结肠癌中P2X7受体表达水平及其与患者预后的关系

邸泰霖， 纪云兆， 蒋文静， 孔 磊， 王子斌， 刘大鹏

结肠癌是40～50岁男性高发的一种消化系统恶性肿瘤，本病病因与患者饮食习惯、结肠慢性炎症、结肠息肉及家族史等有关[1]。近些年的研究显示，癌基因激活及抑癌激活失活也是本病的重要影响因素[2]。P2X亚单位受体（P2X7）是嘌呤家族受体的一种，具有细胞外核苷酸结合能力，并以此向细胞内传递信号，进而调节肿瘤细胞生长、增殖，同时影响细胞凋亡进程[3]。P2X7受体还可抑制糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）表达，进而阻滞Wnt/β-catenin经典信号路径活化，而Wnt/β-catenin信号路径是结肠癌上皮间质转化的重要诱因，与结肠癌发生、发展密切相关[4]。本研究通过研究结肠癌患者的癌组织标本及癌旁组织标本中的P2X7受体表达情况，探讨P2X7受体表达与结肠癌肿瘤特征及患者预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月—2018年1月在河北中石油中心医院手术治疗的120例结肠癌患者，其中男65例，女55例；年龄47～75岁，平均（63.5±7.6）岁；病灶部位：左半结肠77例、右半结肠43例；病灶直径：≥ 5 cm 65例、<5 cm 55例；肿瘤分化程度：高分化26例、中分化45例、低分化49例；TNM分期：Ⅰ期13例、Ⅱ期34例、Ⅲ期73例；切缘阳性26例；淋巴结转移阳性70例。本研究方案经医学伦理委员会批准后实施。纳入标准：1）经病理学检查证实为结肠癌患者，结肠癌的诊断标准参考《中国结直肠癌诊疗规范（2020年版）》[5]中的标准；2）年龄18～75岁；3）术前患者未接受放疗、化疗、免疫学治疗；4）具有完整的随访资料。排除标准：1）病理学资料缺失；2）转移性结肠癌患者。

1.2 方法 采用免疫组化染色检测P2X7受体的阳性表达率：将两组样本进行包埋、切片后，采用烘箱对切片进行烘烤，温度设置为62 ℃，时长为1～2 h。随后进行脱蜡及水化操作，并选用0.01 mol/L柠檬钠抗原修复液进行修复操作，滴入2 mL 3% H2O2抑制样本酶活性，DAB染色苏木精复染，流水冲洗2次，盐酸乙醇分化2 s，流水冲洗10 min，梯度乙醇洗脱，透明并封片，镜下观察结果（XSP7B，双目生物显微镜，上海万衡精密仪器有限公司）。评分标准[6]：根据病理切片中阳性细胞的百分比和着色的强度，由2位病理科医生进行半定量免疫组织化学评分。评分标准为：阳性细胞的百分比≤10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分。着色强度：0分为不着色；1分浅黄色；2分黄色；3分棕褐色。取上述两项分值的乘积作为总积分：0分为阴性（-），1～4分为弱阳性（+），6～8分为阳性（++），9～12分为强阳性（+++）。其中（+）及以下为低表达，（++）及以上为高表达。

1.3 观察指标 记录患者年龄、性别、肿瘤部位等一般资料，随访记录患者预后及生存期，分析不同预后患者的病理学特征差异，同时分析P2X7受体与患者3年预后结局的关系。

1.4 统计学处理 采用SPSS 21.0软件进行数据分析，计量资料以表示，两组间比较采用t检验；计数资料以例（%）表示，比较采用χ2检验；P2X7受体表达与患者生存的关系采用Kaplan-Meier法进行生存分析，多因素分析采用Logistic回归分析法；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组标本中P2X7受体表达水平比较 结肠癌组织中P2X7受体高表达率低于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05），见表1、图1。

表1 两组标本中P2X7受体表达水平比较

图1 免疫组化结果（SP，×200）

2.2 P2X7受体不同表达患者的3年生存情况比较 随访3年，P2X7受体低表达组患者的死亡率高于高表达组，差异有统计学意义（P<0.05，表2）。生存分析结果显示，P2X7受体低表达组患者的生存时间长于高表达组患者，差异有统计学意义（Log Rank χ2=4.652，P=0.031，图2）。

表2 不同P2X7受体表达患者的3年随访情况比较

图2 P2X7低表达组与高表达组的生存曲线

2.3 单因素分析结果 存活组与死亡组患者的肿瘤分化程度、TNM分期、切缘阳性率、淋巴结转移情况、脉管浸润情况比较，差异有统计学意义（P<0.05）；两组年龄、性别、肿瘤部位、病灶直径、术后化疗情况比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

表3 单因素分析结果[n（%）]

2.4 多因素分析 以患者3年随访结局为因变量（生存=0、死亡=1），以肿瘤分化程度（高+中分化=0、低分化=1）、TNM分期（Ⅰ+Ⅱ期=0、Ⅲ期=1）、切缘阳性（否=0、是=1）、淋巴结转移（否=0、是=1）、脉管浸润（否=0、是=1）、P2X7受体（低表达=0、高表达=1）作为自变量，进行Logistic回归分析，结果显示：TNM分期高、切缘阳性、淋巴结转移阳性、脉管浸润、P2X7受体低表达是结肠癌患者不良预后的独立危险因素（P<0.05），见表4。

表4 Logistic回归分析结肠癌患者不良预后的影响因素

3 讨论

P2X7受体是炎症反应的重要介质之一，葡聚糖硫酸造模的结肠炎小鼠病灶组织内存在P2X7受体高表达情况，结肠炎诱导的结肠肿瘤病灶内也可见P2X7受体高表达情况[7]。但近年研究显示，P2X7受体虽然具有促急性肠炎发生的发展的能力，但也可抑制结肠炎相关性结肠癌进展[8-9]。动物实验显示，对炎症性疼痛大鼠加以干预，通过使P2X7受体表达下调，进而产生镇痛效应[10]。本研究发现，结肠癌组织中P2X7受体高表达率低于癌旁组织，差异有统计学意义，可以发现P2X7受体低表达与结肠癌病理变化密切相关。P2X7受体是肿瘤腺苷三磷酸（ATP）信号转导的关键节点，其介导的P2X7受体及P2X7受体信号路径对肿瘤细胞生长、自噬以及存活/凋亡平衡具有重要影响[11]。有研究发现，P2X7受体可通过激活NLRP3/IL-1β信号通路，参与了大鼠炎性疼痛的形成[12]。还有研究发现，宫颈癌黏膜表面可见明显P2X7受体低表达，推测P2X7受体低表达可能是宫颈癌病变的重要危险因素，同时也可能是宫颈癌靶向治疗的新方向[13]。

本研究发现，随访3年，P2X7受体低表达组患者的死亡率为52.6%，高于高表达组的33.3%，差异有统计学意义；此外，P2X7受体低表达组患者的生存时间短于高表达组患者，差异有统计学意义，这表明P2X7受体表达水平还与结肠癌患者预后密切相关，P2X7受体检测可能是结肠癌患者预后评估的重要方法。分析P2X7受体抑制结肠癌进展，改善患者预后的机制可能为：1）P2X7受体活化可直接阻滞肿瘤细胞生长、分裂[14]；2）P2X7受体可诱导肠道IL-1β表达，并促使信号传导与转录激活因子3（STAT3）活化，提示P2X7受体可增强肠道细胞免疫功能，进而抑制肿瘤细胞活性[15]；3）P2X7受体活化后将生成非选择性阳离子通道，并诱使Ca2+及Na+内流，K+外流，这将介导多种信号路径：Na+内流，K+外流将激活ASPK/JNK路径，并诱导细胞凋亡；Ca2+内流将诱导磷脂酶D表达，并促使溶酶体与吞噬小体结合，进而对细胞内病原体形成灭杀；Ca2+内流还可诱导丝裂原活化蛋白激酶p38及细胞外信号调节酶1/2（ERK1/2）表达，进而介导下游COX-2和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）炎性蛋白基因表达，同时参与炎症反应[16]。iNOS在肿瘤中的效应不一，而P2X7受体可通过调节iNOS表达来抑制结肠炎相关性结肠癌。K+外流则可诱导炎性小体3表达，并活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1），进而诱导白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素 -18（IL-18）合成[17]；4）P2X7受体可抑制TGF-β1表达，而后者具有促上皮细胞增殖、抑制肿瘤特异性细胞毒性T细胞活性等功能；5）Wnt/β-catenin信号路径与结肠上皮细胞增殖及瘤变密切相关。而P2X7受体可对GSK-3β生成抑制效应，进入阻滞Wnt/β-catenin信号路径活化，抑制结肠肿瘤生长、增殖[18]。Logistic回归分析结果显示：TNM分期越高、切缘阳性、淋巴结转移阳性、脉管浸润、P2X7受体低表达是结肠癌患者不良预后的独立危险因素，临床可通过检测这些指标来分析结肠癌患者的预后。

综上所述，结肠癌组织中的P2X7受体呈低表达，并且是患者预后不良的独立危险因素之一，临床或可通过监测患者P2X7受体水平来评估患者的预后。