FAM83D 在胰腺癌中的表达及临床意义

缪宇锋 张有为 焦南林

1.浙江省温岭市第一人民医院肿瘤内科，浙江温岭 317500；2.江苏省徐州市中心医院肿瘤内科，江苏徐州 221009；3.皖南医学院附属弋矶山医院病理科，安徽芜湖 241001

胰腺癌是消化系统恶性程度最高的肿瘤，主要病理类型为胰腺腺癌（pancreatic adenocarcinoma，PAAD），5 年生存率约为5%[1-2]。由于胰腺癌起病隐匿，早期症状不典型，大多数患者确诊时已属晚期；并且，进展到晚期的胰腺癌缺乏有效治疗手段，导致其发病率与病死率相近，预后极差[3]。PAAD 发病机制尚未明确，家族遗传性、吸烟、慢性胰腺炎及糖尿病等因素均被证实与之相关[4]。因此，深入探索PAAD 发生发展中的关键基因，对于进一步明确其发病机制，提高早期诊断及评估预后具有重要意义。

FAM83D 是FAM83 家族成员，定位于人类20q 染色体，编码纺锤体相关的蛋白，被认为与有丝分裂密切相关[5-6]。既往研究[7-10]发现，FAM83D 在多种癌症如卵巢癌、肝癌及肺癌中表达上调，并参与调节癌细胞增殖、侵袭和迁移，可能成为新型肿瘤分子标志物。然而，FAM83D 在胰腺癌发生发展中的作用尚未明确，本研究基于在线数据库系统性分析FAM83D 基因在PAAD 的表达及预后意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

60 对PAAD 术后组织标本来自2018 年1 月至2019 年12 月皖南医学院附属弋矶山医院病理科的存档蜡块，包括癌组织与癌旁组织（距离肿瘤>2 cm 的胰腺组织），所有患者病理学诊断明确，术前均未接受放化疗。本研究经医院伦理委员会批准并取得所有患者知情同意。

1.2 生物信息学分析

基因表达谱动态分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis，GEPIA）工具（http://gepia2.cancerpku.cn）在线分析FAM83D 基因在PAAD 的表达及预后，参数设定：Log2FC Cutoff=1，p-value Cutoff=0.01。其中肿瘤组织（n=179）信息来源于TCGA 数据库，正常组织（n=171）信息源于TCGA 数据库和GTEx数据库。验证数据集来自KMplot 数据库（http://kmplot.com/analysis/）。

1.3 基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA）

采用GSEA 将RNAseq Gene 数据中胰腺癌组织样本分为FAM83D mRNA 高表达组和低表达组（基于FAM83D mRNA 表达的中位数值作为Cutoff 值），分析预测靶基因可能参与的信号通路。参照基因集为MsigDB 中的c2.all.v5.0.symbols.gmt，将其导入GSEA 4.0.3 软件中进行通路富集分析，软件设置按照默认参数，样本置换检验1000 次，FDR<0.05 作为差异显著性的评价标准。

1.4 免疫组织化学染色（immunohistochemistry，IHC）

调取蜡块，以4 μm 厚切片，脱蜡水化，3% H2O2消除内源性过氧化物酶室温10 min，PBS 冲洗，高温高压抗原修复，PBS 再冲洗，滴加Anti-FAM83D 一抗（Abcam 中国，1∶100 稀释），4℃过夜，PBS 冲洗后二抗室温孵育30 min，PBS 冲洗，DAB 显色，流水冲洗10 min，苏木精复染，脱水、透明，中性树胶封片，光学显微镜观察。FAM83D 阳性染色位于细胞浆，IHC 评分根据染色强度和阳性细胞数来判定，评分标准参照文献[11]。

1.5 统计学方法

通过对维生素B1缺乏症的治疗以及预防，减少了动物的死亡率，节约了养殖成本，降低了因维生素B1缺乏引起的各种神经及心血管症状，能直接提供动物所需的硫胺素，从而达到预防和治疗的目的。

2 结果

2.1 FAM83D 在PAAD 中的表达情况

与FAM83D mRNA 低表达组比较，FAM83D mRNA高表达组总生存期、无进展生存期明显缩短（P<0.01），见图2A～B；并且在KMplot 数据库中得到进一步验证，见图2C～D。

综上所述，通过对脑卒中偏瘫患者进行呼吸肌反馈训练，可以有效地改善患者的呼吸功能障碍，呼吸功能的改善促进了患者的吞咽，患者吞咽功能的改善又进一步改善了患者的呼吸功能，呼吸功能改善与吞咽功能改善就形成了一种良性循环。并且该训练方法简单有效，可以在临床推广应用呼吸肌反馈训练仪对脑卒中偏瘫患者进行呼吸功能的训练。但本研究也存在局限性，比如样本量小，训练时间不够长，同时未对呼吸功能改善与吞咽障碍功能改善的相关性进行进一步探究。以后的研究中会加大样本量，延长训练时间并进一步探究呼吸功能与吞咽功能之间的关系。

表1 FAM83D 蛋白表达与PAAD 临床病理特征的关系[例（%）]

图1 FAM83D 在PAAD 中的表达情况

2.2 FAM83D mRNA 表达与PAAD 患者预后的关系

GEPIA 在线分析显示，与正常组织比较，肿瘤组织中FAM83D mRNA 表达明显升高（P <0.01），见图1A。组织标本分析显示，65.0%（39/60）癌组织中FAM83D 蛋白水平为高表达（IHC 评分≥3 分），而36.7%（22/60）癌旁组织中FAM83D 蛋白水平为高表达；与癌旁组织比较，癌组织IHC 评分显著增高（P <0.01），见图1B～C。进一步分析临床病理参数，PAAD 患者FAM83D 蛋白高表达与淋巴结转移有关（P ＜0.05），与性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤直径、分化程度、TNM 分期无关（P >0.05），见表1。

采用SPSS 16.0 软件进行数据分析，计量资料采用均数±标准差（）表示，组间比较采用t 检验；计数资料用例数和百分率表示，组间比较采用χ2检验；FAM83D表达与患者预后的关系采用Kaplan-Meier生存分析，生存期比较采用Log-rank 检验。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

我国银行进行信贷业务风险分析时，主要方法还是以客户自身信用情况分析为主，对企业所属产业的风险评价重视程度不够，虽然已经有一些银行着手将产业风险分析结合到风险管理工作当中，但对其的认识依旧不够深入，当前的产业风险评价体系还存在着许多问题。

中风属于常见的急性脑血管疾病，存在起病突然的特点，且发生局部灶性神经功能发生缺失，患病之后合并发生多种并发症[1] ，其中吞咽功能障碍较为常见。

图2 FAM83D mRNA 表达与PAAD 患者预后的关系

2.3 FAM83D 基因潜在作用机制

FAM83D 上调与多个基因集呈正相关（P <0.05），如BIDUS_METASTASIS_UP、KEGG_CELL_CYCLE、HALLMARK_GLYCOLYSIS、HALLMARK_DNA_REPAIR、REACTOME_SIGNALING_BY_WNT、JAIN_NFKB_SIGNALING。见图3。

图3 GSEA 分析FAM83D 基因潜在作用机制

3 讨论

近年来，伴随着高通量测序技术的广泛应用以及数据共享机制的不断成熟，以TCGA 和GEO 为代表的国际公共数据库中积累了大规模的多组学肿瘤数据，数据驱动型研究逐渐成为肿瘤生物信息学研究的重要模式[12]。本研究以肿瘤公共数据库和相应的生物信息学技术为基础，通过数据挖掘发现，与正常组织比较，肿瘤组织中FAM83D mRNA 表达显著升高；IHC结果显示癌组织中FAM83D 蛋白呈高表达，且FAM83D蛋白高表达与淋巴结转移有关。提示FAM83D 可作为PAAD 诊断与预后的潜在分子标志物。

FAM83 基因家族共享一个高度保守的N-末端（DUF1669）[13-14]，此结构域不仅具有一定的磷脂酶D 活性以激活表皮生长因子受体（EGFR）[15-16]，还可促进c-Raf 激酶的膜转位激活MAPK 信号通路[17]，参与调控上皮细胞的恶性转变。目前研究[18-21]显示，FAM83D在不同类型的肿瘤中均存在扩增或过表达，但其作用机制尚未明确。FAM83D 上调通过激活Wnt/β-catenin信号传导增强细胞增殖和运动能力，与胃癌的预后不良有关[22]；FAM83D 通过调节非小细胞肺癌的AKT/mTOR 途径促进上皮间质转化，侵袭和顺铂耐药[23]；FAM83D 通过PI3K/AKT/mTOR 途径抑制自噬并促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭[24]；敲除FAM83D 通过抑制FBXW7/Notch-1 信号传导途径调节结直肠癌的增殖，迁移和侵袭[25]。本研究结果显示，FAM83D 上调与多个基因集呈正相关，如BIDUS_METASTASIS_UP、KEGG_CELL_CYCLE、HALLMARK_GLYCOLYSIS、HALLMARK_DNA_REPAIR、REACTOME_SIGNALING_BY_WNT、JAIN_NFKB_SIGNALING。提示FAM83D 参与调节细胞转移、细胞周期、糖酵解、DNA 修复等生物学过程以及WNT、NF-κB 信号通路，具体尚需进一步研究。

综上所述，本研究基于在线数据库的深入挖掘，证实FAM83D 基因在PAAD 发生发展中的重要作用，为进一步实验研究提供了理论依据。