HOXD9和PTEN在结直肠癌中的表达及临床意义

刘秀华，杨韵，杜永媚

厦门市海沧医院病理科 (福建厦门 361000)

随着对肿瘤发病机制的深入研究，分子靶向治疗有望成为肿瘤的根治方法，并越来越受到国内外学者的关注，且寻找合适的靶点已经成为肿瘤研究的重点。有研究证明，HOXD9在人类多种肿瘤中呈高表达[1-3]，同时HOXD9的高表达还可能与肿瘤的侵袭、转移及进展密切相关[4-5]。P13K/AKT信号传导通路在多种肿瘤的侵袭转移过程中发挥重要作用，其下游重要的负调控因子PTEN在多种肿瘤中表达缺失[6]，与肿瘤的侵袭转移密切相关[7]。鉴于此，本研究通过免疫组织化学法检测HOXD9和PTEN在结直肠癌中的表达，探讨其临床病理意义及在结直肠癌转移过程中的作用，以期为结直肠癌的分子靶向治疗提供新的靶点，现报道如下。

1 材料与方法

1.1一般材料

收集2015年1月至2020年5月我院病理科存档的正常结直肠组织(结直肠癌切除标本的阴性切缘)30例和浸润至结直肠浆膜层癌组织154例[年龄46～79岁；男86例，女68例；淋巴结转移79例，无淋巴结转移75例；病理分级(WHO 2010版结直肠癌分级)，Ⅰ级21例，Ⅱ级89例，Ⅲ级44例]。所有组织病例在取材前均未接受放化疗、免疫及分子靶向治疗。

1.2试剂

浓缩型兔抗人HOXD9单克隆抗体(购自Bioss公司)、浓缩型鼠抗人PTEN单克隆抗体(购自Bioss公司)、EnVision免疫组化反应试剂盒(购自北京中杉金桥生物技术公司)。

1.3方法

选取组织切片，于显微镜下定位，在对应蜡块位置采集芯片组织并放置于芯片模具内，2次包埋后制成组织芯片微阵列，3 μm连续切片，采用免疫组织化学EnVision两步法染色，抗HOXD9一抗工作浓度为1︰500，抗PTEN工作浓度为1︰300，PBS代替一抗做阴性对照，严格按照试剂盒说明书完成染色步骤。

1.4结果判断

HOXD9阳性定位于细胞质中，出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每例组织随机计数500个以上细胞，阳性细胞数<10%记为阴性，≥10%记为阳性；PTEN阳性表达定位于细胞核，结果判读同上。

1.5统计学处理

采用SPSS 16.0统计软件进行数据处理，相关性采用Pearson相关分析，检验水准α=0.05，计数资料以率表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

HOXD9和PTEN免疫组化染色如图1～2所示。HOXD9在正常结直肠组织中阳性表达率低于浸润至结直肠浆膜层癌组织，差异有统计学意义(P<0.05)；组织分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性表达率逐渐增加，差异有统计学意义(P<0.05)；HOXD9在淋巴结转移组阳性表达率高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1～2。PTEN在正常结直肠组织中阳性表达率高于浸润至结直肠浆膜层癌组织，差异有统计学意义(P<0.05)；组织分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性表达率逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)；PTEN在淋巴结转移组阳性表达率低于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1～2。HOXD9的表达与PTEN的表达呈负相关(rs=-3.128，P<0.05)，见表3。

表1 HOXD9和PTEN在结直肠癌中的表达

表2 HOXD9和PTEN在浸润至结直肠浆膜层癌组织的表达

表3 HOXD9和PTEN在结直肠癌中表达的相关性

3 讨论

3.1HOXD9的表达与结直肠癌侵袭转移的关系

本研究结果显示，HOXD9在正常结直肠组织中阳性表达低于浸润至结直肠浆膜层癌组织，差异有统计学意义(P<0.05)；组织分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性表达率逐渐增加，差异有统计学意义(P<0.05)；HOXD9在淋巴结转移组阳性表达率高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P<0.05)，表明HOXD9参与结直肠癌的发生、发展以及肿瘤的侵袭转移过程。Liu等[8]通过组织实验、细胞培养等体内外研究发现，相较于正常结直肠组织，HOXD9在结直肠癌组织中呈高表达，且与组织分化、淋巴结转移等密切相关，其高表达提示预后差。Lin等[4]同样通过体内外实验研究发现，HOXD9在胃癌组织中呈高表达，通过敲除HOXD9可以有效地抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。本研究结果与上述研究结果均相符，表明HOXD9参与肿瘤的侵袭转移过程，其高表达能促进肿瘤的侵袭转移并预示患者预后不良。

3.2PTEN的表达与结直肠癌侵袭转移的关系

随着临床对肿瘤发病机制的深入研究，有研究表明，P13K/AKT信号传导通路在多种肿瘤的侵袭、转移、上皮间质转化等过程中发挥重要作用，其下游重要的负调控因子PTEN在多种肿瘤中表达缺失，参与肿瘤的发生、发展过程[9]。本研究结果显示，PTEN在正常结直肠组织中阳性表达率高于浸润至结直肠浆膜层癌组织，差异有统计学意义(P<0.05)；组织分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性表达率逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)；PTEN在淋巴结转移组阳性表达率低于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P<0.05)，与万焱华等[10]研究结果相似，表明PTEN的表达抑制肿瘤的分化、侵袭及转移过程。

3.3HOXD9与PTEN的相关性分析

肿瘤的发生及发展是多基因参与、多步骤协同完成的过程。本研究结果显示，HOXD9的表达与PTEN的表达呈负相关，表明HOXD9的高表达抑制了PTEN的功能，进而促进癌组织的侵袭、转移。但HOXD9在P13K/AKT信号传导通路中如何抑制PTEN的表达来促进肿瘤的侵袭、转移还需分子生物学的进一步研究。

综上所述，HOXD9、PTEN在结直肠癌的发生、发展中起重要作用，并且两者相互作用促进肿瘤的侵袭转移，提示HOXD9可作为结直肠癌治疗的潜在靶点。