鱼腥草（Houttuynia cordata）提取物对结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用

尚姝明，张晓军，马天宇，张昊，于凤超，齐宏玥，陈泳泽，庄松霖，王尚鹏

摘要：运用细胞生存活力测定实验（MTT）研究鱼腥草提取物对人结肠癌细胞HCT116生长的抑制情况.采用倒置显微镜观察不同浓度鱼腥草提取物对结肠癌细胞HCT116形态的影响.实验结果表明，鱼腥草提取物对人结肠癌细胞HCT116的生长增殖有明显的抑制作用，且存在浓度和时间的依赖性.鱼腥草作为天然抗肿瘤化合物的筛选材料具有潜在的价值.

关键词：鱼腥草;结肠癌细胞;MTT

[中图分类号]Q291[文献标志码]A

Inhibitory Effect of Houttuynia cordata Extract on Proliferation

of Colon Cancer Cell HCT116

SHANG Shuming，ZHANG Xiaojun*，MA Tianyu，ZHANG Hao，YU Fengchao*，

QI Hongyue，CHEN Yongze，ZHUANG Songlin，WANG Shangpeng

（Mudanjiang Nomal University Life Science and Technology College，Mudanjiang 157011，China）

Abstract：Cell viability assay （MTT） was used to study the growth inhibition of Houttuynia cordata Thunb.extract on human colon cancer cell HCT116.The effect of Houttuynia cordata extract at different concentrations on the morphology of HCT116 colon cancer cells was observed by inverted microscope.The results showed that Houttuynia cordata extract had significant inhibitory effect on the growth and proliferation of human colon cancer cell HCT116 in a concentration and time dependent manner. Houttuynia cordata has potential value as a screening material for natural anti-tumor compounds.

Key words： Houttuynia cordata Thunb;colon cancer cells;MTT

结肠癌（Coloreetal Carcinoma，CRC）是消化系统最常见的肿瘤.目前临床上治疗结肠癌的方法以手术切除为主，化疗为辅.鱼腥草中含有黄酮类、谷甾醇类、水溶性多糖、有机酸、生物碱、维生素等多种具有抗癌效果的物质，是具有药用和食用价值的中草药.[1-4]《本草纲目》记载，鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb.）有“散热毒痈肿，疮痔脱肛，断店疾，解硇毒”等功效.临床上鱼腥草注射液对肿瘤合并上呼吸道感染、急性气管、支气管炎、带状疱疹具有良好疗效，尤其是鱼腥草注射液能增强免疫功能，对该类患者更为有益.[5]钟兆银[6]研究发现，鱼腥草中提取的有效成分鱼腥草素能抑制Hepg-2（人肝肿瘤细胞）、MG-63（人骨肉瘤细胞）、TCA（人舌癌细胞）三种肿瘤细胞的增殖，促进细胞凋亡.薛兴阳[7]研究发现，鱼腥草黄酮提取物有抑制人子宫颈癌细胞株SiHa生长的作用，以浓度依赖性诱导SiHa细胞的凋亡.张志伟[8]以中国仓鼠卵巢（CHO）細胞株作为模型，发现鱼腥草醇提取物有明显的体外抗肿瘤活性.樊宏伟[9]等研究发现，鱼腥草黄酮提取物能抑制人白血病细胞HL60和小鼠黑色素瘤细胞株B16BL6生长，具有诱导凋亡的作用.本实验选用鱼腥草提取物作用于结肠癌细胞HCT116，探究不同浓度鱼腥草提取物对结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用.

1材料与方法

1.1材料与试剂

材料及供试细胞株鱼腥草（Huttuynia cordata Thunb.）购于黑龙江省牡丹江市同仁堂大药房.人结肠癌细胞HCT116由哈尔滨工业大学细胞生物学实验室惠赠.

试剂RPMI1640培养基，胎牛血清（FBS），二甲基亚砜（DMSO），磷酸盐缓冲液（PBS），青链霉素（Penicillin-Streptomycin Solution），3- （4，5-二甲基噻唑-2） -2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT），0.25%胰蛋白酶.

仪器CO2培养箱（Nuaire，型号：NU-5700），酶标仪（BioTek，型号：Synergy HTX），倒置显微镜（Olympus，型号：TH4-200）.

2实验方法

鱼腥草提取物制备取干燥的鱼腥草，按料液比1∶16加入90%乙醇提取.旋转蒸发得浓缩提取液，干燥后于4 ℃冰箱保存备用.

MTT法检测鱼腥草提取物对结肠癌细胞HCT116增殖的影响采用MTT法评价鱼腥草提取物抑制肿瘤细胞的增殖能力.[10-13]

以浓度为1 000 cell/孔的标准将对数生长期的人结肠癌细胞HCT116接种于96孔培养板中，设置实验组和对照组.实验组加入浓度为2，4，6，8，10，12，14，16，18，20 mg/mL的鱼腥草提取物，对照组不进行药物处理.处理时间为12 h和24 h.每孔加10 μL浓度为5 mg/mL的MTT溶液，避光处理3～4 h.弃上清液，每孔加DMSO 100 μL，摇床振荡10 min.490 nm波长下用酶标仪检测其吸光度（OD），3次重复实验并记录结果.

根据公式（细胞的生长抑制率%=（对照组-实验组）/对照组×100%）计算鱼腥草提取物对HCT116的生长抑制率，应用SPSS 23软件进行统计分析.数据以均数±标准差（X±S ）表示，进行单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义.

3结果与分析

3.1鱼腥草提取物对结肠癌细胞HCT116形态的影响倒置显微镜下观察细胞，可见对照组（图1、图2）细胞排列紧密，形态规则，呈棱形、椭圆形、多边形或短梭形.不同浓度鱼腥草提取物作用结肠癌细胞HCT116 12 h或24 h后，细胞的形态发生改变，且随浓度和时间的升高，其变化愈加明显，细胞排列疏松，呈簇椭圆型或者圆型，细胞收缩，体积变小，细胞由贴壁状态变为半贴壁状态，高浓度的细胞开始出现脱落现象.镜下可清晰观察到凋亡小体和自噬小泡，鱼腥草提取物浓度愈高，凋亡小体和自噬小泡愈明显，数量也越多（图3、图4）.由此可知，鱼腥草提取物能够抑制结肠癌细胞HCT116的增殖，诱导细胞凋亡和自噬.

3.2MTT法检测鱼腥草提取物对结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用作用时间为12 h和24 h后，MTT法检测鱼腥草提取物作用于人结肠癌细胞HCT116的结果详见表1.随着鱼腥草提取物浓度（0～20 mg/mL）不断增加，人结肠癌细胞HCT116的抑制率不断升高，呈现显著的剂量效应关系.鱼腥草提取物浓度20 mg/mL处理时间为12 h时，HCT116细胞的抑制率为58.57%，24 h时HCT116细胞的抑制率为61.80%，无显著差异.随着鱼腥草提取物浓度的增加，杀伤结肠癌细胞HCT116的能力随之增强.MTT实验结果表明，鱼腥草提取物能够抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖，且存在浓度和时间的依赖性.

4讨论及结论

实验结果表明，鱼腥草提取物对人结肠癌细胞HCT116的生长具有明显的抑制作用，呈一定的量效剂量依赖性及时间依赖性.随着培养时间及药物浓度的增加，鱼腥草提取物对结肠癌细胞HCT116增殖抑制作用明显增强，当鱼腥草提取物浓度为20 mg/mL时，12 h HCT116细胞的抑制率为58.57%，24 h HCT116细胞的抑制率为61.80%.

在世界范围内，每年都有人死于结肠癌，寻求副作用小、有效率高、价格低廉的天然抗肿瘤药物，利用它们使化疗药物增敏从而减少化疗药物用量尤为重要.该研究为鱼腥草作为天然抗肿瘤药物的开发利用提供了一定的理论依据.

参考文献

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[9]樊宏伟，瞿卫，立彦，等.鱼腥草黄酮提取物对肿瘤细胞的抑制作用[J].中国医院药学杂志，2008（7）：528-531.

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编辑：琳莉