正交试验优选金银利咽颗粒提取工艺

受国徽 苏会源逯珍花 程晓雪

1.天水市中西医结合医院，甘肃 天水741020；2.临夏回族自治州人民医院，甘肃 临夏731100

金银利咽颗粒是我院医院制剂。由金银花、牛蒡子、玄参、桔梗等七味中药组成，主要用于治疗咳嗽、咳白色黏痰、量少不易咳出、咽部不适或咽痛。在研制过程中，对水提工艺采用正交优化试验设计，以牛蒡苷含有量和干浸膏得率为考察评价指标，筛选最佳工艺［1-3］，为本制剂的提取工艺提供基础可靠的试验数据。

1 材料

1.1 仪器 Aglient 1260高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；电子天平（上海民桥精密仪器有限公司）；十万分之一天平（奥豪斯公司）；超声清洗仪（上海科导超声仪器有限公司）；电子恒温不锈钢水浴锅（上海宜昌仪器纱筛厂）；调温电热套（北京科华实验仪器有限公司）；电热鼓风干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司）。

1.2 试药 牛蒡苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110819-201611），金银花、牛蒡子、玄参、桔梗等中药材饮片（四川新荷花中药饮片股份有限公司），乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 牛蒡苷含量测定［3-10］

2.1.1 色谱条件。Agilent 5 HC-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-水（25∶75）为流动相，检测波长为280nm，流速为1.0mL/min，柱温为25℃。进样量为10μL。标准曲线为Y=249.8X+14.067（r=0.9995），表明牛蒡苷在0.5～3.0μg具有良好的线性关系。

2.1.2 对照品溶液的制备。取牛蒡苷适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.25mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备。称取处方量药材饮片，按提取次数试验和正交试验进行提取，提取液滤过，浓缩至一定体积后，取5mL置于10mL量瓶中，加甲醇定容，作为提取次数试验的供试品溶液；取1mL置于10mL量瓶中，加甲醇定容，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液作为正交试验的供试品溶液。

2.1.4 样品的测定［11］。精密吸取供试品浓缩液适量，注入高效液相色谱仪进行测定，计算样品中牛蒡苷的含量。

2.1.5 干浸膏得率测定［2-3，12］。精密量取浓缩液50mL，置于已干燥至恒质量的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却至室温，精密称定，计算干浸膏得率［干浸膏得率=干浸膏质量（g）/药材总质量（g）×100%］。

2.2 水提工艺考察

2.2.1 提取次数试验。称取处方量的药材饮片，加水8倍量分别提取3次，每次1.5小时。按照“2.1.3”项下的方法制备供试品溶液，测定干浸膏得率、牛蒡苷提取率，结果见表1。根据表1结果分析：第2、3次干浸膏得率和牛蒡苷提取量与第1次相比差异明显，第3次提取干膏得率和牛蒡苷提取量占各自总量的比例均小于10.0%，说明经2次提取已基本提取完全，因此将提取次数定为2次。

表1 提取次数试验结果

2.2.2 正交试验优选水提工艺。以干浸膏得率、牛蒡苷含有量为评价指标，按L9（34）正交表对水提取条件进行试验，因素与水平见表2。

表2 因素水平

根据设计表，通过L9（34）正交试验法，按处方量称取药材饮片9份，分别加水提取，滤过，合并滤液，定容至一定体积。测定干浸膏得率、牛蒡苷含有量，并进行多指标综合评分［3，12-15］。评分时以牛蒡苷含有量60分，干浸膏得率40分进行评定，牛蒡苷评分=（牛蒡苷含有量/最高牛蒡苷含有量）×60，干浸膏得率评分=（干浸膏得率/最高干浸膏得率）×40。结果见表3和表4。

以牛蒡苷含有量和干浸膏得率为综合评价指标进行考察，由表3和表4分析得出，影响水提取工艺的因素由强到弱依次为：煎煮时间（C）＞加水量（A）＞浸泡时间（B），其中煎煮时间的差异具有显著性，因此最佳提取工艺为A2B2C2，即药材饮片加水浸泡0.5小时，第一次加8倍量的水煎煮2.0小时，第二次加6倍量的水煎煮1.5小时。

表3 正交试验结果

表4 方差分析结果

2.3 验证试验 按优选的最佳工艺，取10倍于处方量的药材饮片3批（批号分别为20170701、20170702、20170703）进行放大验证试验，结果测得牛蒡苷含有量分别为5.09%，5.16%，5.12%，RSD为0.70%，干浸膏得率分别为23.47%、23.54%、22.97%，RSD为1.30%，表明优选的水提工艺合理、稳定可行。

3 讨论

金银利咽颗粒组方中各中药饮片有效成分大多易溶于水，且大部分中药复方制剂以水煎为主，故采用性价比较高的水提法。牛蒡子作为君药之一其主要成分为牛蒡苷，中药干浸膏是中药发挥疗效的物质基础，因此以牛蒡苷含有量及干浸膏得率为综合评价指标，以正交试验优选提取工艺，根据试验结果及制剂室实际配制情况，综合分析，选出操作简便、稳定可行的最佳工艺。

试验过程中发现，在纯化工艺中先选用沉降分离法（静置过夜），然后取上清液置管式离心机中离心滤过，得到的溶液澄明度好，便于后续操作。