盐沙苑子标准汤剂制备和质量标准研究

袁蒙蒙，许怀礼，徐顶巧，唐志书，刘乃尧，许洪波*

(1.陕西中医药大学/陕西省中药资源产业化省部共建协同创新中心/陕西省创新药物研究中心，陕西 咸阳712083；2.陕西中医药大学药学院，陕西 咸阳 712046)

沙苑子(Astragali complanati semen)为豆科植物扁茎黄芪AstragaluscomplanatusR.Br.的干燥成熟种子[1]，具有补肾壮阳、固精缩尿、养肝明目的功效，始载于《神农本草经》，其药用历史悠久[2]。现代药理研究表明，沙苑子具有养肝明目[3-4]、增强免疫[5]、补肾缩尿[6]、抗癌[7]等功效，可用于治疗肝肾亏虚[8]、白浊带下、头晕目眩，也可利尿涩精[9]、抗氧化[10-11]。沙苑子中主要包含黄酮、皂苷及多糖成分。其中沙苑子总黄酮具有降压降脂[12-13]、保肝[14-15]、抗氧化[16]及抗癌[17-18]等药理作用。沙苑子为临床常用药材，毒性极低，其毒性在100 g/kg以上，是具有广泛药效且无毒的安全药物[19]。

临床处方调查发现，盐沙苑子使用居多，沙苑子药性甘、温，归肝肾经，盐制可引其入肾，能更好地发挥补肾缩尿的作用。中药饮片标准汤剂被用来保障临床治疗时的用药准确性及剂量一致性，使得临床治疗时的用药更加规范和标准[20]。本研究依照《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》中标准汤剂制备的方法，选用3个产区15批沙苑子饮片制备标准汤剂，以沙苑子苷为指标成分，从指标成分定量和整体定性方面评价盐沙苑子标准汤剂质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20XR型高效液相色谱仪和LC-20型在线超高效液相色谱仪(日本岛津公司)；KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FTS-10A型多功能煎药锅(潮州市一壶百饮电器实业有限公司)；CPA2250型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司，精密度0.01 mg)；EYELA N-1100型旋转蒸发仪(东京理化器械株式会社)。

1.2 试药

沙苑子苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111803-201704，含量：99.1%)；盐沙苑子对照药材均从正规检查合格的药厂购进，药材信息见表1；乙腈(色谱纯，霍尼韦尔公司)；纯化水；其余试剂均为分析纯。

表1 盐沙苑子药材信息

2 方法与结果

2.1 盐沙苑子饮片检查

按照《中国药典》2020版盐沙苑子饮片的检查规定，测得15批盐沙苑子含水量为6.72%～9.91%，灰分量为1.20%～4.94%，酸不溶灰分为0.01%～0.04%，结果见表2。以上检查均符合2020版《中国药典》规定，饮片符合标准。

表2 15批盐沙苑子的质量检查

2.2 盐沙苑子饮片中沙苑子苷的含量测定

按照2020年版《中国药典》沙苑子含量测定方法进行检测，沙苑子苷质量分数0.10%～0.18%。结果表明，15批沙苑子饮片均符合《中国药典》对沙苑子的含量测定要求(含沙苑子苷不得少于0.10%)。

2.3 盐沙苑子标准汤剂的制备

取干燥盐沙苑子饮片100 g，以没过饮片的水量浸泡30 min后，用8倍量的水，煎煮30 min，趁热用7号药典筛过滤，保留滤液，再加6倍量的水，继续煎煮30 min，同上方法过滤，合并滤液，浓缩至500 mL浓缩液，即得。

2.4 标准汤剂中沙苑子苷的含量测定

2.4.1 HPLC色谱条件 色谱柱：Agilent 5 TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(21∶79)，等度洗脱30 min，波长：266 nm，柱温：30 ℃，进样量：5 μL，色谱见图1。

A：对照品；B：盐沙苑子标准汤剂图1 盐沙苑子饮片标准汤剂HPLC谱图

2.4.2 供试品溶液的制备 取“2.3”项下的盐沙苑子标准汤剂于10 mL离心管中，5 000 r/min离心5 min，过0.45 μm滤膜，即得。

2.4.3 对照品溶液制备 精密称量9.98 mg沙苑子苷对照品，加60%乙醇定容至25 mL容量瓶中，即得浓度为399.2 μg/mL的沙苑子苷储备液。

2.4.4 线性关系考察 取“2.4.3”项下沙苑子苷对照品溶液，分别进样0.1、0.2、0.5、1、2、3 μL，按“2.4.1”项下方法测定，以对照品含量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。沙苑子苷线性方程为Y=2 472 045.66X-9 655.01，R2=0.999，线性范围0.0 399～1.197 6 mg/mL。

2.4.5 精密度试验 取供试品溶液(S4)按“2.4.1”项下方法进样6次，相对峰面积RSD=0.20%，表明仪器精密度良好。

2.4.6 稳定性试验 取供试品溶液(S4)放置0、2、4、8、12、24 h后按“2.4.1”项下方法测定，24 h内相对峰面积RSD=0.11%，表明此样品在24 h内稳定。

2.4.7 重复性试验 按“2.4.2”项下方法平行制备6份供试品溶液(S4)，按“2.4.1”项下方法测定，相对峰面积RSD=0.71%，表明实验方法重复性良好。

2.4.8 加样回收试验 精密量取已知沙苑子苷含量的供试品溶液(S4)6份，加入沙苑子苷对照品适量，混匀按照供试品制备方法制备，记录峰面积，计算其平均回收率为102.8%，RSD=0.93%，表明该方法可用于沙苑子苷的含量测定。

2.4.9 样品测定 按“2.4.1”项下条件对15批盐沙苑子标准汤剂进行含量测定，记录沙苑子苷的峰面积，计算沙苑子苷含量。

2.5 过程稳定性评价指标参数的设定

通过“2.3”项下方法制备标准汤剂，出膏率量取标准汤剂10 mL，干燥，称定浸膏质量，计算出膏率，见表3。结果表明，15批样品的出膏率范围为10.52%～17.70%，平均值为15.47%。

转移率=m/M×100%，其中，m表示16 g药材按照标准汤剂方法提取的沙苑子苷的量(mg)，M表示1 g药材按照药典方法提取出的沙苑子苷的量(mg)，结果见表3，转移率范围为42.94%～81.22%，平均值为60.10%。

表3 盐沙苑子标准汤剂含量测定

2.6 UPLC指纹图谱分析

2.6.1 UPLC色谱条件 Thermo Fisher Scientific Accucore C18色谱柱(2.1 mm×100 mm，2.5 μm)流动相为0.1%磷酸水(A)-乙腈(B)；柱温为30 ℃；流速为0.4 mL/min；进样量为5 μL。

A：对照品；B：盐沙苑子标准汤剂。图2 盐沙苑子标准汤剂指纹图谱

2.6.2 精密度试验 取供试样品(S2)按“2.6.1”项下方法进样6次，用相似度评价软件计算色谱图的相似度。相对峰面积RSD=0.81%，相似度均大于0.9，表明仪器精密度良好。

2.6.3 重复性试验 取同一标准汤剂(S2)按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，按“2.6.1”项下方法测定，相对峰面积RSD=0.10%，相似度均大于0.9，表明该方法重现性较好。

2.6.4 稳定性试验 取供试品溶液(S2)放置0、2、4、8、12、24 h后按“2.6.1”项下方法测定，相对峰面积RSD=1.71%，相似度均大于0.9，表明样品24 h内稳定。

2.6.5 UPLC指纹图谱采集 按“2.6.1”项下方法，采集15批盐沙苑子标准汤剂UPLC指纹图谱，利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A)”进行色谱峰匹配，计算相似度，结果表明，15批标准汤剂与对照谱图的相似度均大于0.98，符合中药指纹图谱要求。

图3 15批盐沙苑子饮片标准汤剂指纹图谱

2.7 质谱指认

2.7.1 质谱条件 采用SCIEX Triple TOFTM5600+质谱仪，DuoSprayTM离子源，离子化模式为正、负离子，离子源温度500 ℃，脱溶剂气体为高纯度氮气，扫描范围m/z为100～2 000。

2.7.2 色谱峰的指认 取供试品溶液5 μL注入SCIEX Triple TOFTM5600+/MS系统，按“2.6.1”项下条件运行，记录数据，采用Analyst TF 1.7.1软件对总离子流图进行处理和分析，比对精确相对分子质量，保留时间，特征碎片峰，已建立的数据库和文献[21-23]，推测共有峰的化合物结构。结果见表5，质谱总离子流见图4，化合物结构见图5。

表4 15批盐沙苑子饮片标准汤剂指纹图谱相似度

A：正离子模式；B：负离子模式图4 沙苑子标准汤剂的质谱总离子流

图5 盐沙苑子标准汤剂指纹图谱中指认的化学结构

表5 正、负离子模式下盐沙苑子标准汤剂共有指纹峰的鉴定

3 讨论

沙苑子中含有黄酮、三萜皂苷类化合物，黄酮类化合物是其主要的有效成分，沙苑子苷是主要的生物活性成分之一，具有保护肝细胞、抑制肝纤维化的作用[24]，故本试验选取沙苑子苷为指标性成分，结果表明，不同批次和不同产地的沙苑子苷含量均符合要求，标准汤剂中沙苑子苷转移率为42.94%～81.22%，平均值为60.10%，在266 nm下的质谱结果显示，13个成分中以黄酮和皂苷为主，表明该波长下的图谱科学可靠，能反映沙苑子标准汤剂的主要成分。

本研究筛选了沙苑子3个主产地(陕西、河北、四川)的样品，每个产地各5批，样品具有代表性。试验中采用标准化工艺制备盐沙苑子标准汤剂，标准汤剂的质量控制主要体现在：①药材选择均来自沙苑子的主产区，实验前对药材进行了检测，符合药典规定；②制备工艺符合相关技术要求中标准汤剂制备的方法；③采用指纹图谱和沙苑子苷含量测定相结合的方式评价标准汤剂的质量，并结合质谱指认，推断其共有峰，从化学轮廓和指标成分定量标定了盐沙苑子标准汤剂的特征，为盐沙苑子标准汤剂的制备和质量控制提供参考。