脓毒症并发急性肾损伤患儿血清miR-452-3p的水平表达及其临床意义

洪 莉，郑 青，陈永香，吴 春，陈绵平（海口市妇幼保健院检验科，海口 570100）

急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是在儿童脓毒症中常见且严重的并发症，可延长患儿的住院时间及增加死亡率。中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinaseassociated lipocalin, NGAL）及肾损伤分子-1（kidney injury molecule-1, KIM-1）是反映肾功能损伤的常用指标， 与AKI 发生有关，在AKI 的早期诊断中具有一定的价值[1]。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一类长约22 nt 的小RNA 分子，其通过调节炎症反应、缺血再灌注损伤等过程，参与AKI 的发生发展[2-3]。近期的研究发现，miR-452-3p 在脓毒症并发AKI 患者中明显高于无AKI 患者，可能是脓毒症患者早期发现AKI 的有效生物标志物[4]。本研究对脓毒症并发AKI 患儿血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1水平进行检测，探讨三项联合预测AKI 患儿预后的价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取海口市妇幼保健院2018年1月～2020年12月收治的脓毒症并发AKI 患儿106例，其中男性65 例，女性41 例，年龄12 个月～14岁（6.73±1.65）岁。根据106 例患儿住院后28 天的预后情况，分为生存组71 例和死亡组35 例。纳入标准：①脓毒症诊断参考《儿童脓毒性休克诊治专家共识(2015 版)》[5]；②AKI 诊断参考2012《KDIGO 急性肾损伤临床实践指南》[6]。排除标准：①已存在慢性肾脏病史、免疫系统疾病及恶性肿瘤；②不能配合签署知情同意书。死亡组和生存组年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 仪器和试剂 ABI 7500 型荧光定量PCR 仪，PCR 试剂盒，RNeasy 试剂盒，miRNA Easy 试剂盒和TRIzol 试剂盒均购自美国Qiagen 公司；离心机为北京医用离心机厂产品。NGAL 及KIM-1 试剂购自美国R&D 公司。

1.3 方法 采集静脉血5 ml，离心分离血清，在PCR 仪上检测miR-452-3p 水平。反应体系为20μl：TaqMan MicroRNA Assay 1.00μl，cDNA 1.33μl，TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00μl，ddH2O 7.67 μl；扩增条件为：95℃预变性10 min，95℃变性15 s，60℃复性60 s 进行45 个循环。另采用酶联免疫法检测NGAL 及KIM-1 水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0 统计软件分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。计数资料的比较采用χ2检验。应用多因素Logistic 回归分析脓毒症并发AKI 患儿发生死亡的危险因素。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 对AKI 患儿预后预测的价值。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平比较 见表1。死亡组血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平明显高于生存组，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。

表1 两组血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平比较（±s）

表1 两组血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平比较（±s）

项目 生存组（n=71）死亡组（n=35） t 值 P 值miR-452-3p 2.17±0.95 3.92±1.61 18.245 ＜0.001 NGAL（mg/ L） 287.46±31.70 562.38±53.62 15.117 ＜0.001 KIM-1（µg/ L） 15.96±3.20 29.15±6.28 11.613 ＜0.001

2.2 多因素Logistic 回归分析AKI 患儿发生死亡的危险因素 见表2。对miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 进行多因素Logistic 回归分析，显示血清miR-452-3p（OR=2.583, 95%CI: 1.690～5.374），NGAL（OR=2.792, 95%CI: 1.835～6.153）及KIM-1（OR=1.950, 95%CI: 1.274～3.902）水平升高是AKI患儿发生死亡的独立危险因素（P＜0.001）。

表2 多因素Logistic 回归分析AKI 患儿发生 死亡的危险因素

2.3 血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平预测AKI 患儿死亡的价值 见表3 和图1。血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平预测AKI 患儿死亡的最佳截值分别为3.12，450.16 mg/L 和24.20 µg/L，三项联合预测AKI 患儿死亡的曲线下面积（0.947，95%CI: 0.886～0.991）明显高于单项miR-452-3p（0.851，95%CI: 0.796～0.910），NGAL（0.834，95%CI: 0.776～0.895） 及KIM-1（0.802，95%CI: 0.745～0.861），其敏感度和特异度分别为96.2%，89.5%。

图1 血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平预测AKI患儿死亡的ROC 曲线

表3 血清miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平预测AKI 患儿死亡的价值

3 讨论

儿童脓毒症中AKI 的发病率及死亡率较高，如何早期评估AKI 的预后情况对其救治帮助重大。NGAL 是在激活中性粒细胞中被发现的一种小分子量分泌性蛋白，早期肾损伤中NGAL 升高显著，与AKI 的发生密切相关[7]。KIM-1 作为跨膜蛋白,极低表达于正常肾脏中,在肾损伤中表达增高，是判断早期肾损伤的有用指标[8]。有研究表明，miRNA的异常表达与AKI 发生有关，其可能是AKI 诊断和预后判断的潜在指标，应用前景较好[9]。

本研究显示，死亡组血清miR-452-3p，NGAL及KIM-1 水平明显高于生存组，提示miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 升高与AKI 患儿的死亡有关，可能参与AKI 的病情进展。徐佳音等[10]研究发现，NGAL 及KIM-1 在儿童脓毒症AKI 中显著升高，两项联合检测对AKI 诊断具有较高的灵敏度。另有研究指出，血清miRNA 高表达的AKI 患者病情严重，死亡风险较大，在预测AKI 的病情进展程度及预后中的灵敏度和特异度均较高[11]。本研究多因素Logistic 回归分析显示，miR-452-3p，NGAL及KIM-1 水平升高是AKI 患儿发生死亡的独立危险因素。LIN 等[12]研究也认为，脓毒症患者存在miRNA 高表达，其发生AKI 的风险大大增加，miRNA 可能是AKI 早期诊断及预后预测的无创性生物学指标。另有研究表明，NGAL 是一种很有前途的脓毒性AKI 生物标志物，对判断AKI 的严重程度和预后情况具有较高的价值[13]。本研究ROC曲线分析发现， miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 三项联合对AKI 患儿死亡预测的价值最大，其效能较高。YANG 等[14]研究指出，miRNA 与AKI 的严重程度有关，其水平越高患者死亡率越高，未来可能是AKI 诊断及预后评估的可靠指标。另有研究证实，NGAL 及KIM-1 在评估脓毒症并发AKI 患者死亡中的价值均较好，联合检测有利于评估AKI 患者的预后情况，对指导临床治疗AKI具有较好的帮助[15]。

综上所述，脓毒症并发AKI 患儿miR-452-3p，NGAL 及KIM-1 水平均明显升高，是AKI 患儿发生死亡的危险因素，三项联合检测能更好地预测AKI 患儿的死亡情况。