OsPAL2;3对水稻化感抑制稗草能力的调控作用

李兰兰 母 丹 严 雪 杨陆可 林文雄 方长旬

福建农林大学生命科学学院农业生态研究所 / 福建省农业生态过程与安全监控重点实验室, 福建福州 350002

在稻–稗竞争的自然生态系统中, 一些水稻品种具有抑制稗草生长的特性, 该特性也称为水稻的化感作用, 即水稻通过根系分泌特定的次生化合物抑制邻近杂草生长的化学生态学现象[1-3]。王海斌等[4]在田间小区试验结果显示, 种植不同化感水稻品种的田间小区内的杂草生物量较种植非化感水稻的小区减少32%～60%。徐正浩等[5]研究结果也显示,直播和小苗移栽条件下, 化感水稻品种对无芒稗株高、分蘖和干重均有较好的抑制作用, 且水稻仍保持一定产量水平。由此可见, 种植化感水稻能够控制田间稗草, 从而减少化学除草剂的使用。

稗草(Echinochloa crusgalliL.)为禾本科植物,其与水稻的生长期、株型等生物学性状极为相似, 具有作物拟态特性, 为水田中最难防除的恶性杂草[6]。针对伴生稗草, 化感水稻能够通过调控自身的苯丙氨酸解氨酶基因(OsPAL)、9β-海松-7,15-二烯合酶基因(OsKSL4)、同向柯巴基二磷酸合酶基因(OsCPS4)、momilactone A合酶基因(OsMAS)、类黄酮3’-羟化酶基因(CYP75B3,CYP75B4)等次生代谢不同途径上的关键基因的表达, 分别合成原儿茶酸、香豆酸、肉桂酸、对羟基苯甲酸等酚酸类化合物, 麦黄酮(tricin)、黄酮 O-糖苷等黄酮类化合物, 以及二萜化合物momilactones等抑制稗草生长的化感物质[7-10]。其中, 酚酸类化合物在水稻化感抑草中的作用已有广泛研究[11-22]。自然条件下, 化感水稻中酚酸类化合物含量显著高于非化感水稻品种[23]; Li等[24]测定了化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont培养液中酚酸的含量, 结果发现三到七叶期PI312777培养液中的酚酸含量均极显著高于 Lemont, 其中六叶期最高, 达710 μg 株–1。水稻中酚酸含量与调控酚酸类合成的关键酶——苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的表达水平密切相关; 稗草胁迫、氮素胁迫、茉莉酸和水杨酸信号分子诱导等处理下, 水稻的PAL基因表达增强, 且 PI312777增强表达倍数显著高于Lemont[13-15,25-28]。

水稻基因组中含有9个PAL基因成员, 稗草竞争干扰下化感水稻PI312777中PAL基因家族有8个基因成员上调表达, 而Lemont仅3个基因成员上调表达[29]。基因表达由生物体内反式作用因子(转录因子)作用于顺式作用原件(启动子区域)所决定[30], 通过比较化感水稻和非化感水稻的PAL基因启动子的活性, 从中寻找在化感水稻中转录活性高于非化感水稻的PAL基因成员及其启动子, 有助于深入揭示特定PAL基因成员对水稻化感抑草的调控作用。为此, 本研究通过比较化感水稻PI312777和非化感水稻 Lemont的PAL基因成员的启动子组成序列及活性差异, 揭示在化感水稻中转录水平高的PAL基因成员对水稻化感抑草能力的调控作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料与种植

以国际上公认的化感水稻品种PI312777和非化感水稻品种Lemont为供试材料[12,30]。采用25%次氯酸钠溶液分别对PI312777和Lemont种子表面消毒30 min, 然后无菌水清洗10次, 并置于恒温培养箱中 30℃浸泡过夜, 随后保湿催芽。发芽的水稻种子播于表面悬浮聚乙烯网布的种植盆中, 盆内添加水稻完全营养液, 盆的外表面均匀涂布黑漆以防止营养液中产生绿藻。将种植盆置于人工气候培养箱中培养10 d, 培养条件为28℃下光照培养14 h (光照强度 360 μmol m–2s–1)、22℃下暗培养 10 h, 相对湿度保持 85%左右; 每周更换新鲜营养液, 培养液 pH 5.5～6.0。待水稻长至四叶一心时, 取水稻叶片, 液氮速冻, 用于基因组DNA和总RNA的提取。

1.2 水稻基因组DNA提取及PAL基因启动子克隆与测序

采用植物基因组 DNA提取试剂盒(CW0553S,北京康为世纪生物科技有限公司), 分别提取2个水稻品种叶片的基因组DNA。分别以PAL家族各基因成员的CDS上游3000 bp左右的序列作为该基因启动子的模板序列设计扩增引物(表 1), 采用KOD-Plus (TOYOBO, Japan)高保真酶从PI312777和Lemont的基因组DNA中分别扩增PAL基因成员的启动子DNA片段, 测序比较2种水稻的同一个PAL基因成员启动子的序列组成差异。

1.3 水稻OsPAL2;3启动子活性检测

将启动子与含有报告基因(GFP)的表达载体(pCambia3301)进行融合, 构建重组表达载体, 采用PEG4000介导[31-32]转化方法将OsPAL2;3、OsPAL2;4基因启动子驱动的重组表达载体转化水稻原生质体细胞, 28℃暗培养36 h, 利用激光共聚焦显微镜观察水稻原生质体细胞中绿色荧光蛋白发光情况。

1.4 OsPAL2;3基因克隆及遗传转化水稻

采用 TRIzol试剂(Invitrogen, USA)提取水稻叶片的总 RNA, 逆转录为 cDNA。以OsPAL2;3(Os02g0626600)基因的CDS序列为模板扩增OsPAL2;3基因, 并通过无缝克隆连接到 pCambia-2300-eYFP质粒载体上, 构建OsPAL2;3基因融合eYFP的重组表达载体, 将重组表达载体转化到农杆菌(EHA105)感受态细胞中, 分别遗传转化 PI312777和 Lemont。基因OsPAL2;3的遗传转化采用农杆菌侵染水稻愈伤组织的方法[33-34], 通过遗传霉素G418筛选抗性愈伤, 经分化和脱分化获得过表达OsPAL2;3转基因T0代水稻植株, 收获T0代转基因水稻种子进行萌发, 采用PCR在OsPAL2;3过表达的遗传转化水稻的基因组 DNA中扩增融合OsPAL2;3基因CDS和eYFP序列的DNA片段鉴定重组表达载体的有效转化, 同时采用Western-blotting检测eYFP融合蛋白的表达, 获得T1代阳性转基因水稻幼苗。

表1 本研究中所用到的引物Table 1 Primers used in this study

1.5 qPCR检测过表达 OsPAL2;3转基因PI312777水稻较其野生型株系的基因表达变化

采用TRIzol试剂分别提取过表达OsPAL2;3转基因PI312777及其野生型植株的叶片总RNA, 采用EasyScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)合成 cDNA。qPCR采用 TransStart Green qPCR SuperMix试剂盒(北京全式金生物技术有限公司),利用realplex4荧光定量PCR仪(Eppendorf, Germany),检测OsPAL2;3过表达水稻和野生型PI312777的苯丙氨酸代谢途径中OsPAL2;3、OsC4H、OsCOL、OsOMT、OsCAD五个基因的表达, 以β-actin为内参基因, 采用2−ΔΔCT计算基因在过表达OsPAL2;3的转基因PI312777水稻较其野生型株系的表达变化[35]。

1.6 酚酸类化合物含量测定

分别取 1 g过表达OsPAL2;3的 PI312777和Lemont转基因水稻及其野生型株系叶片, 液氮条件下研磨成粉末, 用50 mL蒸馏水在20℃下浸提24 h,浸提液用 0.22 µm 滤膜过滤, 并用磷酸将滤液调至pH 4.0, 加入NaCl溶液, 使浓度达到8% (w/v)并超声溶解。取经蒸馏水—甲醇—蒸馏水(8 mL–8 mL–5 mL)活化的Cleanert PEP固相萃取小柱(天津博纳艾杰尔科技有限公司)吸附、萃取浸提液中的代谢物,随后加入3 mL超纯水洗脱盐分, 再用8 mL色谱级甲醇洗脱, 收集洗脱液, 冷冻干燥后用色谱级甲醇溶解至500 µL, 测试的每种水稻样本均提取3个重复。采用高效液相色谱法(HPLC)进行对提取的样本中的酚酸化合物进行定量分析, 以对羟基苯甲酸、原儿茶酸、肉桂酸、阿魏酸、香草酸、对香豆酸、丁香酸、水杨酸作为标准酚酸对照样品。HPLC检测采用 Waters e2695型高效液相色谱仪, 色谱柱为ZORBAX Sb-C18 (150.0 mm × 4.6 mm, ID 5 m), 紫外检测器, 酚醛柱; 流动相: B-甲醇(色谱纯)和C-0.1%磷酸溶液(分析纯)、检测波长为 280 nm、流速 1.3 mL min–1、进样量 10 μL、柱温 30℃。

1.7 OsPAL2;3过表达水稻抑草率检测

分别收集过表达OsPAL2;3的转基因 PI312777和Lemont及其野生型植株的根系分泌液, 过滤除杂后加入新鲜配制的水稻完全营养液母液作为不同处理组, 每组中溶液的体积为0.5 L, 以新配制的终浓度与处理组一致的水稻完全营养液为对照组, 将处理组和对照组溶液的pH调至5.5～6.0之间, 每个处理组以及对照组均设6个重复。将生长一致的二叶期稗草种植于上述溶液中, 每个种植罐中种植 6棵,培养 14 d, 测量稗草根长和株高; 随后将每个罐中的稗草置于105℃杀青30 min, 80℃烘干3 d后测定干物质重量, 计算不同处理方式较对照组对稗草生长的抑制率, 其计算公式为IR = (1-TR/CT)×100%。其中, IR (inhibition ratio)为抑制率; TR (treatment)为处理组生长指标; CT (control)为对照组生长指标。

1.8 OsPAL2;3互作蛋白的分离与鉴定

将三叶一心期的过表达OsPAL2;3转基因PI312777与Lemont分别与稗草共培7 d后, 取完全展开的倒二片叶于液氮中速冻, 根据Fang等[36]方法提取水稻叶片的天然活性蛋白, 将天然活性蛋白与GFP-Trap agarose beads (ChromoTek, Germany)进行孵育, 获得 OsPAL2;3的互作蛋白, 采用 Thermo Q-exactive质谱平台进行蛋白鉴定, 并利用 Rice Genome Annotation Project (http://rice.plantbiology.msu.edu/)的水稻蛋白数据库进行同源性比对。

1.9 双分子荧光互补(BiFC)验证OsPAL2;3的蛋白互作

分别克隆OsPAL2;3、ATP合酶 α亚基(ATP synthase subunit alpha)、ATP合酶β亚基(ATP synthase subunit beta)、转酮醇酶(transketolase)、碳酸酐酶(carbonic anhydrase)、果糖 1,6-二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase)基因的CDS, 将这些基因分别与含有黄色荧光蛋白 N端的质体载体pCambia2300-YFPn、含有黄色荧光蛋白 C端的质体载体 pCambia2300-YFPc融合, 构建重组表达载体用于转化烟草进行瞬时表达, 烟草的转化参照Fang等[36]的方法, 在转化后48 h, 利用激光共聚焦显微镜(Leica TCS SP8X DLS)观察烟草叶片的黄色荧光蛋白发光情况, 验证OsPAL2;3与Co-IP获得的蛋白的有效互作。

1.10 统计分析

数据采用DPS软件进行统计分析、相关性分析和回归分析, 应用LSD算法进行显著性差异分析。

2 结果与分析

2.1 PAL家族基因成员启动子序列组成

分别克隆了 PI312777和 Lemont两种水稻的PAL基因家族中7个基因成员(OsPAL2;1,OsPAL2;2,OsPAL2;3,OsPAL2;4,OsPAL4;1,OsPAL4;2,OsPAL11)的CDS序列上游3000 bp左右的片段(图1-a), 分别回收这些启动子DNA片段进行测序, 比较2个水稻品种的同一PAL基因成员的启动子序列组成。结果显示, 2个水稻品种的OsPAL2;1、OsPAL2;2、OsPAL4;1、OsPAL4;2、OsPAL11五个基因成员的启动子序列组成相似度较高, 而OsPAL2;3、OsPAL2;4基因启动子序列差异较大(图1-b)。

2.2 PI312777和 Lemont的OsPAL2;3,OsPAL2;4基因启动子活性差异

分别将 PI312777和 Lemont的OsPAL2;3、OsPAL2;4基因启动子融合GFP的重组表达载体转化水稻原生质体细胞, 通过激光共聚焦显微观察细胞中绿色荧光蛋白的荧光强度, 结果显示OsPAL2;3基因启动子驱动下的 GFP的荧光强度 PI312777明显强于Lemont, 而OsPAL2;4基因启动子驱动的GFP的荧光强度 PI312777略弱于 Lemont (图 2)。由此可见,OsPAL2;3启动子的启动活性PI312777大于Lemont, 而OsPAL2;4基因启动子的活性PI312777略小于Lemont。

2.3 过表达OsPAL2;3转基因水稻的表现

通过构建OsPAL2;3的重组表达载体分别遗传转化PI312777和Lemont, 过表达水稻在经PCR检测重组载体有效遗传转化后, 利用标签蛋白 eYFP的抗体, 对转基因水稻进行 Western-blotting检测,结果在过量表达OsPAL2;3的转基因水稻中检测到OsPAL2;3融合 eYFP蛋白的表达, 在野生型对照植株中未检测到该融合蛋白(图 3-a); 同时采用激光共聚焦显微镜观察转基因水稻根系中 eYFP的荧光情况, 结果也显示在过量表达OsPAL2;3的转基因水稻植株中检测到黄色荧光信号, 而在野生型植株中未检测到该荧光信号(图3-b), 上述结果表明OsPAL2;3重组载体已成功遗传转化水稻且稳定表达。

2.4 过表达OsPAL2;3水稻与野生型株系的苯丙氨酸代谢途径主要基因的表达变化

利用 qPCR检测了苯丙氨酸代谢途径中OsPAL2;3、肉桂酸-4-羟化酶(cinnamate-4-hydroxylase,OsC4H), O-甲基转移酶(O-methyltransferases,OsOMT)、辅酶A连接酶(CoA-ligases,OsCOL)、肉桂醇脱氢酶(cinnamoyl alcohol dehydrogenases,OsCAD)5个基因在过表达OsPAL2;3的转基因PI312777水稻及其野生型株系中的表达差异, 结果显示过量表达OsPAL2;3基因后, 转基因水稻苯丙氨酸代谢途径中的OsPAL2;3、OsC4H、OsOMT、OsCOL、OsCAD基因均较其野生型株系上调表达, 分别为野生型株系的2.44、1.81、1.24、1.36和1.64倍(图 4)。

2.5 过表达OsPAL2;3水稻与野生型株系的酚酸类化合物含量

通过检测过表达OsPAL2;3的转基因PI312777和 Lemont及野生型PI312777和Lemont株系叶片中酚酸化合物的含量, 结果显示, 过量表达OsPAL2;3后, 转基因PI312777和Lemont中的原儿茶酸和香草酸的含量较其各自的野生型株系中的含量有所增加; 此外, 转基因 PI312777中的丁香酸、4-香豆酸的含量较野生型PI312777中的含量也有所增加, 对羟基苯甲酸、阿魏酸、水杨酸和肉桂酸的含量有所下降。转基因 Lemont中的水杨酸的含量较其野生型植株有所增加, 对羟基苯甲酸、丁香酸、4-香豆酸、阿魏酸、肉桂酸在转基因植株中的含量较野生型植株有所降低(表2)。上述结果表明,过量表达OsPAL2;3能提高水稻中部分酚酸类化合物的含量。

2.6 过表达OsPAL2;3水稻及其野生型株系的抑草率

为研究OsPAL2;3基因表达水平对水稻化感抑草作用的影响, 进一步比较过表达OsPAL2;3转基因水稻和野生型株系的抑草率。分别收集过表达OsPAL2;3转基因水稻及其野生型植株的根系分泌液,用于培养稗草, 以不含水稻根系分泌液为对照, 测定稗草株高与根系长度, 发现转基因PI312777的根系分泌液显著抑制稗草的根长和株高(图5)。

表2 OsPAL2;3过表达水稻与野生型植株中的酚酸类化合物的含量Table 2 Contents of phenolic acids in the OsPAL2;3-OX transgenic rice lines and its wild type

测算过表达水稻及其野生型株系对稗草的抑制率, 结果显示, 野生型 PI312777对稗草根长、株高、干重的抑制率分别为 18.73%、14.69%和33.33%; 过表达OsPAL2;3的转基因PI312777对稗草的根长、株高、干重的抑制率达39.31%、15.61%和44.44%。过表达OsPAL2;3明显提高了PI312777对稗草根长和植株干物质重的抑制率。与之相似,野生型Lemont根系分泌物对稗草根长、株高、干重的抑制率分别为12.19%、11.57%和22.22%; 过表达OsPAL2;3的转基因Lemont根系分泌液对稗草的根长、株高、干重的抑制率为8.48%、16.38%和 27.78%, 过表达OsPAL2;3也提高了 Lemont对稗草株高和植株干物质重的抑制率(表3)。通过对比上述结果可见, 过量表达OsPAL2;3能够提高水稻对稗草干物质重的抑制作用, 阻碍稗草的正常生长。

表3 OsPAL2;3转基因水稻及其野生型植株根系分泌液培养的稗草形态指标Table 3 Root length, plant height and dry weigh of barnyardgrass growth in the solution with root exudates from OsPAL2;3-OX transgenic rice and the wild type

2.7 OsPAL2;3的互作蛋白检测

为明确 OsPAL2;3在水稻体内的互作蛋白, 利用基于GFP-Trap的Co-IP体内获得OsPAL2;3的互作蛋白(图 6), 对 OsPAL2;3的互作蛋白进行质谱鉴定, 结果显示 OsPAL2;3可与多个蛋白相互作用, 对其中丰度高的蛋白进行分析发现, OsPAL2;3与核酮糖二磷酸羧化大链前体(ribulose bisphosphate carboxylase large chain precursor)、ATP合酶α亚基(ATP synthase subunit alpha, ATP-synα)、碳酸酐酶(carbonic anhydrase, CA)、ATP合酶β亚基(ATP synthase subunit belta, ATP-synβ)、果糖-二磷酸醛缩酶(fructose-bisphospate aldolase isozyme, FBA)、转酮醇酶(transketolase)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase protein)和脂肪氧合酶(lipoxygenase)等蛋白可能存在互作(表4)。

表4 OsPAL2;3互作蛋白的鉴定结果Table 4 Identification of the proteins interaction with OsPAL2;3

2.8 BiFC验证OsPAL2;3与互作蛋白的有效互作

进一步利用BiFC验证OsPAL2;3与Co-IP获得的蛋白的有效互作, 通过激光共聚焦显微镜进行观察, 结果显示, OsPAL2;3分别与 ATP合酶 α亚基(ATP-synα)、碳酸酐酶(CA)、ATP合酶 β亚基(ATP-synβ)、果糖-二磷酸醛缩酶(FBA)和转酮醇酶(transketolase)共转的烟草叶片中均观察到黄色荧光,这些荧光主要分布在烟草叶肉细胞的细胞质和内质网上, 细胞核上未观察到明显的黄色荧光, 表明OsPAL2;3蛋白与ATP合酶α亚基、碳酸酐酶、ATP合酶β亚基、果糖-二磷酸醛缩酶、转酮醇酶均存在相互作用, 且这种相互作用主要发生在细胞质和内质网上(图 7), 该结果进一步说明 OsPAL2;3与多个蛋白相互作用共同参与苯丙氨酸代谢过程。

3 讨论

酚酸类化合物是水稻化感抑草中的重要化感物质[11-22]。水稻中酚酸的含量与PAL基因的表达水平密切相关, 化感水稻中PAL基因表达丰度明显高于非化感水稻, 其合成与分泌的酚酸类化合物的总量也高于非化感水稻[15,24]。当利用 RNAi技术抑制化感水稻中PAL基因的表达后, 与酚酸类合成相关的下游6个酶对应的编码基因也下调表达、酚酸类化合物含量减少、化感抑草作用显著降低[37]。

水稻中的PAL是一个基因家族, 其基因成员分别位于水稻的2号、4号、5号、11号、12号染色体上[38]。本研究对化感水稻PI312777和非化感水稻Lemont的PAL家族基因成员的启动子进行克隆和测序分析, 结果发现2种水稻的OsPAL2;3和OsPAL2;4基因启动子序列存在较为明显的差异。启动子序列的组成差异使得启动子的活性不同, PI312777的OsPAL2;3基因启动子对绿色荧光蛋白报告基因的转录表达强于 Lemont的OsPAL2;3基因启动子, 而PI312777的OsPAL2;4基因启动子活性则较Lemont的OsPAL2;4基因启动子的活性弱。稗草共培下,PI312777中OsPAL2;3蛋白的表达水平高于Lemont水稻[36]。PI312777中 OsPAL2;3的表达丰度高促使其酚酸含量也较高, 其中原儿茶酸和香草酸在PI312777中的含量显著高于 Lemont; 增强OsPAL2;3的表达后, PI312777和Lemont中这2种酚酸化合物的含量均有所提高, 转基因 PI312777和Lemont水稻较其各自野生型植株对稗草的抑制作用增强, 表明OsPAL2;3可能通过调控苯丙氨酸代谢途径中原儿茶酸和香草酸等酚酸类化合物的含量, 提高水稻的化感抑草能力。化感植物通过自身调控、合成并分泌化感物质进入环境, 并与土壤微生物相互作用, 最终决定对靶标植物的化感作用效应[39-40]。添加不同酚酸至土壤中能显著促进土壤微生物群体数量的增加, 同时土壤中酚酸的浓度逐渐降低, 表明酚酸可与土壤微生物产生相互作用[41]。PI312777水稻根际的黄色粘球菌就能与酚酸类化感物质相互作用, 增强抑草能力, 其中阿魏酸与黄色粘球菌相互作用下的稗草抑制率达 64.82%, 远高于阿魏酸和黄色黏球菌单独作用下的抑制率(34.64%和8.26%)[12]。因此, 过量表达水稻的OsPAL2;3可能通过提高原儿茶酸和香草酸等酚酸类的含量, 并与环境中的相关微生物相互作用, 最终提高抑草能力。抑制PI312777的PAL基因表达后, 水稻的化感抑草能力下降, 根际微生物数量与多样性降低[37]。蛋白与蛋白之间通过相互作用参与代谢催化, PAL酶通过催化苯丙氨酸的脱氨反应, 使 NH3释放出来形成反式肉桂酸[42]。已有的研究显示, OsPAL2;3受到丝裂原活化蛋白激酶 11 (mitogen-activated protein kinase 11, MAPK11)的调控作用[36]。本研究还发现,OsPAL2;3还与ATP合酶α、β亚基、碳酸酐酶、转酮醇酶以及转氨酶等相互作用, 其中, ATP酶是生物体中能量合成的关键酶, 该酶广泛存在于线粒体、叶绿体以及光合细菌中, 在细胞内催化能源物质ATP的合成, 其α亚基的C端结构域能与β亚基相互作用, 而β亚基的C端结构域也能与α亚基相互作用[43], 进而合成ATP, 供OsPAL2;3的催化反应。转酮醇酶催化卡尔文循环(calvin cycle)和氧化戊糖磷酸途径(OPPP)的反应, 并产生赤藻糖-4-磷酸, 这也是从莽草酸途径到苯丙烷代谢的前体物质[44]。碳酸酐酶则催化 CO2与 HCO3−之间的可逆反应, 其可为酚酸合成时的羧化作用提供 CO2[45]。由此可见,OsPAL2;3通过与这些互作蛋白的共同作用, 催化合成酚酸类化合物。

4 结论

化感水稻 PI312777和非化感水稻 Lemont的PAL基因家族的启动子序列组成存在差异, 导致其转录活性不同。PI312777的OsPAL2;3基因启动子的活性高于Lemont中该基因启动子的活性, 过量表达OsPAL2;3基因, 水稻的酚酸类物质含量增加, 化感抑草能力增强, 表明OsPAL2;3能够通过调控水稻的酚酸类化合物合成, 进而调控水稻化感抑草作用。OsPAL2;3与ATP合酶α亚基、ATP合酶β亚基、转酮醇酶、碳酸酐酶、果糖二磷酸醛缩酶、转氨酶等蛋白相互作用, 共同调控苯丙氨酸代谢。OsPAL2;3可作为利用分子遗传育种提高水稻化感抑草潜力的候选基因。