马铃薯病毒病检测结果分析与防治措施

穆艳娥，王明江，邓利爱，胡明彦，王瑞霞

（山西省薯类脱毒中心，太原 030000）

近年来，马铃薯市场需求量逐渐扩大，为确保市场流通的马铃薯质量，必须完善马铃薯病毒病检测体系，既是对消费者负责，又能扩大优质马铃薯种植规模，增加种植户经济收入。

一、病毒病检测目的

了解马铃薯病毒类型，以及各类病毒症状，并根据检测结果分析马铃薯病毒病防控措施。

二、病毒病检测方法

1、检测材料与试剂

检测于2020 年8 月12 日在山西省薯类脱毒中心六楼实验室检测二室进行。

准备不同马铃薯品种的试管苗，包括晋薯16 号15 株、夏波蒂16 株、费乌瑞它15 株、青薯9 号15株、1801-3品种15株、1912-2品种15株、ZXS6-2-7品种15株、XM1-1品种15株、XM1-2品种15株、XM1-6品种15株，存储温度为15～22℃，准备进行病毒X、Y、S、A、M、PLRV 检测[1]。检测试剂盒由北京信达诚勤科技有限公司提供，所需设备为移液枪、酶联仪、洗板机、离心机、天平、恒温箱等。

2、检测方法

配制样品提取缓冲液，之后采集样品，并用天平称取0.3～0.4 g 样品。向采样袋中加入1:10（g/mL）体积样品，提取缓冲液。然后用烧杯隔袋研碎样品，使样品和样品提取缓冲液充分混匀，最后将混合液倒入离心管中编号并离心待用。试剂、酶联板在25℃恒温条件中培养，培养箱中回温0.5 h。0.5 h 后取出酶联板，根据样品数拆分板条，每条4 个样品，并给板条编号。

配置洗液，用洗板机洗3 次，每次约3 min。排空酶联板，按编号依次加入样品，每孔100μL；最后进行病毒阴性对照、阳性对照。酶联板置于4℃黑暗环境，孵育16 h。取出并排空酶联板，用洗液洗板3 次，每次约3 min。配制酶标特异性抗体溶液。排空酶联板，用排枪加入酶标特异性抗体，每孔100μL。将酶联板置于37℃黑暗环境，孵育1 h。取出并排空酶联板，用洗液洗板3 次，每次约3 min。

配制PNPP 溶液。排空酶联板，用排枪加入PNPP，每孔100μL。将酶联板置于黑暗环境下孵育60 min。避免光直射或强光，取出并酶联板，用酶标仪读取病毒数据并记录。

3、检测结果

样品检测数据值大于等于阴性对照值的2 倍，判定为该病毒为阳性（用“+”表示），填制《病毒室内检测结果单》。

三、检测结果分析

1、X（PVX）病毒检测结果

此类病毒症状病叶纹路呈波浪状，轻型花叶。病毒传染载体主要是携带病毒的种薯[2]。使用DAS-ELISA 检测马铃薯X 病毒，将检测结果与阴性结果比对，确定是否存在病毒。

检测中准备不同马铃薯品种的试管苗，因为不同品种马铃薯的病毒感染存在差异，根据试管苗阴性、阳性呈现结果证明病毒存在与否。结果显示，试管苗均为阴性，说明马铃薯无X 病毒。

2、Y（PVY）病毒检测结果

Y 病毒传播途径主要是蚜虫，要掌握蚜虫早期活动以及危害程度，了解Y（PVY）病毒的发病特征，为马铃薯Y（PVY）病毒的防控提供依据。Y 病毒是病毒病的代表，检测工作要保证时效性和准确性。

对试管苗进行DAS-ELISA 检测，同样将检测结果与阴性结果比较，据此得知是否存在Y 病毒。检测发现，试管苗均为阴性，马铃薯苗无Y 病毒。

3、S（PVS）病毒检测结果

此类病毒具有潜隐性，主要在马铃薯花、叶上寄生。由于马铃薯品种各异，所以S 病毒发生率有一定差异性，病症表现也不尽相同。总结发现，多数马铃薯种带S 病毒后，症状表现为叶脉颜色加深，叶色颜色淡化，叶片缩小，叶尖卷起。当蚜虫出现在马铃薯田，或者蚜虫与未感染病毒的马铃薯接触时，会间接传播S 病毒。

检测方式同X、Y 病毒检测法，检测结果表明，约1/5 试管苗携带S 病毒。因此，要有效防控S 病毒，否则会造成马铃薯减少，并且大幅降低马铃薯质量。

4、A（PVA）病毒检测结果

基于马铃薯Y 病毒分离出A 病毒，此类病毒对马铃薯质量、产量有重要影响。A 病毒症状表现为马铃薯叶变黄，并且叶片上出现斑点，叶片光滑度逐渐下降。这类病毒传播方式以蚜虫接触为主，以汁液接触传播为辅。

试管苗进行DAS-ELISA 检测，通过酶联免疫检测仪获取光密度值，并对比试验结果与阴性结果，据此判断试管苗是否携带A 病毒。检测结果显示，试验材料无A 病毒。

5、M（PVM）病毒检测结果

此类病毒又被称为小叶病毒病，传播方式与马铃薯A 病毒传播方式相同。M 病毒会造成马铃薯植株心叶的叶柄长势向上，复叶面积变小，并且叶面光滑度下降，呈非规则状。

试验试管苗经DAS-ELISA 检测，得出光密度值，并对比试验结果，表明马铃薯M 病毒携带率为10%。病毒防控人员需做好准备工作，避免M 病毒传播扩大。

6、PLRV（卷叶病毒）检测结果

卷叶病毒发病部位主要在马铃薯植株上部叶片，小叶底部易感染卷叶病毒。一般来说，病毒感染初期无明显症状，感染末期发现叶片颜色改变，并且块茎薯肉组织坏死。

使用DAS-ELISA 检测法得知试管苗光密度值，检测结果显示，试管苗带卷叶病毒概率为10%，说明马铃薯托脱毒处理工作刻不容缓。

四、防治措施

根据检测结果分析可知，马铃薯携带病毒的类型为PVX、PVY、PVS、PVA、PVM、PLRV。

PVX 病毒载体为种薯，需严格按照质控要求培育薯种，大大降低PVX 病毒发生率。优选马铃薯种，以环境适应性强、品质高、抗病性强为基本选种标准，可以从源头控制病毒病。目前，各地区建立无菌种薯繁育基地，满足无病毒种薯大量采购需求；同时，研发脱毒技术，为脱毒种薯培育提供技术支持。需注意的是，种田地区应具备气温低、纬度高、风速快等特征，这是培育脱毒种薯、无菌种薯的基本条件。当脱毒种苗快速更新，意味着破坏了病毒病累积条件。此外，需坚持科学化种植原则，种植在砂壤土上，且地块灌溉便利、排水良好[3]。选定种植地之后需精细整地，适当施加农家肥，满足马铃薯生长初期的养分需求。

Y（PVY）病毒检测、S（PVS）病毒检测结果显示，蚜虫是病毒传播载体，可通过调整种植密度来防治蚜虫，降低PVY、PVS 等病毒发生率。一般来说，适宜的种植密度为每公顷9.8 万株，采用大行距、小株距播种方式。此外，播种时适当投放防蚜颗粒剂，切断蚜虫携带病毒病的途径。初期发现蚜虫后，每隔6～9 天喷施灭蚜虫药，可使用30%噻虫嗪拌种触杀、胃毒。

根据PLRV（卷叶病毒）检测结果可知，马铃薯植株上部叶片是病毒显现的主要部位，尤其是小叶底部，最易感染卷叶病毒，一旦发现中心病株应及时拔除，并对中心病株50 m 范围内喷施内吸性杀菌剂进行控制，可选用68%精甲霜灵.代森锰锌水分散粒剂(金雷)。确定马铃薯感染病毒病之后，根据发病严重程度相应制定防治措施，避免病毒病扩散。