S100A2、Blimp1在多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中的表达水平及意义

吕殿亮 张宽顺 吴艺 冯磊 石琳★

作者单位：1.河南省中医院血液科，河南，郑州450002

2.河南省中医药大学第二附属医院血液科，河南，郑州450002

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是血液系统恶性肿瘤类疾病，其特征为克隆浆细胞异常增殖，可引起骨折、贫血、高钙血症等［1］。MM 发病率在血液系统恶性肿瘤类疾病为第二位，仅次于非霍奇金淋巴瘤，多发于老年人群，极大影响患者生存质量。研究表明，相关细胞及分子生物学与MM 患者之间有很大的关系［2］。S100 钙结合蛋白A2（S100A2）属于S100 蛋白家族，测定S100 蛋白浓度有助于判断相关部位的病灶大小、患者预后等［3］。S100 蛋白家族中众多成员在MM 等不同疾病中呈现异常表达，而S100A2 位于细胞核中，并与细胞周期有一定关系。B 淋巴细胞诱导成熟蛋白-1（Blimp1）为浆细胞分化过程中的主要调节因子，MM 患者体内浆细胞出现异常增殖，Blimp1 可作为重要的调节与预测指标［4］。目前国内外的研究多集中于将MM 患者体内的S100A2 或Blimp1 作为单独指标讨论，但关于MM 患者与两指标间关系的研究较少。本研究旨在研究S100A2、Blimp1在MM患者骨髓单个核细胞（BMMNCS）中的表达水平及意义，以期为临床治疗提供案例依据，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年3月至2020年5月于河南省中医院血液科治疗的MM 患者82 例为观察组（MM 患者），平均病程为（8.68±2.13）月，同期本科收治的单纯贫血治疗患者35 例为对照组，其中，轻度贫血20 例，中度贫血11 例，重度贫血4 例；缺铁性贫血20 例，巨幼细胞性贫血7 例，再生障碍性贫血5 例，其他3 例。MM 分型为IgG 型43 例，IgA 型29 例，IgD 型6 例，IgM 型4 例。依据MM 的国际分期体系（ISS）［5］对患者进行分期：Ⅰ期14 例，Ⅱ期22例，Ⅲ期46 例。两组患者的一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），本研究经医院医学伦理委员会批准，患者及其家属均知情且签订同意书。

纳入标准：①符合《中国多发性骨髓瘤诊治指南（2020年修订）》［6］中相关诊断标准：经骨髓细胞学检查、病理检查等确诊为MM 患者②入组前未接受相关MM 治疗方式；③对化疗等无禁忌；④患者其它器官无严重病变；⑤治疗依从性良好。排除标准：①存在其他免疫类疾病；②具有精神疾病、认知障碍及沟通交流障碍患者；③非首次确诊MM；④不愿意参与研究者；⑤中途退出者。

1.2 方法

两组患者均保持良好休息、营养补充等常规治疗。观察组患者采用VAD 方案实施化疗：长春新碱0.4 mg+多柔比星9 mg/m2，连续静滴4 d，地塞米松40 mg/天口服，4 d 为1 个小疗程，4 周为1 个大疗程。入院后，第二日清晨采集两组患者空腹静脉血3～5 mL，使用EDTA 管并且加入肝素钠进行抗凝处理，分离患者BMMNCS，放置于-80℃的超低温环境下。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者BMMNCS 中S100A2 表达水平，采用反转录聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测患者BMMNCS 中Blimp1 表达水平。试剂盒分别购至武汉伊莱瑞特生物科技有限公司与上海联迈生物工程有限公司，操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学分析

使用SPSS 22.0 软件进行数据分析。计数资料用n（%）表示，行χ2检验；计量资料用（）表示，两组间采用t检验，采用Pearson 相关性检验分析MM 患者BMMNCS 中Blimp1、S100A2水平的相关性；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析患者BMMNCS 中Blimp1、S100A2 表达水平及联合指标对发生MM 的预测价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

两组年龄、性别、体质量指数、吸烟史等比较差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者S100A2表达水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；Blimp1 表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组一般资料比较（±s）Table 1 Comparison of general information between 2 groups（±s）

表1 两组一般资料比较（±s）Table 1 Comparison of general information between 2 groups（±s）

组别观察组对照组t 值P 值n 82 35年龄（年）70.98±5.22 71.56±5.35 0.546 0.586性别（男）45 23 1.183 0.277 BMI（kg/m2）23.32±3.22 23.48±3.36 0.243 0.808 S100A2（ng/mL）1.35±0.24 1.87±0.39 8.806＜0.001 Blimp1（相对比值）2.39±0.67 1.46±0.38 7.689＜0.001吸烟史（年）20.96±5.48 21.52±5.32 0.510 0.611

2.2 MM 病因的单因素分析

S100A2、Blimp1 表达水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 MM 患者病因的单因素分析（±s）Table 2 Single factor analysis of the etiology of MM patients（±s）

表2 MM 患者病因的单因素分析（±s）Table 2 Single factor analysis of the etiology of MM patients（±s）

组别观察组对照组χ2值P 值n 82 35 S100A2（ng/mL）1.35±0.24 1.87±0.39 77.339＜0.001 Blimp1（相对比值）2.39±0.67 1.46±0.38 59.060＜0.001

2.3 MM 患者疾病发生影响因素的多因素Logistic 回归分析

基于患者病因的单因素分析结果，以上述具有统计学意义的因素为自变量，以是否发生MM 为因变量（发生组=1，未发生组=2），纳入多项Logistic 回归模型进行分析，结果显示：S100A2、Blimp1 表达水平均为宫颈癌术后复发的独立危险因素（P＜0.05）。见表3。

表3 MM患者疾病发生影响因素的多因素Logistic回归分析Table 3 Multivariate Logistic regression analysis of factors affecting the occurrence of MM patients

2.4 MM 患者BMMNCS 中S100A2 与Blimp1 的相关性

S100A2 表达水平与Blimp1 表达水平呈显著负相关（P＜0.05）。

2.5 MM 患者BMMNCS 中S100A2 与Blimp1 的ROC 曲线

S100A2 预测MM 患者BMMNCS 中S100A2与Blimp1联合指标的曲线下面积为0.945，敏感度和特异度分别为0.971 与0.780 均高于单-检测（P＜0.05）。见表4、图1。

表4 分析S100A2 与Blimp1及联合指标预测价值Table 4 Analysis of the predicted value of S100A2 and Blimp1 and the combined index

图1 ROC 曲线Figure1 ROC curves

3 结论

MM 是一种起源于B 细胞系的造血系统恶性肿瘤类疾病，特征为产生单克隆免疫球蛋白的异常浆细胞在骨髓内发生恶性增殖。MM 患者90%以上发生过溶骨性骨疾病，徐珍珍等［7］的研究表明，其还可引起高钙血症、骨折等一系列骨相关疾病，王德印等［8］的研究对其病因进行了深入分析，但其发病机制尚未完全明确。随着新型化疗药物的研发及化疗方式的进步，MM 患者的生存质量与五年生存率得到极大改善，但部分患者出现化疗耐药反应导致综合预后效果不佳。因此，深入探讨MM 发病机制并在分子生物学及基因学领域寻找新的治疗方向已成为MM 临床研究的重点。

众多研究［9-10］共同表明，S100 蛋白家族作为主要的钙离子结合蛋白家族亚类，在调控细胞分化、细胞周期、钙稳态等过程中发挥重要作用，且参与调控多项生理病理过程。S100A2 是S100 家族重要成员，汪必成等［11］的研究表明，其在胰腺癌中呈表达水平异常，且在肿瘤发生及进展期发挥重要作用。Blimp-1 是一种具有抑制β-干扰素分泌功能的转录因子，其存在一个重要的抑制基因叫做c-myc，它可以促进细胞增值，并且阻断细胞的终末分化。张倩男等［12］的研究表明，MM 患者机体的B 淋巴细胞发生了Blimp-1 的过早表达，这说明MM 患者浆细胞的异常应从其前体细胞B 细胞阶段开始。国外学者［13］研究表明，浆细胞的存活需要与特定的微环境密切互动，该微环境由基质细胞和造血起源的细胞组成，已经显示浆细胞通过释放细胞因子来调节免疫应答。浆细胞的恶性转化可导致MM 的产生，而Blimp-1 可调控浆细胞的转录，同时促进浆细胞相关基因的表达，并促进B细胞向浆细胞的转化过程。

本次研究结果表明，S100A2、Blimp1 表达水平均为MM 发生的独立危险因素。间接提示，S100A2 作为MM 发病过程的危险因素，对于MM发病具有抑制作用；而MM 的发生导致其呈现低表达水平。本次研究结果表明，S100A2 表达水平与Blimp1 表达水平间呈显著负相关。间接提示，S100A2 与Blimp1 的表达水平与MM 患者的BMMNCS 间存在中等相关性，并分别呈现低表达与高表达水平。另外，汪玉芳等［14］的研究表明，MM 患者浆细胞S100A2 呈低表达水平，S100A2 在肝癌、胃癌等恶性肿瘤中作为抑癌因子，而在胰腺癌、肺癌等中恶性肿瘤作为促癌因子，并推测S100A2 在MM 发病机制中可能为抑癌因子，这与本次研究结果一致。刘红春等［15］的研究结果表明，MM 患者浆细胞Blimp1 呈高表达水平。这与本次研究结果一致。间接提示，S100A2、Blimp1 或可作为MM 的预测因子，且联合指标预测价值更高。

本研究的不足之处为，对于MM 患者骨髓微环境的研究，逐渐成为MM 新型药物研究的方向。朱晶晶［16］的研究就表明，双调蛋白（AREG）、白细胞介素-6（IL-6）、免疫抑制剂（PD-1）等物质与MM患者骨髓微环境存在诸多联系及反应。而S100A2与Blimp1 表达水平与MM 患者的骨髓微环境间是否存在某种相关性，有待进一步的研究讨论。

综上所述，S100A2、Blimp1 表达水平均可作为MM 发生的独立危险因素，且S100A2、Blimp1 表达水平均可作为MM 发生的预测因子，其中联合指标预测价值更高。