配方羊奶粉对小鼠免疫功能影响的研究

杨鹏飞，吴 桐，谢 奎，邓友田，蒋飞荣，卢素云，侯艳梅＊

1 湖南安生美药物研究院有限公司，湖南长沙 410000

2 海普诺凯营养品有限公司，湖南长沙 410000

0 引言

乳制品因含有丰富营养物质，已成为人们日常生活中常见的食品或营养品。研究发现，羊奶中含有丰富的酪蛋白、乳清蛋白、矿物质、维生素等营养物质和生物活性因子，其营养价值接近人乳，总体上优于牛乳，被称为“奶中之王”[1，2]。凭借着含有丰富的营养物质，羊奶也具有一定的保健功能。研究表明，羊奶中的蛋白质、维生素C、维生素E、超氧化物歧化酶等物质使其具有良好的抗氧化活性[3，4]；羊奶可降低大鼠血浆中胆固醇的含量，可能与其含有丰富的中链脂肪酸有关[5]；羊奶对小鼠肠道菌群及结肠炎大鼠的炎症具有一定的调节和改善作用，可能与其含有丰富的表皮细胞生长因子和低聚糖有关[6，7]。此外，羊奶中营养成分也具有其他的功效作用[8]，如羊奶中的中链脂肪酸也被发现具有抗感染和控制血糖、血脂的功效；羊奶中的低聚糖亦具有抗炎、抗黏附以及增强免疫力的作用；羊奶中的硒具有抗癌、抗氧化、清除自由基等多种功效。

正是因为羊奶等乳制品含有丰富的营养物质，在国家卫生健康委员会食品安全标准与监测评估司于2020年2月发布的《新型冠状病毒感染的肺炎防治营养膳食指导》中，乳制品被列为重点推荐的食物之一[9]。羊奶中含有多种具有免疫调节功能的成分，然而，目前与羊奶增强机体免疫功能相关的研究仍比较缺乏。因此，本研究通过构建免疫功能低下BALB/c小鼠模型，初步评价两款配方羊奶粉对去免疫功能低下BALB/c小鼠模型的影响，以期为羊奶粉在科学膳食及调节免疫系统功能方面提供科学的指导。

1 材料和方法

（1）受试物

益生菌+益生元配方羊奶粉、高钙富硒配方羊奶粉，由海普诺凯营养品有限公司提供。成人推荐食用量均为70 g/天，按体表面积换算成小鼠等效剂量为9.1 g/kg，给样剂量设为等效剂量的2 倍，给样体积40 mL/kg。

（2）试验动物

BALB/c小鼠，SPF级，17～19 g，80 只，雄性，生产单位：湖南斯莱克景达实验动物有限公司。实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004，实验动物使用许可证号：SYXK（湘）2018-0004，实验动物质量合格证：430727201101324683。

（3）仪器设备

721型分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；DNM-9606型酶标分析仪，北京普朗医疗设备有限公司。

（4）试验方法

造模与给药。检疫结束后，试验小鼠按体重随机分为A、B组，每组各40 只小鼠，每组再根据体重分为：①空白对照组；②模型对照组；③益生菌+益生元配方羊奶粉组；④高钙富硒配方羊奶粉组。A组动物用于ConA（刀豆球蛋白A）诱导的小鼠脾淋巴细胞转化和鼠脾NK细胞活性测定试验，B组用于小鼠碳廓清试验。

模型对照组、益生菌+益生元配方羊奶粉组和高钙富硒配方羊奶粉组小鼠自分组当天连续3天腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺，此后，每周强化注射造模1 次，空白对照组在相同时期腹腔注射等量0.9%氯化钠注射液。造模周期为30 天。

造模期内，益生菌+益生元配方羊奶粉组和高钙富硒配方羊奶粉组按40 mL/kg灌胃相应剂量羊奶粉，每天给样1 次，连续30 天；空白对照组和模型对照组每天灌胃相应体积的纯水。

指标检测。参考《保健食品功能评价方法（2020年版）（征求意见稿）》中有助于增强免疫力功能的检验方法评价配方羊奶粉对小鼠免疫功能的影响。检测指标如下：①对脾淋巴细胞的增殖能力的影响；②对自然杀伤细胞（NK）活性的影响；③对小鼠碳廓清能力的影响。

（5）结果统计

本试验数据有效数字修约按照四舍五入进行。统计学分析选用SPSS16.0，数据采用均数±标准差（±s）表示，进行正态性和方差齐性检验。如果满足正态性（P＞0.05），用单因素方差分析（ANOVA）进行统计分析，并根据方差齐性情况选用LSD+Dunnet（方差齐）或Tamhane’s T2（方差不齐）进行比较分析。如果不满足正态性（P＜0.05），则用Kruskal-Wallis检验，并用Mann-Whitney检验进行两两比较分析。统计结果以α=0.05为检验界限，其中P＜0.05表示有统计学意义，P＜0.01表示所检验的差别有非常显著性意义。

2 结果与分析

（1）对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响

如图1所示，与空白对照组比较，模型对照组小鼠脾淋巴细胞增殖能力极显著降低（P＜0.01）。与模型对照组比较，益生菌+益生元配方羊奶粉组和高钙富硒配方羊奶粉组小鼠脾淋巴细胞增殖能力显著升高（P＜0.05），小鼠脾淋巴细胞增殖能力分别提升33.0%和27.0%。表明生菌+益生元配方羊奶粉和高钙富硒配方羊奶粉均可提高免疫功能低下小鼠的脾淋巴细胞增殖能力。

图1 对Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响（±S ，n=10）

（2）对NK细胞活性的影响

如图2所示，与空白对照组比较，模型对照组小鼠NK细胞活性极显著降低（P＜0.01）。与模型对照组比较，益生菌+益生元配方羊奶粉组和高钙富硒配方羊奶粉组小鼠NK细胞活性均极显著升高（P＜0.01），NK细胞活性分别提升51.0%和70.0%。表明生菌+益生元配方羊奶粉和高钙富硒配方羊奶粉均可提高免疫功能低下小鼠的NK细胞活性。

图2 对Balb/c小鼠NK细胞活性的影响（±S ，n=10）

（3）小鼠碳廓清能力的影响

如图3所示，与空白对照组比较，模型对照组小鼠吞噬指数极显著降低（P＜0.01）。与模型对照组比较，益生菌+益生元配方羊奶粉组和高钙富硒配方羊奶粉组小鼠吞噬指数均极显著升高（P＜0.01），碳廓清吞噬指数分别提高34.0%和42.0%。表明生菌+益生元配方羊奶粉和高钙富硒配方羊奶粉均可提高免疫功能低下小鼠的碳廓清能力。

图3 对Balb/c小鼠碳廓清实验吞噬指数的影响（±S ，n=10）

3 结果与讨论

免疫系统是人体健康重要防线，均衡的膳食、全面的营养已成为保障和提高人体免疫力的重要方式[10]。羊奶粉凭借其含有丰富的营养物质（蛋白质、脂肪、乳糖、不饱和脂肪酸、矿物质、维生素等），对提高人体免疫力有良好的应用前景[11]。山羊奶中含有7.4 g/kg乳清蛋白、0.56 mg/100 g锌、0.001 336 mg/100 g硒、185 IU/100 mL VA、2.3 IU/100 mL VD、1.29 mg/100 mL VC，含量均高于牛奶[12]。除此之外，山羊奶还含有丰富的低聚糖，近年来，越来越多的研究发现，山羊奶低聚糖能促进肠道对钙和镁的吸收，还能对免疫系统有潜在的积极作用，能够刺激人体免疫系统释放细胞因子，直接抑制炎症反应[13]。针对不同人群的营养需求，越来越多的研究已经开始关注配方奶粉的功效作用。研究已表明，硒具有抗癌、抗氧化、清除自由基等多种功效[14]，益生元和益生菌具有抗炎、增强免疫力和调节肠道菌群的作用[15]，“富硒组分”和“益生元+益生菌”均有助于增强机体免疫力。本研究中的两款配方羊奶粉均在原有奶基基础上分别添加了高钙富硒成分，以及益生元+益生菌组分。因此，本研究通过动物实验初步评价了两款配方羊奶粉是否具有增强免疫力的作用。

本研究结果表明，益生元+益生菌配方羊奶粉和高钙富硒配方羊奶均可提高免疫功能低下小鼠的脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞的杀伤活性以及小鼠碳廓清能力，即两款配方羊奶粉对小鼠细胞免疫、单核—巨噬细胞功能、NK细胞活性均有一定的调节作用。参考《保健食品功能评价方法（2020年版）（征求意见稿）》中有助于增强免疫力功能的判定标准“在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核—巨噬细胞功能、NK细胞活性4 个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能的作用”，因此两款配方羊奶粉具有有助于增强免疫力功能的作用。