哈尼族无偿献血者人群Rh血型分型特征调查

黄 予，王 媛，丁 恒，丁 权，李志强，陈旭东，杨雪斌

（云南省红河哈尼族彝族自治州中心血站 血型参比室，云南 蒙自 661000）

Rh 血型系统是所有血型系统中最复杂的血型系统，Rh 抗原是由位于1 号染色体短臂上的2 个同源及紧密连锁的基因锁编码；RHD 基因编码D抗原，RHCE 编码Cc 和Ee 抗原[1]。目前常规筛查仅做RhD，随着Rh 血型抗体检出概率的增加及其它地区先后对Rh 血型分型进行过调查，了解本地区Rh 分型特征对输血工作有极大指导作用。红河州是全国唯一一个哈尼族彝族自治州，具备哈尼族人口较多的特点，此前未曾见有针对哈尼族无偿献血者人群Rh 血型分型的报道。本研究调查红河州哈尼族无偿献血者人群的Rh 血型分型特征，与其它地区不同民族间对比，分析他们之间的差异，为了解哈尼族血型特征及遗传起源提供材料。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2019年10月22日-2020年4月21日在本血站献血的1537 名18～54 岁哈尼族无偿献血者。

1.2 材料与试剂

瑞士生产的TECAN 自动加样仪RSP10014；日本Kubota 公司生产血型免疫离心机KA- 2200；恒温水浴箱HH-W21-600；平板离心机ROTINA 35；Heidolph 震荡仪平板离心机Titramax 101；抗-C（批号：20193001）、抗-c（批号：20193101）、抗-E（批号：20193202，20203201）、抗-e（批号：20193301）IgG 型抗-D（批号：20181111）、抗人球蛋白（IgG、C3d） （批号：20195001） 均为上海血液生物医药公司生产；IgG 型抗-D（批号：20190601203） 北京金豪生产；IgG/IgM 型抗-D（批号：BMJ170513）为英国Bioscot 公司生产。

1.3 实验方法

采集EDTA 抗凝血3～5mL，离心后在RSP 全自动加样仪上采用微板法进行ABO、RhD、C、c、E、e 抗原分型，微板法筛查结果为RhD 阴性的标本再进行RhD 阴性确认试验。RhD 阴性确认试验采用2 个不同厂家不同批号的IgG 型抗-D 试剂及另一个厂家IgG/IgM 型抗-D 试剂同时进行试管法抗球蛋白试验。

1.4 统计学分析

采用直接计数法计算表型的频率、基因及单倍型频率，参考赵桐茂的《估计Rh 基因组合体频率的两种简易方法》[2]，红河哈尼族无偿献血者人群单倍型及其它地区单倍型，A、B、O、AB 4 种血型Rh 分型比较以及男女Rh 分型比较均采用χ2检验，应用SPSS25.0 软件进行分析。

2 结果

1537 名哈尼族献血者Rh 表型分布、单倍型及基因频率，见表1，利用所得表型观察值和期望值进行Hardy-weinberg 检验，结果见表1（χ2＝10.7683，P＞0.05），观察值与期望值差异无统计学意义，符合Hardy-weinberg 定律。采用卡方检验比较，得出红河州哈尼族无偿献血者人群Rh 单倍型与中国汉族人群、中国南方人群、中国人群、洛阳地区献血者人群以及元江哈尼族人群Rh 单倍型均无明显差异，见表2。统计A、B、O、AB 4种血型分别对应的各Rh 表型人数，采用卡方检验进行比较，结果得出4 种血型Rh 各表型间均无明显差异，见表3。统计红河州哈尼族无偿献血者人群男女比例及男女各Rh 分型人数，1537 名哈尼族无偿献血者中有836 名男性701 名女性，男女之间各Rh 分型无显著差异，见表4。

表1 哈尼族无偿献血者Rh表型分布及基因、单倍型频率

表2 红河州哈尼族无偿献血者人群与不同地区人群Rh单倍型比较

表3 红河州哈尼族无偿献血者人群A、B、O、AB 4种血型Rh分型比较

表4 红河州哈尼族无偿献血者人群男女Rh分型比较

3 讨论

红河哈尼族彝族自治州11 个世居民族中哈尼族人口数列居第三，占全州总人口的18.7%，占全国哈尼族总人口的50%。主要分布于元阳、红河、绿春、金平等县[5]。本研究样本采集包含州内各地团体及街头所有无偿献血者中哈尼族无偿献血者人群样本。《献血法》规定献全血间隔期限最短为6 个月，样本采集时间跨度6 个月，避免研究样本重复。

Rh 血型系统中与临床关系最为密切的抗原是D、C、c、E、e，这5 种抗原免疫原性从大到小为DP＞EP＞cP＞CP＞e。研究表明，临床上检出的不规则抗体主要集中于Rh 血型系统，Rh 血型抗体被认为具有导致溶血性输血反应的能力[6,7]。IgG 型Rh血型抗体被认为具有导致新生儿溶血病的能力。文献研究结果显示，除实现ABO 血型、Rh（D）完全相合外，对Rh（C、c、E、e）抗原进行匹配性输注，可大幅提高血液输注有效率，减少不良反应的发生[8,9]。对育龄期女性进行Rh（C、c、E、e）抗原同型输注，可以避免由于输血免疫造成的新生儿溶血病发生。

Rh 血型的8 种单倍型，可以两两配对产生36种基因型，但用抗-D、-C、-c、-E、和-e 只能区分18 种表型。本研究共检出10 种表型，其中检出少有的表型CCDEe 15 例，CcDEE 3 例，CCdee 3 例，并未检出极其罕见的CCDEE、ccdEE、CCdEE、CCdEe、CcdEE、CcdEe 几种表型。抗原基因频率分布特点为：C、e 抗原频率在80%左右，c、E 抗原频率在20%左右。本地区哈尼族无偿献血者人群D-率为0.5%，稍高于我国汉族人群和大部分少数民族人群。在不同人群中，单倍型的频率有较大差异，CDe 是中国人群中最常见的Rh 单倍型，连锁率最高的等位基因是Ce[4]，本研究人群等位基因连锁率高低顺序为：CeP＞cEP＞ceP＞CE。北方人群中各个种类的单倍型都有较高频率，而南方人群则以主流单倍型最为突出，其他均为稀有型，相应地造成杂合度降低[4]。本研究中单倍型CDe 频率最高（0.7497），其次为cDE（0.1658），其它单倍型频率都不超过0.1，符合南方人群单倍型分布特征。经过比较得出红河州哈尼族无偿献血者人群单倍型频率与中国汉族人群、中国南方人群、中国人群、洛阳地区无偿献血者人群及元江哈尼族人群之间的差异均无统计学意义（P＞0.05）。

由表3得出红河州哈尼族无偿献血人群A、B、O、AB 4 种血型的Rh 分型特征呈一致性，ABO 血型系统并不会影响Rh 分型特征。进一步分析本研究人群男女之间Rh 分型特征，可以得出不同性别之间不存在Rh 分型的差异，这与徐朴等[10]报道的湖北汉族RhD 阳性健康人群Rh 分型特征结果不一致，后者研究中Rh 分型在不同性别间存在区别，这可能与样本量差异以及研究对象不一致有关，有待进一步研究。

总之，本研究得出红河州哈尼族无偿献血者人群Rh 表型分布特征：表现型CCDee 最常见，单倍型CDe 频率最高。Rh 单倍型频率与中国汉族人群没有差异，总体分布特征与中国大部分人群相符。ABO 血型系统不会影响Rh 分型特征，不同性别之间不存在Rh 分型的差异。