β-地中海贫血患儿血小板参数显示不全原因分析

张白杜 李文利 鲍丽娟 张林圆 顾晓琼， 皮 蕾

1 广州市妇女儿童医疗中心临床检验部(广州 510000) 2 广州市妇女儿童医疗中心临床生物资源库(广州 510000)

β-地中海贫血(β-thalassemia，β-地贫)，是β-珠蛋白基因突变导致β-珠蛋白生成障碍性的溶血性贫血，是一组常染色体遗传性疾病，我国南方地区如广西、海南、贵州及广东等地区多见[1]，患儿表现为不同严重程度的慢性进行性溶血，呈小细胞低色素性贫血[2]。

绝大部分β-地贫患者表型的严重程度主要取决于其β珠蛋白基因型。正常β-珠蛋白基因型为βN/βN。静止型β-地贫基因型为β++/βN，红细胞参数为基本正常或临界，通常仅能通过分子诊断识別。轻型β-地贫基因型为β+/βN或β0/βN，表现为小细胞低色素和血红蛋白(hemoglobin，Hb)A2值升高，静止型和轻型β-地贫个体均无临床症状，无需治疗。中间型β-地贫基因型为β+/β+或β+/β0，表型变异比较大，患者存在轻中度贫血，无需终生依赖输血，但在某些临床状况下如感染、手术或妊娠等需要偶尔或间断输注红细胞，又称非输血依赖型地贫(non-transfusion-dependent thalassemia，NTDT)。而重型β-地贫，基因型为β+/β0或β0/β0，表现为严重贫血(Hb持续<70 g/L)，需终生定期输血并配合规范的除铁治疗才能存活，因此也称为输血依赖型地贫(transfusion-dependent thalassemia，TDT)[3-4]。

β-地贫常规血细胞分析，主要表现为红细胞参数的变化，如红细胞数量(red blood cell，RBC)减少，Hb降低，平均红细胞体积(mean corpuscular volume，MCV)降低等，直方图表现为波峰左移，峰底变宽(MCV减少，红细胞分布宽度增大)。在临床实际工作中时我们发现，β-地贫患儿血常规检查表现不仅有红细胞参数的改变，部分患儿的血小板(platelet，PLT)参数也出现异常，直方图出现URI(upper region interference)报警[5]，分布峰的右侧上扬，呈拖尾状，并且常伴有PLT参数显示不全的现象。PLT相关参数反映PLT的数量、大小及分布状态，主要包括PLT计数、PLT压积(plateletcrit，PCT)、PLT平均容积(mean platelet volume，MPV)、PLT分布宽度(platelet distribution width，PDW)和大PLT比率(platelet large cell ratio，P-LCR)，这些参数在一定程度上反映PLT活性变化或新生PLT数量比例、以及骨髓的代偿增生情况。为调查β-地贫患儿PLT参数显示不全的情况和原因，本研究对301例确诊β-地贫患儿在Sysmex-2100进行血细胞分析，根据基因分型将病例分为重型β-地贫组和非重型β-地贫组，对患儿PLT参数显示情况进行比较分析。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2017年4月—2020年4月我院确诊β-地贫患儿301例，其中男180例，女121例，年龄25天至18岁，所有病例均为骨髓移植前病例，按基因分型分为重型组和非重型组：重型组基因型为β+/β0或β0/β0，共计204例，其中男126例，女78例；其他基因型的病例分为非重型组，共计97例，其中男55例，女42例。

1.2 资料

血液分析仪采用Sysmex-2100全自动血液分析仪，检测试剂为其配套试剂和质控品(日本希斯美康株式会社)；显微镜(日本OLYMPUS-CX21)，瑞氏-吉姆萨染色液(贝索生物技术公司)，EDTA-K2真空抗凝采血管(广州阳普医疗科技股份有限公司)。

1.3 方法

采用Sysmex-2100对301例β-地贫患儿进行血细胞分析，血涂片制作依照《全国临床检验操作规程》(第三版)，经瑞氏-吉姆萨染色后，由主管技师及以上检验人员进行人工镜检，所有操作按照实验室标准化操作规程进行(在采血后2 h内完成检测)。

1.4 统计分析

2 结 果

301例β-地贫患儿中，重型组204例，其中男126例，女78例；非重型组97例，其中男55例，女42例；两组患儿年龄及男女比例差异无统计学意义。血常规结果显示，PLT参数显示不全者102例，占比33.89%；重型β-地贫组PLT参数显示不全者75例，非重型β-地贫组PLT参数显示不全者27例，两组患儿PLT参数显示不全比例差异无统计学意义，见表1。

表1 重型β-地贫和非重型β-地贫PLT参数显示不全比例对比情况

PLT参数显示不全的102例中，PLT直方图异常93例，占91.18%。瑞氏-吉姆萨染色PLT参数显示不全的血涂片，镜检主要表现为小红细胞低色素、红细胞大小不一，可见椭圆形、靶形红细胞等异型红细胞以及红细胞碎片的97例，占95.10%。对比PLT参数显示不全病例和PLT参数全显示病例的MCV值，PLT参数全显示病例的MCV高于PLT参数显示不全病例，差异有统计学意义，结果见表2。

表2 PLT参数显示不全病例与PLT参数全显示病例MCV差异情况

3 讨 论

β-地中海贫血是由于血红蛋白β基因缺陷所导致的β链合成障碍性疾病。临床多表现为慢性进行性面色苍白，部分具有典型珠蛋白贫血面容，严重者肝脾肿大等，当患儿出现脾功亢进时，可表现为红系和白系细胞不同程度地减少。地贫患儿对PLT影响不一，α-地贫一般无明显影响，重度β-地贫可能出现PLT升高[6]。

某些疾病中，患者的PLT参数如MPV、PDW、PCT及P-LCR可能发生明显变化，这些变化与患者自身的因素及药物作用有关，与疾病的发生、发展和预后的判断都密切相关[7-8]。Sysmex-2100血细胞分析仪的PLT检测是采用激光法和电阻抗法双通道技术，激光法运用PLT-O/RET通道，电阻抗法运用RBC/PLT通道。电阻抗法为日常操作中常规使用，即在RBC/PLT通道内通过颗粒大小来鉴别RBC和PLT，在25～250 fl的范围内计数红细胞，在2～30 fl的范围内计数PLT，由于PLT与红细胞共用同一RBC/PLT通道，因此，当有小红细胞或红细胞碎片存在时，就会被误判为PLT，从而产生PLT增高的假象。而大PLT可能被误判为红细胞，从而造成PLT假性降低，两种情况均使PLT直方图发生异常改变。因此，PLT的测量信号易受影响，红细胞碎片、小红细胞等因素导致假性升高，而PLT凝集、大PLT等因素则引起PLT假性降低。

PLT参数显示不全原因多种多样，除标本因素、操作因素、病理因素、生理状态、临床用药影响等之外，红细胞的变化如小细胞、低色素、红细胞大小不一及红细胞碎片等也是影响PLT参数显示的重要因素。β-地贫患儿由于珠蛋白合成障碍，导致红细胞膜僵硬，红细胞容易变形，并且在循环中容易遭受各种机械损伤从而形成红细胞碎片[9]。因此血涂片镜检时以小细胞低色素性及大小不一的红细胞为主要表现，常见红细胞碎片，偶见椭圆形及靶形等异型红细胞，上述细胞及碎片，均可被血细胞分析仪误判为PLT系，导致PLT计数假性升高，超出血细胞分析仪设定的参数范围时则出现PLT参数显示不全的情况[10]。在此次研究中，102例PLT参数显示不全标本MCV低于PLT参数全显示的标本，差异有统计学意义，血涂片瑞氏-吉姆萨染色镜检也验证了有小红细胞、红细胞碎片、PLT聚集97例，占95.10%，证明了这一观点。因此，对仪器检测PLT参数显示不全的标本，均应进行血涂片瑞氏-吉姆萨染色，显微镜复检积极查找原因。由于Sysmex-2100血细胞分析仪PLT-O通道采用了DNA/RNA核酸荧光染色，在检测含有小红细胞、细胞碎片、或大PLT的标本时，有较强的抗干扰能力[11]，因此，对于PLT参数显示不全的标本，应使用网织红细胞通道或PLT激光流式法(PLT-O)检测PLT。

β-地贫患儿PLT参数显示不全中，PLT直方图异常共93例，占91.18%，表明绝大多数PLT参数显示不全的结果会表现为PLT直方图异常。从异常的PLT直方图形态可初步判断其原因：小红细胞干扰引起的PLT直方图异常主要表现为直方图右侧翘尾，整条曲线基本是平滑的；而PLT凝集、细胞碎片或红细胞变形时的异常PLT直方图则表现为右侧上翘，并且整条曲线不规则，尤其是右侧曲线，可能出现锯齿状表现。因此，临床工作中可通过PLT直方图正常与否以及形态可大致判断PLT参数的可信度，以及影响PLT参数显示的原因。同时说明该仪器的报警信息可信度较高[12-14]，应密切关注仪器的报警信息。

PLT检测是研究止血与凝血功能的主要指标之一，其检测结果的可靠性至关重要。β-地贫患儿PLT参数显示不全发生比例较高，可能影响临床判断。对于PLT参数显示不全的β-地贫患儿标本，实验室应参考PLT直方图形态，使用网织红细胞或PLT-O通道检测，并进行血涂片瑞氏-吉姆萨染色，显微镜复检，以提供准确而有临床价值的信息资料，使临床医生对患者做出正确的诊断和有效的治疗。