PD-1/PD-L1 信号通路在三阴性乳腺癌的表达及其意义

陈燕枝，张文，张可丽，魏颖，张建东，方义湖

(1.江西医学高等专科学校病理教研室，江西 上饶 333400；2.南昌大学第二附属医院病理科，江西 南昌 330000；3.上饶市人民医院病理科，江西 上饶 333400)

0 引言

乳腺癌作为全球高发恶性肿瘤疾病之一，过去20 多年中，该病发病率上升1.4 倍，世界上多数国家及其地区乳腺癌发病率上升30%~40%[1]。免疫疗法是指激发、调动机体免疫系统起到控制、消灭肿瘤细胞一种治疗措施，作为现阶段肿瘤领域研究重点问题。相关研究证实[2]，程序性死亡分子1(PD-1)和程序性死亡配体1(PD-L1)的单克隆抗体类药物能增强机体T 细胞活性达到增强自身免疫力抗肿瘤目的。单克隆抗体PD-1/ PD-L1 抑制剂应用于黑色素瘤、非小细胞癌治疗中有相关报道，但对乳腺癌疾病相关报道较少。本文就探讨PD-1/PD-L1 信号通路在三阴性乳腺癌(TNBC)表达情况及预后关系，为后期临床治疗提供理论依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

抽取上饶市人民医院和南昌市第二附属医院2016 年1月至2019 年12 月收入200 例三阴性乳腺癌(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)存档石蜡标本，纳入标准：①所有患者经过病理组织检查确诊为原发性乳腺癌；②经过家属、患者同意后参与本次试验；③无精神异常、抑郁症疾病。排除标准：①影响到本次试验进程疾病；②一般资料不全者；③合并其他恶性肿瘤。

选取同期于我院行手术切除的病理诊断为非三阴性乳腺癌的40 例患者的乳腺癌组织(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)石蜡标本为对照。

1.2 方法

1.2.1 检测方法

所有患者病理切片均采用组织芯片仪制成，并制作成7×9 大小受体蜡块，每个微孔直径大小为0.9mm，间距为1mm，深度为3mm。本次试验开展过程中免疫组织化学检查采用Leica BOND-MAX 全自动免疫组织化学操作。本次试验所采用试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，严格按照说明书标准判断，并以PBS 代替一抗作为阴性对照组，用内对照作为阳性对照。ER(克隆号EP1)、PR(克隆号EP2)、HER2( 克隆号UMAB36)、CH5/6( 克 隆号D5/16B4)、CD8( 克隆号SP16)、CD4( 克隆号SP35)、Ki-67( 克隆号MIB1)、PD-1(克隆号MRQ-22)和PD-L1(克隆号SP142)。

1.2.2 判定标准

由我院2 名高年资乳腺病理专科医师并对病理结构进行判断，并依据2010 年美国肿瘤学会/美国病理医师学院判定标准：阳性：ER、PR 胞核阳性细胞≥1%。依据2014 年制订的中国乳腺癌HER2 检测指南判定：阴性：0~1+，阳性：3+，若结果为2+，为判定标准再次进行检测，检测结果HER2 基因无扩增表示为阴性，阳性：PD-1/PD-L1 细胞膜、细胞质棕黄或棕褐色。阳性：PD-L1 细胞数≥1%，阴性：＜1%，对肿瘤细胞、间质TILS 中PD-L1 表达情况评价。PD-1 表达于间质TILS，阳性：阳性细胞数≥5%，阴性：＜5%。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 PD-1/PD-L1 表达情况

肿瘤细胞和间质TILS 中PD-L1 阳性率为17.5%(35/200)和24.0%(48/200)，高于非三阴性乳腺癌组织的 15.0%(6/40，差异有统计学意义(P＜ 0.05)。间质TILS 中PD-1 阳性率为26.0%(52/200)。高于非三阴性乳腺癌组织的7.5%(3/40)，差异有统计学意义(P＜0.05)。见图1。

图1 表达情况

2.2 三阴性乳腺癌中PD-1/PD-L1 的表达与临床病理特征的关系

200 例三阴性乳腺癌患者中，病理结果诊断为：68 例患者出现1~24 枚不等的淋巴结转移，12 例患者出现肿瘤侵犯神经，19 例患者出现脉管内癌栓，46 例患者出现组织学II 级，154 例患者出现组织学III 级。肿瘤细胞PD-L1 阳性与组织学级别、淋巴结转移有关(P＜0.05)，间质TILS PD-L1 阳性与组织学级别有关，级别越高表达越强(P＜0.05)，间质TILS PD-1 阳性与临床各病例特征无相关性。见表1。

表1 三阴性乳腺癌中PD-1/PD-L1 的表达与临床病理特征的关系

3 讨论

PD-1/PD-L1 通路可能通过诱导T 细胞耐受、 抑制T 细胞增殖、抑制细胞因子分泌、阻碍抗原呈递过程等方式来协助肿瘤免疫逃逸[3]。近些年来相关研究证实[4]，PD-L1 广泛存在于人体多数肿瘤组织中，如乳腺癌、肺癌、胃癌以及宫颈癌等诸多肿瘤组织微环境中，能有效提高机体肿瘤反应性T 淋巴细胞凋亡，起到一定调节免疫原性作用。PD-1 广泛存在于胸腺细胞、成熟T 细胞以及B 细胞中，临床相关研究证实[5]，间质TILS 作为PD-1 等共同抑制信号，因此，当机体T 细胞耗竭时，PD-1 作为反映信号之一，肿瘤细胞中当PD-L1 表达会引起机体T 细胞功能障碍。因此，PD-1/PD-L1 为靶点肿瘤免疫治疗为后期肿瘤疾病控制起着重要临床意义，阻断PD-1/PD-L1 信号通路，相对增强T 细胞免疫效应的 方法成为抗肿瘤免疫治疗的一个重要手段[6]。

本文研究表明，间质TILS PD-L1 阳性与组织学级别有关，级别越高表达越强，而间质TILS PD-1 阳性与临床各病例特征无相关性。上述结果证实，PD-1/PD-L1 信号通路的PD-L1 与间质TLI 相关，并非为肿瘤细胞本身。Muenst 等[7]的研究发现 650 例乳腺癌(TNBC 127 例)中PD-L1 阳性表达率为 23.4%，其表达与年龄，肿瘤大小、分期、分级，淋巴结转移状态，雌激素受体(estrogen receptor，ER)缺失和增殖细胞核抗原 Ki-67 高表达相关。另有研究[8]亦支持 PD-L1 表达与高 TIL 水平及其他预后不良因素，如年轻、高组织学分级、ER 阴性、孕激素受体(progesterone receptor，PR) 阴性、HER-2 过表达、高增殖指数及侵袭性亚型(三阴性、基底细胞样)等相关。

范钰，钱震，苏勤军等[7]研究中表明，非小细胞癌中PD-L1 在癌细胞以及癌间质淋巴细胞和巨噬细胞的表达阳性率高达48.93%、61.70%，结果证实，癌细胞和间质淋巴细胞中PD- L1 的表达与癌间质淋巴细胞中 PD-1 的表达呈正相关。在杨芳，陈晓品[8]研究中，PD-L1 在胃癌中的表达与PD-1 阳性间质TILS 的数量呈负相关。PD-L1 与其受体PD-1 阳性表达之间的相关性在不同肿瘤中表现形式不一致，但后期仍需临床大样本认证。

综上所述，PD-1/PD-L1 在TNBC 中具有较高的表达，对三阴性乳腺癌的预后具有一定的预测作用，以及为三阴性乳腺癌免疫治疗带来更多希望。