结肠癌组织表达MMP- 9、MIG、细丝蛋白A及其与患者预后关系

李建军，刘琪，郭震

（郑州人民医院 南院区普外科，河南 郑州 450000）

结肠癌是世界范围内较为常见的消化系统癌症，其发病率在美国局第三位。 在我国，2012年新发结肠癌病例约103170 例，是我国主要疾病负担之一[1]。 结肠癌具有发病率高、治疗效果差、预后差等特点,结肠癌细胞的侵袭和转移是导致治疗失败的重要原因[2,3]。 研究证实，多种生物学过程和因子调节肿瘤的进展和转移,如基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMP）、迁移诱导蛋白（Migrationinducible protein，MIG）及细丝蛋白等[4,5]。 目前,MM P-9、MIG-7 及细丝蛋白A 对结肠癌进展的影响研究较少，本研究旨在观察结肠癌组织中MMP-9、MIG-7 及细丝蛋白A 表达情况，并分析其与结肠癌病理因素及预后关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2017年1月30 日至2018年6月30 我院收治的80 例接受结肠癌根治术治疗的患者，男42 例，女38 例，年龄40～78岁，平均54.9±5.9岁，淋巴结转移40 例，浆膜浸润46 例，脉管浸润36 例。 纳入标准：可手术结肠癌；术后病理证实为结肠腺癌；第7 版UICC-ACJJ TNM 分期标准为Ⅰ-Ⅲ期；病例资料完整；依从性可；术前全身检查排除远处转移； 患者和家属对研究内容知情且签署研究同意书。 排除非首次诊断为结肠癌或既往接受抗癌治疗的结肠癌患者； 转移或复发结肠癌；合并脑部、心脏等基础疾病可能影响预期生存；无法获得随访；合并自身免疫性疾病、风湿类疾病、感染性疾病、其他肿瘤、哺乳或妊娠、精神疾病者；合并其他消化道疾病，如消化性溃疡、克罗恩病、结肠炎等。

1.2 研究方法

1.2.1 免疫组化法 取术后切除结肠癌组织及癌旁5cm 正常组织作为检测样本，采用免疫组织化学法检测MMP-9、MIG-7 和细丝蛋白A 表达情况。 兔抗人多克隆抗体MIG-7、MMP-9 及细丝蛋白A 均由北京博奥森生物科技有限公司提供。 将标本使用甲醛固定，石蜡包埋，制作切片，并采用苏木精-伊红对标本进行染色。 烤片后（80℃，共30min）采用乙醇脱水、 枸橼酸缓冲液水化修复。 使用3%H2O2 将内源性过氧化物酶去除，加入一抗MMP-9（1:100）、MIG-7（1:100）和细丝蛋白A（1:100）。 抗体4℃过夜，加入二抗，孵育30min 后显色，采用苏木精进行复染，PBS 代替一抗作为阴性对照。 病理切片由我院2 位资深病理科主任双盲阅片。 着色面积： 镜下棕黄色染色细胞占视野内细胞总数比例≤5%为0 份、6%～25%为1 分、26%～50%为2分、51%～75%为3 分；＞75%为4 分； 染色强度：无着色为0 分、浅黄色为1 分；黄色为2 分；深黄色为3 分。 阳性定义为着色面积与染色强度乘积≥2分，其余为阴性。

1.2.2 随访方法 开始随访时间为手术时间，手术后每3 个月随访1 次观察肿瘤复发及转移情况，随访终点为复发、 转移或死亡。 随访至2019年4月30 日。 采用门诊、电话、查阅病例等方法随访。无病生存期（Disease free survival，DFS）指手术时间至结肠癌复发、转移、疾病进展导致死亡的时间或末次随访时间。

1.3 统计分析 使用SPSS 23.0 对获得数据进行统计分析，癌组织及癌旁组织中MMP-9、MIG-7 和细丝蛋白A 表达情况采用配对χ2检验比较,MMP-9、MIG-7 和细丝蛋白A 表达情况与临床病理因素相关性分析使用χ2检验或Fisher 精确概率法。 使用COX 比例模型分析DFS 影响因素。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结肠癌组织及癌旁组织MMP-9、MIG-7、细丝蛋白A 的表达情况 结肠癌组织MMP-9、MIG-7表达阳性率显著高于癌旁组织，细丝蛋白A 表达阳性率显著低于癌旁组织（P＜0.05）。 见表1。

表1 结肠癌组织及癌旁组织各指标表达阳性率的比较[n（%）]

2.2 结肠癌组织表达MMP-9、MIG-7 和细丝蛋白A 与临床病理因素的相关性分析 结肠癌组织表达MMP-9、MIG-7、细丝蛋白A 与患者TNM 分期、淋巴结转移、 脉管浸润呈显著相关性，与患者年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤分化程度无显著相关性（P>0.05）。 见表2。

表2 临床病理因素与MMP- 9、MIG- 7 和细丝蛋白A 表达相关性

2.3 DFS 影响因素分析 中位随访时间16.3 个月，复发14 例，转移9 例，死亡3 例。 COX 单因素分析显示，TNM 分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移、脉管浸润、MMP-9、MIG-7 和细丝蛋白A 与结肠癌DFS相关（P＜0.05）。将单因素分析有意义的指标纳入多因素分析，MMP-9、MIG-7、 细丝蛋白A、TNM 分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移是DFS 独立预后因素（P＜0.05）。 见表3、表4。

表3 DFS 影响因素的单因素分析

表4 DFS 影响因素的多因素分析

3 讨论

肿瘤的转移、 侵袭和进展涉及多种转移介质和多种生物学过程。 其中细胞外基质降解是肿瘤转移的重要机制之一。 细胞外基质降解可导致肿瘤微环境改变、肿瘤细胞定性转移。 MMPs 是胞外基质降解的主要参与酶，MMPs 对细胞外基质进行选择性蛋白降解是肿瘤细胞迁移和侵袭的必要步骤[6]。 MMP-9 是明胶酶的重要成员,基因位于20q 11.2-q13.1。 大量研究证实，MMP-9 通过降解基底膜和细胞外基质中胶原蛋白IV 促进肿瘤进展，包括侵袭、转移和血管生成等，参与多种人类恶性肿瘤的发展，如结肠癌、膀胱癌、骨髓瘤等[7-9]。 本研究证实MMP-9 在结肠癌组织中高表达，且高表达的MMP-9 与淋巴结转移和脉管侵犯有关, 提示MMP-9 与结肠癌高侵袭性有关。 周昱等[10]研究证实,结肠癌患者中MMP-9 水平表达升高，且MMP-9 与TNM 分期和淋巴结转移密切相关, 与本研究结果相符。 体外实验证实结肠癌细胞通过分泌MMP-9 促进细胞外基质降解和肿瘤转移[11]。 此外，本研究还证实高表达MMP-9 与结肠癌DFS 有关，是可靠的预后标志物，与既往研究相符[8]。

MIG-7 是一种富含半胱氨酸的蛋白质,在调节肿瘤细胞浸润和转移方面发挥重要作用，MIG-7在调节肿瘤生长中的功能主要为MIG-7 通过调节促有丝分裂和转移信号通路促进肿瘤生长，此外还有研究证实，MIG-7 在肿瘤血管生成之前促进血管模拟，从而促进肿瘤早期生长和转移[12]。 已有大量研究证实，MIG-7 在多种恶性肿瘤细胞质和细胞膜中上调，如肺癌等，并具有转移性癌早期标志物的潜力[13]。 目前MIG-7 与结直肠癌相关的报道较少，本研究证实MIG-7 在结肠癌组织中高表达，且高表达与较高临床分期、淋巴结转移和脉管浸润有关，提示其可能参与结肠癌侵袭和淋巴转移。 本研究还证实MIG-7 是有效的DFS 预后预测标志物，其水平升高与较短DFS 相关。 李明玉等[14]研究证实结肠癌组织中MIG-7 上调，与本研究结果一致，且MIG-7 上调与结肠癌血管生态模拟呈正相关，证实MIG-7 通过促进结肠癌血管生态模拟促进肿瘤浸润。

细丝蛋白A 是参与调节细胞增殖和迁移的非肌肉肌动蛋白结合蛋白，在肿瘤形成和发展中起重要作用，并参与整合细胞运动和信号转导。 体外研究证实细丝蛋白A 能够阻断MMP-9 表达信号通路，从而降低细胞侵袭力[15]。 本研究中，结肠癌组织中细丝蛋白A 表达水平降低，且细丝蛋白A 与较低临床分期、 较低水平淋巴结转移率和脉管转移率有关，证实细丝蛋白A 可抑制结肠癌侵袭。 预后分析显示，细丝蛋白A 阳性患者具有更长的DFS，预后更好。 周昱等[10]研究显示结肠癌组织中细丝蛋白A 表达下降，与本研究结果相符。

综上所述，MMP-9、MIG-7 在结肠癌组织中高表达，细丝蛋白A 在结肠癌组织中低表达，且MMP-9、MIG-7 高表达和细丝蛋白A 低表达与结直肠癌较短DFS 相关。