妇阴康洗剂生产工艺改进探究

唐英武，翟科峰，牛 影*

（1.宿州亿帆药业有限公司，安徽宿州 234000；2.宿州市天然产物与功能性食品工程技术研究中心，安徽宿州 234000；3.宿州学院，安徽宿州 234000）

妇阴康洗剂的产品处方由秦皮、鱼腥草、苦参、仙鹤草、大青叶、紫花地丁6味药材组成.以上诸药材按一定比例混合均匀加水煎煮3 次、合并煎液，滤过，滤液浓缩至在60℃检测的相对密度为1.12时，加乙醇4倍量，静置24 h，滤过，滤液回收乙醇至60℃检测的相对密度为1.14−1.18，加水稀释至1000 mL，静置24 h，取上清液，分装，灭菌制得［1］.妇阴康洗剂具有清热燥湿、除痒止带的作用，常用于细菌性阴道病、滴虫性阴道炎、念珠菌阴道炎等症的治疗，可显著改善阴部瘙痒、疼痛、带下量多、尿频、尿急、尿痛等症状［2］.

目前妇阴康洗剂的生产工艺中仍存在一些亟待解决的问题，如在中药提取工艺优化前存在有效成分秦皮乙素转化率低、制剂有效期内含量下降幅度较大及上市产品在贮存期内含量下降快等问题.中药提取工艺是将中药有效成分从药材固相转移到溶剂液相的传质过程，影响转移率的因素有提取加水量、煎煮次数、煎煮时间、煎煮温度及提取溶媒的pH 等因素［3］.针对溶媒pH 的影响因素，本研究分别采用pH为5.7的纯化水［4］和pH为7.3的饮用水［5］作为妇阴康洗剂中药提取的溶媒并进行对比实验，分析研究秦皮乙素在不同pH 溶媒的转化率及提取浓缩液pH 值的变化情况，然后进一步分析制剂市售样品在贮存期内有效成分的含量和pH 值的稳定性，旨在为优化提取工艺，提高妇阴康洗剂质量控制水平提供实验依据.

1 实验药品、试剂与实验仪器

1.1 实验药品与试剂

本实验药品及试剂主要有妇阴康洗剂，宿州亿帆药业有限公司；秦皮、鱼腥草、苦参、仙鹤草、大青叶、紫花地丁，芍花堂国药股份有限公司；乙醇，安徽安特食品股份有限公司；饮用水，宿州市自来水公司（GB5749−2006）；纯化水是饮用水经过多介质过滤器、活性炭过滤器、软化器、二级反渗透、纯化水储罐制备而成的［6］.秦皮乙素对照品（纯度99.9%），中国食品药品检定研究院；乙腈（色谱纯），美国天地有限公司；甲醇（色谱纯），美国天地有限公司；磷酸（色谱纯），阿拉丁试剂上海有限公司；乙酸乙酯（分析纯），西陇科学股份有限公司；娃哈哈纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司.

1.2 实验仪器

实验仪器包括MS105DU分析天平，梅特勒−托利多国际贸易（上海）有限公司；FE20 pH计，梅特勒−托利多国际贸易（上海）有限公司；LC−20AT高效液相色谱仪，岛津企业管理（中国）有限公司.

2 实验方法

2.1 生产样品的制备

2.1.1 原生产工艺（pH为7.3饮用水溶媒）

分别称取中药材秦皮60.00 kg、鱼腥草40.00 kg、苦参30.00 kg、仙鹤草30.00 kg、大青叶30.00 kg、紫花地丁50.00 kg投入提取罐中搅拌混匀，按料液比1∶10加入药材总质量10倍质量pH为7.3的饮用水，煎煮1.5 h后，放出煎煮液，过滤；按料液比1∶8向药材滤渣中加入药材总质量8倍质量pH为7.3的饮用水，煎煮1 h，放出煎煮液；重复第二次煎煮操作，合并3次煎煮液，过滤，将滤液吸入双效浓缩器中，控制蒸汽压力≤0.2 MPa，真空度＞−0.08 MPa，温度70～90℃，浓缩至在60℃检测液体相对密度为1.12.将上述浓缩液加入醇沉罐中，放冷至室温，按料液比1∶4边搅拌边缓慢加入乙醇，静置沉淀24 h，取上清液、滤过，将上清液吸入真空浓缩罐，控制蒸汽压力≤0.15 MPa，真空度＞−0.05MPa，温度≤85℃，回收乙醇至无醇味，浓缩至在60℃检测液体相对密度为1.14−1.18，在D级洁净区收取浓缩液.依据上述工艺分别制备180101、180102两批提取浓缩液样品.

2.1.2 改进后的工艺（pH为5.7纯化水溶媒）

采用“2.1.1”项下相同的工艺方法，分别称取相同数量、同一批号上述6味药材，按料液比1∶10加入药材总质量10 倍质量pH 为5.7 的纯化水，采用样品制备方法“2.1.1”中所用提取、浓缩、醇沉设备，工艺参数、工艺条件顺序均保持不变.分别制备181001、181002两批提取浓缩液样品.

2.2 样品中秦皮乙素含量测定

2.2.1 色谱条件

以Inertil ODS−3 C18色谱柱柱（250 mm×4.6 mm，5µm），柱温40 ℃，以乙腈−0.025mol/L 磷酸溶液（8∶92）为流动相，检测波长为350 nm［7］，理论塔板数按秦皮乙素峰计算，应不低于7000.

2.2.2 对照品溶液、对照品储备液的制备、供试品溶液的制备

2.2.2.1 对照品储备液制备

精密称取秦皮乙素标准品16 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为母液.

2.2.2.2 对照品溶液制备

精密称取秦皮乙素对照适量，加甲醇溶解，制成每1 mL含6µg的秦皮乙素标准品溶液，作为对照品溶液.

2.2.2.3 供试品溶液制备

精密量取装量差异项下本品溶液1 mL 置分液漏斗中，加水10 mL，摇匀，加乙酸乙酯提取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，用水20 mL 洗涤，弃去水洗液.将乙酸乙酯液水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，定量转移至10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得.

3 结果与分析

3.1 色谱分离效果

分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪中，按“2.2.1”项下色谱条件测定，结果见图1.由图1可知，妇阴康洗剂供试样品溶液与标准品中的秦皮乙素保留时间基本相同，供试品溶液色谱图中各峰分离度较好，符合要求，说明该色谱图方法对秦皮乙素具有较好的分离效果.

图1 秦皮乙素对照品（A）和妇阴康洗剂样品（B）HPLC色谱图（1为秦皮乙素）

3.2 线性关系考察

精密量取“2.2.2”项标准储备液0.2、0.5、1.0、1.5、1.8 mL 置于50 mL 量瓶中，以甲醇为溶剂稀释至刻度，摇匀，精密吸取标准品梯度溶液各10µL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项色谱条件，每个梯度浓度重复3次，记录色谱图；以对照品进样浓度（µg/mL）为横坐标，以秦皮乙素峰面积为纵坐标，制作标准曲线，计算回归方程及相关系［8−9］.结果，秦皮乙素在1.31～11.86µg/mL 时其浓度与峰面积呈良好线性关系，结果见表1.

表1 秦皮乙素对照品的线性关系考察结果线性

3.3 不同批次样本检测结果

对上述原生产工艺（pH 为7.3 饮用水溶媒）以及改进后的工艺（pH 为5.7 纯化水溶媒）所制备的4 种不同编号的样品浓缩液分别使用电子秤称量提取重量.精密量取4 种不同编号的样品各10 mL 于4 个不同的50 mL 容量瓶中，加入对应的溶剂稀释至刻度.以高效液相色谱仪和pH 计按“2.2.1”项下色谱条件取上述稀释后的样品进样10µL分别检测4种不同的提取浓缩液含量和pH值，分析其差异情况.结果表明，改进工艺后的产品相较于原生产工艺的产品中秦皮乙素含量明显增高，秦皮乙素转化率调高近30%，结果见表2.由此表明，使用pH 为5.7 的纯化水较pH 为7.3的饮用水提取秦皮药材中的秦皮乙素效果更佳.

表2 不同批次样本秦皮乙素含量以及pH的检测

3.4 制剂样品稳定性考察

分别取生产批号为180101、181001 提取浓缩液加入液体配制罐，边搅拌边加入纯化水定容至300 L，用NaOH 或HCl 调节配制液pH 至5.2，调整装量后进行药液灌装，用10 kGy 辐照剂量γ射线进行灭菌，包装成180126、181027（制剂批号）2 批市售样品.依据《中华人民共和国药典》2015 年四部通则9001 原料药与制剂稳定性试验指导原则.对180126、181027 两批样品在温度25±2℃，相对湿度60%±10%进行稳定性考察［10］，对生产后的产品在0，6，12 个月依据“2.2.1”项下色谱条件进样10µL检测产品中秦皮乙素含量以及pH值.结果如图2显示，两个批次样品的秦皮乙素含量均随着时间减少.生产后6 个月时间内，工艺改进前后秦皮乙素含量分别下降24%、3.8%；生产后12 个月内，工艺改进前后秦皮乙素含量分别下降40.4%、10.8%；二者pH 值（见表3）则基本没有变化.由此可见，纯水提取工艺更加适合秦皮乙素的保存.

表3 产品pH值变化

图2 不同提取溶媒所对应生产制剂药品稳定性

4 讨论

采用pH 为7.3 的饮用水提取妇阴康洗剂处方中的中药材，秦皮中的活性成分秦皮乙素两批的转移率分别为33.97%和34.48%，pH 分别为6.3 和6.4 见表2，在制剂配制过程中需用HCl 调节pH 至5.2；采用pH 为5.7 的纯化水提取妇阴康洗剂处方中的中药材，秦皮中的活性成分秦皮乙素两批的转移率分别为66.51%和72.94%，pH 分别为5.0 和5.2.优化工艺后采用pH 为5.7 的纯化水提取秦皮乙素转移率提高了30%以上，两批提取浓缩液pH分别为5.0、5.2，制剂配制液pH为5.2，基本不需进行pH 调节，简化了生产工艺.使用180101 和181001 两批提取浓缩液制备成180126、181027 两批市售样品，依据2015 版药典四部通则进行0，6，12 个月稳定性考察、检测分析，12 个月数据饮用水提取制备样品含量下降40.4%，纯化水提取制备样品含量下降10.8%，两批样品含量下降速率相差29.5%，pH 值在考察期内无明显变化见表3.综上所述，通过调整提取溶剂，有助于提高产品质量的稳定性，从而为企业生产提供重要理论和实践基础.

以pH 较低的纯化水替代pH 较高的饮用水提取妇阴康洗剂处方中的中药材，秦皮乙素转化率能提高30%以上，用优化提取工艺生产的市售样品在贮存期内含量稳定性较优化前有较大提高.由此可见优化后工艺既能提高产品收率，也能保证药品质量稳定性.