等专科学校药学院，福建 泉州 362100)

阿昔洛韦(Acyclovir，ACV)又名无环鸟苷，化学名为9-(2-羟乙氧甲基)鸟嘌呤，为开环核苷类抗病毒药，具有广谱低毒的特点，主要作为抗疱疹病毒的首选药物，临床上广泛用于治疗水痘、带状疱疹病毒和单纯性疱疹病毒等引起的感染[1-2]。阿昔洛韦口服吸收差，生物利用度仅为10%～20%，临床上采用高频率给药方案，病人顺应性差[3-4]。

药物的平衡溶解度和表观油水分配系数是反映药物理化性质的两个重要参数，影响着药物在体内的吸收、分布及转运。目前国内外对阿昔洛韦理化性质的研究报道较少。本文对阿昔洛韦在不同介质中的平衡溶解度和表观油水分配系数进行了测定，以期能够了解阿昔洛韦的溶解性能及脂溶性大小，推测阿昔洛韦的生物药剂学分类(BCS)类型，为设计生物利用度高的阿昔洛新剂型提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦)，BSA124S电子天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)，UV-2600紫外可见分光光度计(日本岛津)，TS-2102C恒温震荡摇床(上海天呈实验仪器有限公司)，TGL-16M型台式高速冷冻离心机(湖南湘仪实验室仪器有限公司)，THZ-C恒温振荡器(太仓市实验设备厂苏州培英实验设备有限公司)， KQ2200B超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

阿昔洛韦对照品(中国药品生物制品检定所，批号140 630-201 403)，阿昔洛韦原料药(湖北威德利化学科技有限公司，批号HBW190110)，甲醇(色谱纯，国药集团化学试剂有限公司)，其它试剂为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 HPLC测定方法的建立

2.1.1 检测波长的选择

取阿昔洛韦对照品适量，配成质量浓度约为10 μg·mL-1的对照品水溶液。以水为空白对照，按照紫外-可见分光光度法，于200～400 nm波长范围内进行紫外扫描。紫外扫描结果显示，阿昔洛韦在251 nm波长处有最大吸收，因此选择251 nm为检测波长[5-6]。

2.1.2 色谱条件及系统适用性

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(10∶90)；检测波长：251 nm；柱温：30 ℃；流速：1 mL·min-1；进样量：10 μL。取阿昔洛韦对照品溶液进行系统适用性试验，结果表明,阿昔洛韦的理论塔板数不低于12000，保留时间5.764 min，对称因子1.030，主峰与杂质峰分离良好，分离度大于1.5，系统适用性良好，表明该方法可用于阿昔洛韦的测定。

2.1.3 对照品溶液的制备

精密称取阿昔洛韦对照品50.0 mg，置于50mL量瓶，加入0.4%氢氧化钠5 mL溶解后，加纯化水稀释至刻度，摇匀，得到质量浓度为1 mg·mL-1的阿昔洛韦对照品储备液。精密量取阿昔洛韦对照品储备液1.0 mL，置于100 mL量瓶，加纯化水稀释至刻度，摇匀，得阿昔洛韦对照品溶液。

2.1.4 线性关系考察

精密量取一定量的阿昔洛韦对照品储备液，置于100 mL量瓶，用纯化水稀释至刻度，摇匀，配制成1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00、80.00 μg·mL-1的系列对照品溶液。按“2.1.2”项所列色谱条件进样10 μL，记录峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，阿昔洛韦质量浓度(ρ，μg·mL-1)为横坐标进行线性回归，得回归方程A=33.025ρ-2.8224，r=0.999 9，结果表明，阿昔洛韦在1.25～80.00 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.1.5 精密度试验

取阿昔洛韦对照品溶液，按“2.1.2”项所列色谱条件连续进样5次，并记录峰面积，计算日内相对标准偏差(RSD)；每日测定1次，连续测定5 d，计算日间相对标准偏差(RSD)。结果显示，日内RSD为0.12%(n=5)，日间RSD为0.23%(n=5)，RSD均小于2%，表明该测定方法精密度良好。

2.1.6 回收率试验

精密量取对照品储备液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL，分别置100 mL量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，得低、中、高三种不同质量浓度，每个质量浓度各3份。按“2.1.2”项所列色谱条件，分别进样10 μL，记录峰面积，计算回收率。结果显示低、中、高质量浓度的回收率依次为100.18%(RSD为0.22%，n=3)、99.13%(RSD为0.10%，n=3)、99.28%(RSD为0.12%，n=3)，表明该测定方法准确。

2.1.7 稳定性试验

精密称取阿昔洛韦原料药15份，分别加入水、“2.2.1”项配制的溶液，配制成质量浓度为10μg·mL-1的供试品溶液，于0、4、8、12、24、48、72h按“2.1.2”项所列色谱条件，进样10 μL测定峰面积，计算RSD。结果显示RSD均小于2%，表明阿昔洛韦在上述溶液中72h内稳定。

2.2 阿昔洛韦平衡溶解度的测定

1)溶液配制：配制pH为1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2的盐酸溶液，pH为3.0、4.0的柠檬酸-柠檬钠缓冲溶液，pH为4.5、5.8、6.8、7.4、8.0的磷酸盐缓冲溶液。

2)分别取纯化水及“2.2.1”项下配制的溶液各50 mL，置250 mL具塞锥形瓶中，加入过量的阿昔洛韦原料药，于恒温震荡摇床中震荡(37 ℃，100 r/min)72 h，平衡过程中始终保持有固体药物存在[7-8]。平衡72 h后取出，以 2650 r/min 离心 10 min，取上清液，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤后，用纯化水稀释适当倍数，按“2.1.2”项所列色谱条件进样10 μL，记录峰面积，代入“2.1.4”项下回归方程计算阿昔洛韦在不同介质中的平衡溶解度。平行做3组，结果见图1。

图1 阿昔洛韦在不同pH介质中的平衡溶解度

同时测得阿昔洛韦在水中的溶解度为(1.02±0.01)mg·mL-1，按中国药典药品近似溶解度表示法显示阿昔洛韦微溶于水。

2.3 阿昔洛韦表观油水分配系数的测定[9]

分别取纯化水及“2.2.1”项下配制的溶液各50 mL，置250 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL正辛醇，于恒温震荡摇床中震荡(25 ℃，100 r/min)24 h，使其互相饱和，静置分层后，分离油水两相，保存备用。

取适量阿昔洛韦加入被正辛醇饱和的水相中，超声溶解，用0.45 μm微孔滤膜过滤后作为平衡前的水相。精密量取平衡前的水相溶液10.0 mL，置50 mL螺口离心管中，再分别加入被纯化水/缓冲液饱和的正辛醇5.0 mL，密盖，于恒温振荡器中振荡(37 ℃，150 r/min)24 h，使达分配平衡，取出。转移至离心机中以 2650 r/min 进行离心10 min，使两相分层，取出。分离水相，用10%甲醇稀释适当倍数，按“2.1.2”项所列色谱条件进样10 μL，测得平衡后水相中阿昔洛韦的质量浓度(ρ2)，平行做3组。将平衡前的水相，用流动相稀释适当倍数，按“2.1.2”项所列色谱条件进样10 μL，测得平衡前水相中阿昔洛韦的质量浓度(ρ1)。按下式计算阿昔洛韦的表观油水分配系数，结果见表1。

表1 阿昔洛韦在不同介质中的表观油水分配系数 (n=3)

3 讨论

平衡溶解度和表观油水分配系数可以预测药物在体内的吸收、分布及转运[9]。测定阿昔洛韦在不同pH介质中的平衡溶解度和表观油水分配系数，可为阿昔洛韦新剂型的开发提供参考。

阿昔洛韦在pH 1.0～8.0介质中的平衡溶解度测定结果表明,阿昔洛韦溶解性能与pH呈现相关性，在pH 1.0～2.2范围内，阿昔洛韦的溶解度随pH的增大而急剧下降；在pH 2.2～pH 8.0范围内，溶解度变化趋势不大。表明阿昔洛韦具有一定的弱碱性，这与阿昔洛韦结构中鸟嘌呤上的氨基和咪唑环有关。

生物药剂学分类系统(BCS)对溶解性分类的界定为：药物的最高单次剂量能完全溶解在不高于 250 mL 的pH 1.2～6.8水介质中，可判定为高溶解性[10]。阿昔洛韦在治疗水痘及带状疱疹时单次给药剂量为0.8 g，由此确定阿昔洛韦的最高单次剂量为 800 mg。用阿昔洛韦的最高单次剂量除以所测定的溶解度，发现在pH2.0～8.0范围内均大于250 mL，为低溶解性药物。油水分配系数可以用来预测药物的亲脂性及透过生物膜的能力[11]。正辛醇有许多与生物膜相似的性质[12]，在药物设计时常选用正辛醇作为模拟生物膜的有机溶剂来测定表观油水分配系数。阿昔洛韦表观油水分配系数的测定结果显示，阿昔洛韦在不同pH介质中的表观油水分配系数(PO/W)均小于1，表明阿昔洛韦的亲脂性小，提示阿昔洛韦为低渗透性药物，穿透生物膜的速率是阿昔洛韦吸收的限速步骤。综合阿昔洛韦的平衡溶解度和油水分配系数测定结果，可初步推定阿昔洛韦为BCS第四类，即低溶解性、低渗透性药物。