血清异常凝血酶原在中晚期肝癌患者中的表达及预后

薄维波 秦继宝 陈隽 陶祥平 章勇 闫朝春 朱洪波 郭加友 安仲武

徐州医科大学附属连云港东方医院检验科（江苏连云港222042）

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，发展中国家的发病率是西方国家的2 ～3 倍［1］，我国肝癌的发病率位居全球首位，病死率居第三位［2］，由于其早期多无明显症状，就诊时病情往往已进展到中晚期，晚期HCC 患者的5年生存率低于15%［3］。近年来中晚期HCC 患者的诊疗取得了较大的进展，但整体预后仍不能令人满意［4-5］。

血清异常凝血酶原（protein induced by vitamine K absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ）是由于HCC细胞不能依赖维生素K 合成正常的凝血因子导致凝血酶原前体羧化不足而生成的［6］，其在HCC 诊断中的作用逐渐成为研究热点［7-8］。PIVKA-Ⅱ在国外已被应用于临床并得到认可［9-10］，但其用于中晚期HCC 临床诊断、截断值的确定及预后生存鲜有深入研究。本研究通过探讨血清PIVKA-Ⅱ表达水平与中晚期HCC 患者临床病理特征和预后的关系，旨在为中晚期HCC 的诊断和预后评估提供新的理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象选取2016年1月至2018年6月于我院收治且确诊为中晚期HCC 患者105 例作为中晚期HCC 组，其中男73 例，女32 例；平均年龄为（51.3±8.9）岁，其中Ⅳ期患者30 例，Ⅲ期为42 例，Ⅱ期为33 例。纳入标准：（1）根据《原发性肝癌诊疗规范》（2019年版）［11］诊断标准明确诊断为中晚期HCC 患者；（2）临床资料完整。排除标准：（1）伴有其他系统肿瘤或肿瘤远处转移；（2）妊娠期女性及未成年人；（3）中途退出者。选取同期93 例良性肝脏疾病患者为良性肝病组，男60 例，女33 例，平均年龄为（51.2 ± 7.9）岁；另选取同期90 例在我院进行健康体检者为对照组，男55 例，女35 例；平均年龄为（51.2 ± 11.5）岁，三组研究对象在年龄、性别差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究获得院医学伦理学委员会批准，所有研究对象知情并签署知情同意书（编号：2019-004-01）。

1.2 研究方法

1.2.1 标本的采集与保存采集研究对象空腹外周静脉血约5 mL，采集后在室温下静置30 min，4 000 r/min 离心15 min 分离血清，取上层血清置于-80 ℃冰箱保存备用。

1.2.2 仪器与试剂血清PIVKA-Ⅱ和AFP 水平的检测由美国贝克曼公司Dxl 800 Access 全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂盒；严格按仪器及试剂盒说明书进行操作。阳性判断：PIVKA-Ⅱ≥40 mAU/mL，AFP ≥20.0 ng/mL。

1.2.3 随访采用电话、上门及门诊随访相结合的方式。1年内每3 个月随访1 次，2～5年每6 个月随访1 次。随访时间截止至2021年3月31日。记录患者总生存期（overall survival，OS）和无进展生存期（progression-free survival，PFS），随访时间11 ～61 个月，平均（26.2±8.5）个月

1.3 统计学方法应用SPSS 19.0 软件进行统计学分析。计量资料采用K-S 检验对数据进行正态分布检验。符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示，非正态分布的计量资料采用M（P25，P75）表示；计数资料比较采用χ2检验；多组间比较采用H检验，组间多重比较采用U检验；采用Kaplan-Meier 绘制生存曲线，Log-rank 法进行检验，Cox 比例风险模型进行单因素、多因素分析，通过ROC曲线分析诊断效能。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组研究对象血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平比较中晚期HCC 组患者血清PIVKA-II 和AFP 水平较良性肝病组和对照组显著上调，差异均有统计学意义（均P＜0.05），良性肝病组血清PIVKA-Ⅱ水平高于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 三组研究对象血清PIVKA-Ⅱ、AFP 水平比较Tab.1 Comparison of serum PIVKA-Ⅱand AFP levels in three groups M（P25，P75）

2.2 血清PIVKA-Ⅱ的表达水平与中晚期HCC患者临床病理特征的关系根据105例中晚期HCC患者血清PIVKA-Ⅱ的中位表达水平2 893.64 mAU/mL，将患者分为高表达组（n=65）和低表达组（n=40），结果显示：患者血清PIVKA-Ⅱ高表达与肿瘤大小、肿瘤数目、血管侵犯和TNM 分期显著相关（均P＜0.05）。见表2。

表2 中晚期HCC 患者血清PIVKA-Ⅱ的表达水平与临床病理特征的关系Tab.2 Relationship between the expression of PIVKA-Ⅱand clinicopathological features of advanced HCC patients例（%）

2.3 血清PIVKA-Ⅱ表达水平与中晚期HCC 患者预后的关系Kaplan-Meier 生存分析及Log-rank 检验结果显示：血清PIVKA-Ⅱ低表达组中晚期肝癌患者5年OS、PFS 均明显高于高表达组，见图1。单因素多因素Cox 回归分析结果显示：PIVKA-Ⅱ表达水平是影响患者5年OS、PFS 的独立危险因素（均P＜0.05）。见表3、4。

表3 影响中晚期肝癌患者预后的单因素Cox 回归分析Tab.3 Univariate Cox regression analysis of prognosis in patients with advanced HCC patients

图1 血清PIVKA-Ⅱ表达水平与中晚期肝癌患者5年OS、PFS 的关系Fig.1 Relationship between the expression of PIVKA-Ⅱand 5 years overall survival and 5 years progression-free survival in advanced HCC patients

2.4 ROC 曲线分析PIVKA-Ⅱ、AFP 单独和联合检测诊断价值ROC 结果显示，血清PIVKA-Ⅱ、AFP 诊断中晚期肝癌的最佳截断点分别为198.62 mAU/mL、46.33 ng/mL，二者联合检测的AUC为0.955，优于任一指标单独检测。见表5、图2。

图2 PIVKA-Ⅱ、AFP 单独及联合检测诊断中晚期肝癌的ROC 曲线Fig.2 ROC curve of PIVKA-Ⅱand AFP single and combined detection for diagnosis of advanced HCC patients

表5 血清PIVKA-Ⅱ、AFP 对中晚期肝癌的诊断价值Tab.5 The diagnostic value of serum PIVKA-Ⅱand AFP in the diagnosis of advanced HCC patients

3 讨论

本研究选择了105 例中晚期HCC 患者，通过化学发光法检测血清PIVKA-Ⅱ表达水平，分析其与临床病理学特征和预后的相关性，发现PIVKA-Ⅱ在中晚期肝癌患者血清中表达显著上调，且其高表达与肿瘤大小、肿瘤数目、血管侵犯和TNM 分期显著相关。Kaplan-Meier 生存分析显示，相对于高表达，PIVKA-Ⅱ低表达的患者5年OS 和5年PFS均明显下降，说明血清PIVKA-Ⅱ的表达上调是不良的预后因子，单因素和多因素Cox 回归分析提示，PIVKA-Ⅱ表达、肿瘤大小、血管侵袭及TNM 分期是评价中晚期HCC 患者预后的独立危险因素。因此，在中晚期HCC 中，PIVKA-Ⅱ的表达水平与肿瘤大小、血管侵袭及TNM 分期一样，可作为潜在的预后因子，这与HOSHINO 等［12］和ZHAO 等［13］研究结果一致。

表4 影响中晚期肝癌患者预后的多因素Cox 回归分析Tab.4 Multivariate Cox regression analysis of prognosis in patients with advanced HCC patients

本研究结果表明，HCC 患者血清PIVKA-II 水平明显高于良性肝病组和对照组，患者血清中PIVKA-Ⅱ的显著增加表明其可能是中晚期HCC 的一个潜在标志物，然而这些影响背后的机制并不完全清楚，XU 等［14］和CAVIGLIA 等［15］认为，这可能是由于异常酶相关的维生素K 代谢产生在肝细胞的恶性转化所导致的。本研究还发现PIVKA-Ⅱ与AFP 间无相关性，ROC 曲线分析结果表明，PIVKA-Ⅱ对患者的诊断效能优于AFP，二者联合检测AUC 显著高于以往研究［16-17］结果，PIVKA-Ⅱ诊断中晚期肝癌患者的最佳截断值为198.62 mAU/mL，远大于其他研究者［18-19］结果，可能是不同研究设计的样本选择不同，本研究纳入的HCC 病例为中晚期，PIVKA-Ⅱ表达水平均较高所致。有类似研究［20-21］也证实较高的PIVKA-Ⅱ截断值与不良预后显著相关。

本研究仍具有局限性。首先，本研究仅局限于临床样本分析，未在细胞和动物水平对PIVKA-Ⅱ介导HCC 发生发展的分子机制进行进一步探索和验证；其次，本研究纳入的临床样本来源于单中心，且TNM 分期为中晚期，可能使得某些分析结果出现偏移。在未来，一方面通过多中心大样本对本研究结果进行进一步验证；同时也将开展体外及体内实验，对PIVKA-Ⅱ促进HCC 的潜在分子机制进行探究。

综上所述，PIVKA-Ⅱ在中晚期HCC 患者血清中表达显著上调，与多种不良临床病理特征及预后密切相关，可作为评估中晚期HCC 患者预后的潜在生物标志物。