不同产地、生长周期丹参中丹参酮类成分含量研究

王隽，李萍，蒲思婧

(成都市中西医结合医院，四川 成都 610041)

中药丹参属于唇形科鼠尾草属植物，其干燥的根、茎入药，为《中华人民共和国药典》2015年版中收载药物[1]。丹参归心、肝经，味苦，性微寒；具活血凉血、化瘀消痈、清心去烦、调经止痛等功效，多用于胸痹心痛、心烦失眠等症的治疗中，是临床上广泛应用的中药材[2-4]。丹参以脂溶性菲醌类衍生物丹参酮类化合物及水溶性酚酸类化合物为主要有效成分，丹参酮类化合物具有消炎、抗菌、抗肿瘤等功效，酚酸类化合物则具有护肝、保心、抗氧化等功效[5-7]，主要包括丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ与隐丹参酮，其中以丹参酮ⅡA为主要代表[8]。

不同产地、不同植株生长周期对于丹参主要成分丹参酮类化合物含量具有一定影响。本研究对不同产地、不同生长周期丹参中的丹参酮类成分的含量进行检测研究，旨在为临床药材选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验仪器与材料

高效液相色谱仪(HPLC)与超高效液相色谱仪(UHPLC)系统购自美国赛默飞公司，AY-120-Z型、AUW-120D型电子天平购自日本岛津公司，EYG-3011型超声波清洗器购自北京宇翔公司。丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ对照品均购自北京普天同创生物科技有限公司，纯度≥98%。乙腈(色谱纯)，磷酸为(优级纯)，甲醇(分析纯)均购自上海德诺化工公司。各丹参样品见表1。

表1 检测丹参样品明细

1.2 方法

1.2.1混合对照品溶液的制备 精密称取丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成质量浓度分别为38.20、49.82、 54.40 μg/mL的混合对照品溶液。

1.2.2供试品溶液的制备 取丹参片样品适量，糖衣片除去糖衣，研细，精密称取1 g，置于具塞锥形瓶中， 加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min(功率280 W，频率40 kHz)，放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜滤过。

1.2.3阴性样品溶液的制备 取缺丹参的阴性样品， 按照1.2.2方法制得阴性样品溶液。

1.2.4色谱条件检测 色谱条件检测器为二极管阵列；流动相：乙腈为流动相A，浓度0.02%磷酸溶液为流动相B；色谱柱条件：Waters C18、4.6×200 mm，柱温为20 ℃，检测波长为270 nm，总流速为1 mL/min。对照品依次量取对照品溶液0.25、0.5、1、1.5、2.5、5 mL，均置入10 mL容量瓶内，以甲醇定容，经超声处理5 min；各溶液依次进样至色谱仪检测峰面积。重复试验吸取10 μL供试品溶液，进样入色谱仪中检测峰面积，连续进样6次，经检测丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的峰面积RSD依次为0.169%、0.234%、0.144%，说明检测方法重复性理想。

1.2.5精密度试验 吸取10 μL供试品溶液，连续进样5次，测定色谱峰面积；结果表明丹参酮ⅡA的RSD为0.143%、丹参酮Ⅰ的RSD为0.231%、隐丹参酮RSD为0.169%，说明精密度理想。

1.2.6稳定性试验 吸取10 μL供试品溶液，于室温条件下静置0、1、2、4、8、12、24、36 h，分别加入至液相色谱仪检测；丹参酮ⅡA峰面积、丹参酮Ⅰ峰面积、隐丹参酮峰面积的RSD依次为0.799%、0.502%、0.904%，说明供试品溶液于室温下静置36 h内稳定性理想。

1.2.7加样回收试验 精密称取丹参片样品适量，6份，每份0.55 g，置于具塞锥形瓶中，分别加入丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮ⅡA质量浓度分别为38.20，49.82和54.4 μg/mL的对照品溶液10 mL，再精密加入甲醇50 mL，按照1.2.2方法制备供试品溶液，进样10 mL测定。各溶液均取10 μL以色谱仪检测，获取色谱图并计算回收率。丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的平均回收率分别为100.0%，99.9%和99.9%，RSD值分别为0，0.30%和0.21%，回收率良好。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 加样回收试验结果

平均加样回收率为95.681%，见表2。

表2 加样回收试验结果

2.2 丹参酮类成分含量

总丹参酮含量从高至低前三位依次为山东潍坊1年生、山东莱芜1年生、山东泗水1年生的丹参，各产地丹参均为1年生丹参中总丹参酮含量最高，见表3；各样品丹参酮类成分含量柱状图见图1。

图1 不同样品中丹参酮类成分含量柱状图

表3 不同样品中丹参酮类成分含量(%)

2.3 不同生长周期丹参酮含量

各产地不同生长周期丹参中平均隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、总丹参酮含量比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；1年生平均总丹参酮含量为(0.74±0.34)%，2年生为(0.35±0.17)%，3年生为(0.19±0.08)%，两两对比结果显示，1年生高于2年生、3年生(P<0.05)，2年生与3年生比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4，5。

表4 各产地不同生长周期丹参中平均丹参酮含量对比

表5 不同生长周期丹参中平均丹参酮含量两两比较结果

3 讨 论

丹参是中医常用的大宗药材，始见于《神农本草经》，该书将其列为活血药物之上品[9，10]。现代药理研究认为，丹参具有抗炎、灭菌、抗肿瘤以及免疫调节等诸多功效[11，12]。目前，临床上以丹参为主药的方剂包括丹参饮、丹参滴丸、复方丹参片等。脂溶性丹参酮类与水溶性丹酚酸类是丹参的主要有效成分，其中丹参酮主要包括丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮等，是评估丹参药材品质的重要指标。

丹参在我国的种植范围较广泛，山东是主产区之一，河北、河南、四川、安徽等地也有种植，不同产地的丹参其丹参酮含量有较大差异[13，14]，且随着生长周期的延长，其含量变化也呈现差异性。本研究不同产地、不同生长周期的丹参中的丹参酮类成分含量进行了检测，结果表明，总丹参酮含量从高至低前三位依次为山东潍坊1年生、山东莱芜1年生、山东泗水1年生的丹参，这一研究结果与刘伟等[15]的研究结论相符，这也提示在临床用药中应尽量选择上述3个产地的1年生丹参药材。

本研究结果还显示，1年生各产地平均总丹参酮含量为(0.74±0.34)%，2年生为(0.35±0.17)%，3年生为(0.19±0.08)%，各产地均为1年生丹参中的总丹参酮含量最高，2年生与3年生丹参有效成分无统计学差异，但均低于1年生丹参，这表明随着丹参植株生产周期的延长，其有效成分含量出现递减，因此我们认为，临床用药还应考虑丹参生长周期因素，以提高用药的精准性，如无1年生丹参时应通过加大剂量或延长总用药时间以达到治疗要求。