病理抗酸染色要避免其它分枝杆菌干扰

陈洪勋 刘卫艳 刘伟 谢立 任兴昌

摘要： 目的  如何避免病理抗酸染色中其它分枝杆菌污染。方法  收集操作过程中涉及的水龙头、水池底部及摊片盛水容器底部的粘性物质涂片进行抗酸染色，观察有无抗酸染色阳性菌。结果 摊片盛水容器底部、清洗水池底部、技术室水龙头涂抹物，尤其是粘腻物均有较多抗酸染色阳性杆菌。结论  进行病理抗酸染色时所使用的仪器注意清洁，避免其它分枝杆菌的干扰。

关键词：抗酸染色;阳性杆菌

【中图分类号】R445 【文献标识码】B 【文章编号】1673-9026（2022）01--01

结核杆菌的细菌学检查是确定结核病诊断和治疗方案的重要依据。目前虽然有多种方法用于检测结核杆菌[1-2]，但对于病理医师来说，抗酸染色法仍然是结核杆菌检测的常用方法，其作为一种经典方法，成本低廉，操作简单，一直被各大医院广泛使用。笔者在多年的日常工作中发现病理标本石蜡组织切片抗酸染色容易被自来水中的分支杆菌污染，造成结果假阳性。下面围绕这个问题简要阐述下本科室在日常工作中如何避免常规抗酸染色中假阳性的产生。

1  材料与方法

1.1  材料 非结核病理样本，每例3um厚切片捞于普通载玻片上，常规脱蜡后备用;另用棉签蘸取病理摊片仪盛水容器底部、自来水龙头、清洗水池边缘，尤其是粘腻物质涂于载玻片上烘片烤干备用。

1.2  方法

采用购自贝索公司（BASO）的抗酸染色试剂盒，具体操作步骤参考试剂盒说明书进行。

抗酸染色完成后镜下观察染色结果。

2   结果

油镜下观察发现非结核病理切片组织周边有可疑抗酸阳性杆菌，摊片盛水容器底部、清洗水池底部、技术室水龙头涂抹物，尤其是粘腻物均有较多抗酸染色阳性杆菌，菌体多带有节点，也有不带节点呈菌体均一的。

3   讨论

目前已发现分枝杆菌属有100多种分枝杆菌，国际上通常将分枝杆菌分为迟缓生长（菌落形成需7天或7天以上，慢生型分枝杆菌）和迅速生长（7天之内菌落形成，快生型分枝杆菌）两大类[3]。生长缓慢的结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌（麻风菌）是典型的致病性分枝杆菌。除结核分枝杆菌复合群（结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌）和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌，统称为非结核分枝杆菌。非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）是广泛存在于自然界水、土壤和空气尘埃等的环境微生物，故亦称环境分枝杆菌（environmental mycobacterimn，EM）[4-5]。一些NTM也已成为条件致病菌，通过接触污染的医用物品、器械，也有成为医院感染发生的重要原因，而分枝杆菌的耐氯性更强[4]，水中的NTM是污染的主要来源。越来越多的研究发现NTM存在于公共饮水系统和医院供水系统中，包括供水系统水龙头。

关于分枝杆菌，病理医生知道结核、麻风、非结核分枝杆菌，也常常因为考虑有相关肉芽肿病变而进行抗酸染色并在油镜下进行仔细查找。但是，知道自来水中有分枝杆菌的并不多，自来水中不但有分枝杆菌，而且还能耐受含氯消毒剂的作用，在温暖季节繁殖更加明显，医生在常规抗酸染色切片中查找阳性杆菌工作时，有时发现组织内有或者没有阳性杆菌，组织周边都会出现阳性杆菌，这种假阳性的发生很容易影响医生的正确诊断，针对此情况我们对工作中的每个环节反复推敲，最终发现病理组织切刀片摊片所用的自来水垢可能是造成假阳性出现的原因。病理切片捞片时所用的盛水器皿由于没有每天清洗导致器皿底部自来水中的分枝杆菌得以繁殖生长，从而污染了正常的组织切片，产生假阳性结果。 摊片用的盛水器皿中出现的粘腻物进行涂片，其中抗酸染色阳性菌尤其多，还可以作为抗酸染色的阳性对照。因此，当实验室进行抗酸染色或分枝杆菌的相关检测，要避免供水系统的污染，定期清洗水龙头，要将用具清洗干净，不用时要保持干燥。组织蜡块切片展片时尽量使用单独玻璃容器盛装蒸馏水进行展片;如需使用自来水，尤其是在染色前、染色中要注意避免自来水龙头的污染，保证染色结果的准确性。

参考文献：

[1]叶丰，陈昱，何度，等.应用荧光定量聚合酶链反应对疑似结核组织的DNA分析[J].中华病理学杂志，2013，42（8）：534-537.

[2] 尹林峰.结核分枝杆菌实验室检测方法的临床研究[J].医学信息，2015，28（27）：384.

[3]邢燕.环境中分枝杆菌的医学意义及其鉴定[J].中国麻风皮肤病杂志，2009，25（2）：114-116.

[4] 王桂荣，黄海荣.非结核分枝杆菌的分布和生长影响因素及其传播途径研究[J].中国防痨杂志，2016，38（10）：869-873.

[5] Falkinhan JO 3rd. Enviromental sources of nontuberculous mycobacteria[J].Clin Chest Med，2015，36（1）：35-41.

作者簡介：陈洪勋，19790328、女、重庆市开县、杭州市中医院，主管技师，硕士研究生，研究方向：微生物学