菊花筒储存法在生殖中心胚胎冻存管理中的应用

李明明，熊豪森，丁媛

(郑州大学第一附属医院 生殖医学中心，河南 郑州 450052)

胚胎冷冻保存是指将胚胎放置于-196 ℃的液氮环境中保存，使细胞新陈代谢和分裂暂时停止，从而达到长期保存的目的[1-2]。近年来，随着体外受精-胚胎移植周期数的不断增长，以及促排卵方案和实验室技术的改善，加之对于生育力保存的重视、避免IVF的并发症和一些特殊技术的需要，使得冷冻胚胎数量不断增加[3-5]，占用各生殖中心大量的医疗资源(液氮、液氮罐、冷冻室面积等)。郑州大学第一附属医院生殖医学中心始建于1997年，包括新老两个院区，设立有3个培养室(培养室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，至目前已使用近百个液氮罐。随着胚胎冻存空间的日趋饱和及编排冷冻位置的复杂化，给辅助生殖中心的实际工作带来了一定的难题，胚胎冻存管理已经成为生殖中心日常工作的重要组成部分[6]。在护理人力配备未增加的情况下，如何优质高效完善胚胎冻存管理显得尤为重要。为解决上述问题，郑州大学第一附属医院生殖医学中心自2016年12月4日开始引进菊花筒代替常规铝制支架用于装载冷冻载杆，探讨其效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料郑州大学第一附属医院生殖医学中心实验室责任护士共3名，其中本科2名，硕士1名，职称均为主管护师，工龄>9 a且熟练掌握实验室冷冻载杆编杆原则及方法。本研究选取2016年1月5日至2021年1月26日在郑州大学第一附属医院生殖医学中心培养室Ⅰ所使用的液氮罐(编号28-43)中提篮为研究对象。纳入标准：装载载杆从空至满连续使用的铝制支架/菊花筒提篮。排除标准：经整理旧液氮罐，由菊花筒替换原有铝制支架再次使用的提篮(菊花筒内含原来铝制支架中的冷冻载杆)。最后符合标准的提篮共124提，其中铝制支架占58提，菊花筒占66提。收集每提容纳载杆数及平均每次编排冷冻位置时间。

1.2 储存方法

1.2.1铝制支架储存法 (1)特点。借助铝制支架加套管的储存单元来存放载杆[7]，每一套管能放置5根左右载杆(不同患者可用不同颜色载杆区分，载杆尾端粘贴含患者信息的冷冻标签)。见图1A～1B。每提篮可放置23个左右支架，见图1C。使用前将医用橡皮膏胶布裁剪出适当大小，粘贴在支架头端，用圆珠笔或中性笔在胶布上标记支架编号(编号顺序为：A1、B1、C1……X1、Y1、Z1，A2、B2、C2……X2、Y2、Z2，A3、B3、C3……X3、Y3、Z3……)。如患者冻存胚胎数较多，需使用2个或2个以上支架，可在每个支架编号后依次加入数字①、②、③……，如P355①、P355②。每提篮最终放置支架数量及每支架编号数字均不固定，前者与支架排列方向及位置相关，后者与患者胚胎形成及冻存数量相关，故不适宜提前设置EXCEL表格进行胚胎冷冻位置编辑。(2)编排步骤。由实验室责任护士严格按照铝制支架使用标准操作程序进行编排。①将当日需冻胚患者基本信息(姓名、年龄、病历号、受精方式、捡卵日期、冷冻日期、胚胎级别等)登记到胚胎冷冻保存位置本。②对患者胚胎存放位置及使用支架进行编号，将冷冻信息(载杆数、冷冻罐号、提篮号、支架号/筒色、载杆颜色等)登记在胚胎冷冻保存位置本。③标记铝制支架编号。如编号为首次使用，将支架头端粘贴橡皮膏胶布并用圆珠笔或中性笔写上编号。如支架编号非首次使用(即液氮罐中存在粘贴橡皮膏胶布的对应编号支架)，可直接用记号笔在支架头端标记编号(无需再粘贴胶布)，作为中转支架临时装载载杆，待冻胚放入液氮罐对应提篮及粘贴橡皮膏胶布的支架套管中，取出临时支架，放入储物筐集中擦洗后可再次使用。

A为冷冻标签及载杆；B为铝制支架结构；C为液氮罐提篮中的铝制支架。

1.2.2菊花筒储存法 (1)特点。菊花筒是由白色筒杯(外层)、11种不同颜色的扇环形管(中间层)和白色圆柱状管(内层)组成，11种不同颜色的扇环形管颜色为共同认知的黑、绿、棕、蓝、青、紫、黄、橙、粉、灰、红，见图2A。每个扇环形管可放置15根左右载杆(不同患者可用不同颜色载杆区分，载杆尾端粘贴含患者信息的冷冻标签)。每个提篮可上下放置2层菊花筒，使用时先在提篮内放置一菊花筒，满载后，再放另一菊花筒置于上层。防止菊花筒存放位置混淆，可在每个菊花筒启用时，用记号笔在菊花筒最外层白色筒杯位置标记存放位置，例如：“I-35-1-上”代表培养室I中35号液氮罐的第1提篮上层扇环形管位置，见图2B～2C。实验室人员取放载杆时，可使用持物钳将菊花筒临时放入可移动液氮盒内，集中取放载杆结束后，再将菊花筒进行归位。因菊花筒扇环形管位置及数量固定，可将菊花筒胚胎冷冻位置制作成EXCEL表格。(2)编排步骤。由实验室责任护士严格按照菊花筒使用标准操作程序进行编排。①方法同铝制支架储存法。②打开菊花筒存放位置及用量EXCEL表格，根据扇环形管颜色(筒色)、载杆颜色、剩余空间数等编辑冻胚位置，同时将冷冻信息登记在胚胎冷冻保存位置本。

A为菊花筒结构；B为菊花筒存放位置标识；C为液氮罐提篮中的菊花筒。

1.3 观察指标及评价标准

1.3.1容纳冷冻载杆数 郑州大学第一附属医院生殖医学中心2016年1月5日及2016年12月3日冻胚使用铝制支架储存法，每提所容纳载杆数通过培养室胚胎冷冻保存位置本进行登记。2016年12月4日至2021年1月26日使用菊花筒储存法，在EXCEL表中设置固定格式，将每日所用载杆数填入表格，自动计算，最后将上下两层菊花筒载杆数相加即为每提篮总数。

1.3.2编排冷冻位置时间 由负责编排冷冻位置的责任护士记录每提篮从空至满使用天数及每日编排冷冻位置用时，如当日使用2个提篮盛放支架/菊花筒(先用的提篮满载，需重新启用另一提篮)，则将上述两项数据均记录在当日编排冷冻位置较多的提篮。因每提篮使用天数不同，本研究取每提篮每日编排冷冻位置用时平均值(以下简称平均值)作为观察指标。具体过程如下。(1)铝制支架储存法。从责任护士开始编排当日第1例患者冷冻信息计时，至所有患者冷冻信息编排结束及所使用铝制支架(含粘贴橡皮膏胶布和未粘贴橡皮膏胶布两种支架)编号标记完为止，连续记录至各提篮满载。(2)菊花筒储存法。从责任护士开始编排当日第1例患者冷冻信息计时，至所有患者冷冻信息编排结束并在菊花筒存放位置及用量EXCEL表格登记完为止，连续记录至各提篮满载。(3)数据计算。每提篮每日编排冷冻位置用时总和除以每提篮使用天数为平均值，以min为单位。

2 结果

菊花筒储存组每提载杆数多于铝制支架储存组，每次编排冷冻位置平均用时短于铝制支架储存组(P<0.05)。见表1。

表1 两种方法每提篮容纳载杆数和每次编排冷冻位置平均用时比较

3 讨论

研究结果显示，菊花筒容纳载杆数约是铝制支架的2.7倍(均满载)。随着体外受精-胚胎移植周期数的不断增长，冷冻胚胎数量的增加，菊花筒储存法在空间利用度和容纳载杆数等方面优势日趋显著。自2016年12月4日起，除新增液氮罐全部配备菊花筒外，本中心对旧液氮罐中已经多次进行胚胎冻融解冻移植的提篮，逐步使用菊花筒替换铝制支架，即选取菊花筒下层部分扇环形管用于存放之前剩余胚胎，下层其余扇环形管以及上层全部扇环形管均可再次放置新冷冻胚胎载杆。利用菊花筒替换铝制支架，2019—2020年新冻胚胎大部分存放在旧液氮罐中，节减了近2 a的液氮罐使用量，延缓了冷冻室面积饱和进程。

从表1可以看出，菊花筒储存法编排冷冻位置用时少于铝制支架储存法。使用铝制支架储存法，因每一支架容纳载杆数较少(一般不超过5根)，缓存空间较小。责任护士在编排冷冻位置时，不仅要登记患者第3天冷冻胚胎个数及载杆数，还要根据第3天胚胎质量，预测第5天或第6天可能形成囊胚数，耗时较长。另外随着促排卵方案和实验室技术的改进[8-9]，很多患者冻存胚胎数较多，多数患者胚胎需使用2个或2个以上支架装载载杆，即同一天需使用多个编号才能完成胚胎位置存放。护理人员在为每个支架粘贴橡皮膏胶布时，手工操作较多，需使用较长时间。使用菊花筒储存法，每个扇环形管最多可容纳19根载杆，缓存空间较大。编排位置时，同一扇环形管可放置多例患者的胚胎冷冻载杆，节省了护理人员频繁寻找冷冻位置时间。另外，菊花筒是成品，首次使用前已将所需筒杯放入提篮内，编排位置时可直接根据EXCEL表进行编辑，无需手工操作。每筒容纳载杆数、载杆颜色及剩余空间数等直观可视。

传统的铝制支架和套管组合的方式进行存储时，确定罐号和提篮号后，需在整个提篮内查找相应支架编号，且随着胚胎冻存时间的延长，铝制支架头端的橡皮膏胶布字迹会逐渐变浅，使实验室人员在查询或挑选胚胎时耗时较长。另外如提篮中存放支架较多，挑选胚胎时铝制支架凹槽面容易将临近支架带出，给工作带来不便。菊花筒扇环形管均匀排列于筒杯内侧并由中心白色圆柱状管固定，各接触面平滑且位置固定。因容纳载杆数较多，同一患者冻胚均存放在相同扇环形管内。根据详细位置标识，查找时可直接定位至最后一级位置，即冷冻载杆的颜色和患者信息标识。在实际操作过程中，不仅容易查找患者胚胎，且规避带出其他位置冷冻载杆。

综上，相较于铝制支架储存法，菊花筒储存法在空间利用和胚胎冻存管理方面有较大优势，可有效改善胚胎冻存空间压力，减少液氮罐用量，节约冷冻室面积，缩短护理人员的有效工作时间，提高工作效率，在实际临床操作中更加安全、便利，更适用于胚胎库的管理和实现自动化管理。