探讨外院会诊玻片行全自动免疫组化仪染色异常的优化方法

脱 颖，梁英杰

免疫组化技术可以检测细胞来源、辨认细胞产物及了解分化程度等，为病理诊断和鉴别诊断提供客观依据，并为疾病治疗提供指导。在精准医疗时代，全自动免疫组化仪以其自动化程度高、操作简便、染色流程标准化等特点，在病理科广泛应用[1-2]。但全自动免疫组化仪染色也会遇到组织玻片非特异染色、染色偏弱或无法着色等问题[3]，其中以外院送检的会诊组织在罗氏Ventana免疫组化染色时最为常见。常规处理方法是对组织玻片进行脱脂奶粉浸泡，但并不能完全解决问题。本科室通过增加二甲苯脱蜡、重复抗原修复及更换免疫组化染色仪的方法，对会诊组织染色异常的切片进行优化，取得理想效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集2021年1～4月中山大学附属第一医院病理科异常染色的组织玻片30例，分别行免疫组化染色检测HER-2/NEU、Rb、Ki-67的表达。免疫组化染色仪：Ventana Benchmark XT(罗氏公司)，Leica BOND Ⅲ(Leica公司)、DAKO Omnis(DAKO公司)；二抗检测显色系统均为各公司机器配套试剂。

1.2 方法(1)二甲苯预处理组：用常规10%的脱脂奶粉溶液浸泡30 min前，增加二甲苯脱蜡环节(5 min×3次)，蒸馏水冲洗后上机，行HER-2/NEU染色。(2)重复仪器修复环节组：手工滴加抗体见油膜下沉，抗体无法充分覆盖组织，停止运行。将组织玻片重新上机，重复自动化染色仪脱蜡热修复环节，行Rb蛋白染色。(3)更换免疫组化染色仪组：在Leica BOND Ⅲ、DAKO Omnis全自动免疫组化染色仪行Ki-67染色。组织玻片拷片65 ℃，60 min。Ventana免疫组化染色仪选择HER-2/NEU、Rb蛋白、Ki-67染色后，运行修复染色；Leica BOND Ⅲ、DAKO Omnis分别选择Ki-67染色后，运行修复染色。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2 结果

2.1 二甲苯预处理组未经处理的会诊组织玻片，HER-2/NEU在Ventana染色平台上染色异常，呈胞质非特异阳性，甚至核未着色(图1A)。若只经牛奶浸泡，免疫组化染色仪染色后只改善苏木精复染细胞核着色，HER-2/NEU仍呈阴性(图1B)。增加二甲苯脱蜡，会诊组织染色效果佳，HER-2/NEU阳性，与原送检单位染色结果一致(图1C)。

2.2 重复仪器修复环节组未经处理的会诊组织玻片，Rb蛋白在Ventana染色平台上染色呈阴性(图2A)。抗体未完全覆盖组织，停止染色并在Ventana平台重新上机，重复自动化染色仪脱蜡热修复环节，Rb蛋白染色呈阳性(图2B)。

2.3 更换免疫组化染色仪组未经处理的会诊组织玻片，Ki-67在Ventana染色平台上染色呈弱阳性，基底细胞只有极少量阳性(图3A)；更换为DAKO Omnis、Leica BOND Ⅲ全自动免疫组化染色平台，染色效果明显改善，Ki-67呈阳性(图3B)。

①A①B①C②A②B③A③B

3 讨论

全自动免疫组化仪染色由于其自动化程度高、操作简便、染色流程标准化等优点，已成为各病理科常规配置。染色过程中会出现对照组织染色佳，但待检组织染色结果与原单位送检结果不一致，或组织内对照染色阴性及偏弱现象。文献报道除浸泡奶粉溶液外[4-5]，并未见其他相应的处理措施。

本科室对部分会诊“问题组织玻片”的相同品牌玻片，加贴本院组织制片，在Ventana免疫组化平台进行组织染色后发现结果正常，提示异常染色并不完全是玻片问题。原因可能是由于会诊“问题玻片”的原单位组织脱水流程不佳或组织蜡块质量层次不齐，机器自带的脱蜡液对会诊组织脱蜡不彻底，使组织玻片上残留油污或油泡等物质，产生亲油现象使油膜下沉，导致抗体分布不均匀，阻碍抗原抗体结合，造成部分未处理会诊玻片较难获得理想染色[5-6]。日常实验中，奶粉浸泡只是增加玻片亲水性，使正电荷分布更均匀，并不能彻底解决问题。

本科室通过对三种染色平台的会诊组织染色效果的长期观察，发现Leica及DAKO公司的免疫组化染色平台较少有组织玻片出现类似Ventana染色平台非特异染色现象。文献报道，部分外院组织玻片染色前不处理也能获得到良好的染色，但为了保证各染色平台的染色结果一致性，应尽量避开含油性试剂的Ventana染色仪[8-9]。如某些医院仅有Ventana染色平台时，应在染色前增加二甲苯上机前处理及后续全自动免疫组化仪脱蜡和修复多重环节，可达到理想染色效果。其操作简单易行，经本科室长期验证均取得良好效果，值得推广。