徐州某鸡场柔嫩艾美尔球虫耐药性分析

王玉燕，迟 兰，昌莉丽，黄坤朋，任士飞

(1.徐州生物工程职业技术学院，江苏 徐州 221006；2.徐州市三羽家禽诊疗服务有限公司，江苏 徐州 221006)

鸡球虫病是由一种或多种艾美耳属球虫寄生于鸡的肠道不同部位而引起的急性流行性肠道寄生虫病。鸡球虫病以柔嫩艾美耳球虫的致病力最强，寄生于盲肠，俗称盲肠球虫病。该病在养鸡生产中较为常见，能严重影响鸡的生长发育、降低生产性能、抑制免疫功能甚至继发其它疾病，虽然死亡率不高但是发病率较高，给现代集约化家禽养殖带来巨大的经济损失。在养鸡生产中因球虫疫苗使用效果的稳定性差、存在弱毒返强等原因，目前药物防控仍然是控制鸡球虫病的主要措施[1]。

随着抗球虫药物的长期使用，球虫耐药性问题日趋普遍和严重，已成为药物控制球虫病的主要障碍。养殖场及时地掌握和评价本场球虫的耐药情况，才能合理地使用抗球虫药，正确地用药物防控鸡球虫病。本研究以5种徐州本地常用抗球虫药物对某鸡场柔嫩艾美耳球虫进行耐药性分析，以期为鸡场柔嫩艾美耳球虫病的防控提供依据，减少盲目用药和过度用药。

1 材料与方法

1.1 试验虫株

试验虫株由徐州市三羽家禽门诊病例中某鸡场球虫病死鸡分离得到。现场采集病死鸡盲肠内容物，采用饱和盐水漂浮法分离得到球虫卵囊，经单卵囊分离纯化后，依据球虫寄生部位、卵囊形态[2]、孢子化时间[3]鉴定为柔嫩艾美尔球虫。将鉴定后的柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊口服接种无球虫感染的健康雏鸡，获取扩增后的新鲜卵囊置于重铬酸钾溶液中，在37 ℃恒温培养箱内培养至孢子化，孢子化后的卵囊液置于4 ℃冰箱中保存备用。

1.2 试验药物

百球清(托曲珠利溶液，含量2.5%)，拜耳(四川)动物保健有限公司，批号2017100801；球痢克(地克珠利溶液，含量0.5%)，河南惠康动物药业有限公司，批号201612164；磺胺氯吡嗪钠可溶性粉，合肥中龙神力动物药业有限公司，批号20170529；复方磺胺喹恶啉钠可溶性粉(磺胺喹恶啉钠、氧苄啶)，合肥中龙神力动物药业有限公司，批号20170315；青蒿球虫粉(荆芥、防风、青蒿等)，河南得康(致远国际)动物药业有限公司，批号178042701。

1.3 试验动物

1日龄黄羽肉公鸡饲养于徐州生物工程学院实习牧场，动物房严格消毒，饲养笼经火焰消毒，保障饲养环境无球虫，饲养过程中饲喂无抗球虫添加药物的全价饲料，按正常饲养管理程序饲喂至14日龄。连续2 d收集试验鸡粪便检查无球虫卵囊。

1.4 分组及试验处理

对14日龄试验鸡进行空腹称重，选取体重相近的试验鸡随机分为百球清组(Ⅰ组，按1 mL/L兑水给药)；球痢克组(Ⅱ组，0.2 mL/L兑水给药)；磺胺氯吡嗪纳可溶性粉组(Ⅲ组，0.3 g/L兑水给药)；复方磺胺喹恶啉钠禽用可溶性粉组(Ⅳ组，1 g/L兑水给药)；青蒿球虫粉组(Ⅴ组，1 g拌料500 g)；空白对照组(Ⅵ组不感染不给药组)、感染对照组(Ⅶ组感染不给药组)，共7组，每组15只。除空白对照组其它各组分别用注射器经口向嗉囊内灌服柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊5×104个。

接种柔嫩艾美耳球虫24 h后开始给药，连续给药7 d。每组试验鸡死亡后不再补充，观察和记录各组试验鸡的发病情况及临床表现至试验结束。

1.5 耐药性综合评定指标及标准

本试验以病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)、最适抗球虫活性百分率(POAA)和抗球虫指数(ACI)四项指标来综合评定分析药物的耐药性。RSL=[(感染对照组病变记分-试验组病变记分)/感染对照组病变记分]×100% ；ROP=试验组卵囊数或者空白对照组卵囊数/感染对照组卵囊数×100%；POAA=[(试验组增重与存活率-感染对照组增重与存活率)/(空白对照组增重与存活率-感染对照组增重与存活率)]×100%；ACI=(相对增重率+存活率)×100-(病变值+卵囊值)。

式中：卵囊值是根据角田清[4]方法计算，病变记分按照Johnson等[5]的方法进行；增重与存活率(GSR)=试验笼末重/试验笼初重[6]；相对增重率=(用药组平均增重÷空白对照组平均增重)×100%；存活率=存活只数/实验鸡数×100%；病变值=每组平均病变记分×10。

1.6 耐药性定标准

耐药性定按照黄兵[7]方法。RSL>50%，判为阴性；RSL<50%，判为阳性；ROP<15%，判为阴性；ROP≥15%，判为阳性；POAA>50%，判为阴性；POAA<50%，判为阳性；ACI≥160，判为阴性；ACI<160，判为阳性。四项指标中有三项及以上为阳性时可判定为完全耐药；有两项指标为阳性时判定为中度耐药；有一项指标为阳性时判定为轻度耐药；各项指标均为阴性时判定为不耐药。

1.7 数据统计分析

用统计软件 SPSS 17.0 的 ANOVA模块对不同药物组的试验数据进行方差分析，以P<0. 05 作为组间试验数据差异显著性的判断标准。

2 结果与分析

2.1 抗球虫药物对艾美尔球虫卵囊排出的影响

由表1可见，青蒿球虫粉、球痢克、百球清组的ROP均小于15%，表现为耐药阴性，复方磺胺喹恶啉钠可溶性粉、磺胺氯吡嗪钠可溶性粉的ROP均大于15%表现为耐药阳性。

表1 不同抗球虫药物对鸡球虫卵囊排出的影响Table 1 Effect of different anticoccidial drugs on oocystexcretion of coccidia in chickens

2.2 抗球虫药物对盲肠病变的影响

空白对照组未出现盲肠病变，RLS是从减轻肠道病变方面来评定球虫耐药性，青蒿球虫粉组和百球清组RLS均大于50%为耐药阴性，其中百球清组RLS值为56.65%在减轻肠道病变方面最表现最优，复方磺胺喹恶啉钠可溶性粉、磺胺氯吡嗪钠可溶性粉、球痢克组RLS值均小于50%为耐药阳性(见表2)。

表2 不同抗球虫药物的盲肠病变计分及RLS结果Table 2 Lesion score and RLS of cecal lesions withdifferent anticoccidial drugs

2.3 抗球虫药物对鸡体增重的影响

测定不同抗球虫药物对鸡体增重的影响，感染对照组体重比空白组相比明显下降(P<0.01)，各用药组体重比感染对照组增长明显(P<0.01)，其中青蒿球虫粉组增重率最高为74.41%(P<0.01)。各用药POAA均小于50%，判定为耐药阳性(见表3)。

表3 试验鸡平均增重、相对增重及POAA结果Table 3 Average weight gain, relative weight gain and POAA of experimental chickens

2.4 抗球虫药物的ACI

五种抗球虫药物的ACI值均小于160，均为耐药阳性(见表4)。

表4 抗球虫药物的ACI值及评价Table 4 ACI value and evaluation of anticoccidial drugs

2.5 抗球虫药物的药效综合评价

按照POAA、RLS、ROP、ACI 四项指标综合判断，徐州该鸡场柔嫩艾美尔球虫对百球清、青蒿球虫粉中度抗药，对球痢克、复方磺胺喹恶啉钠可溶性粉、磺胺氯吡嗪钠可溶性粉完全抗药(见表5)。

表5 抗球虫药物的药效综合评价Table 5 Comprehensive evaluation of the efficacy of anticoccidial drugs

3 讨 论

本次耐药性评定中所选取的药物均是徐州兽药市场最常见的药物，结果表明该鸡场柔嫩艾美耳球虫对徐州地区五种常用的抗球虫药物都已形成不同程度的耐药。该鸡场对常用抗球虫药物已经产生了非常普遍的耐药性，与全国其它地区报道一致[8-10]。耐药性的产生将加速禽类产品中药物残留的产生，加大对公共卫生的危害。因此需要加强对本地区球虫耐药性的监测，选出敏感药物进行轮换用药、交叉用药、联合用药，减少耐药性的产生。另外还可以开发新的中草药。中草药毒副作用小，长时间使用不易产生耐药性。研究证实，青蒿素及衍生物均能提高机体免疫能力，有效减轻炎症反应，改善球虫感染鸡盲肠病变，恢复机体正常的生理功能[11]。黄杰等[12]评价青蒿素(ART)和癸氧喹酯(DQ)对球虫病的预防作用结果发现ART对柔嫩艾美耳球虫感染的预防效果不如 DQ，两者联合应用具有明显协同作用。青蒿素及衍生物抗球虫效果与其用药量、浓度、添加方式、球虫种类也有密切联系[11]。青蒿素与其它药物联合使用具有明显的协同作用。陈永亮等[13]将ART和二甲氧苄啶(DVD)联合应用于抗鸡柔嫩艾美尔球虫结果发现存活率、病变记分、平均增重等方面ART+DVD组均高于ART组。本次试验中选用中草药青蒿球虫粉，发现该鸡场柔嫩艾美耳球虫对青蒿球虫粉是中度抗药，但在增重方面青蒿球虫粉的相对增重率优于其它4种常用药物。

根据本次试验结果，徐州该鸡场应暂停使用球痢克、复方磺胺喹恶啉钠可溶性粉、磺胺氯吡嗪钠可溶性粉防治鸡柔嫩艾美尔球虫病。为了降低球虫对抗球虫药物耐药性的产生，养殖企业进行球虫病防控时可以先进行耐药性测定，选出敏感药物，再制定合理的抗球虫防控方案。