脑梗死患者血清miR-181d和miR-210水平表达与颈动脉狭窄程度及预后的相关性研究

王国玲，张博刚，郭 娟，马 萌，王荣辉，闫喜格（邢台市第三医院神经内科五病区,河北邢台 054000）

脑梗死是脑组织区域血液供应障碍，导致脑组织缺血缺氧性病变坏死，进而产生神经功能缺失为表现的一种心血管疾病。动脉粥样硬化是脑梗死常见病因，会导致脑动脉狭窄或闭塞病变，导致脑血栓形成,导致病情进展，而颈动脉是脑区供血重要血管，其狭窄程度与脑梗死病变程度密切相关[1]。颈动脉狭窄导致血流灌注下降，血流速度减缓，导致脑区供血减少，进而导致脑梗死发生[2-3]。虽然临床对症治疗可有效缓解其症状，但复发率仍较高，早期诊断对于提高患者生活质量具有重要意义。因此，明确脑梗死发展的影响因子，对于治疗及改善预后有积极意义[4]。据相关研究表明[5]，血清微小RNA-181d（microRNA-181d，miR-181d）和微小RNA-210（microRNA-210，miR-210）是微小RNA的主要亚型，在心血管疾病、代谢性疾病中具有重要意义，可通过介导血管生成、凋亡及氧化应激，在缺血性卒中病理生理中发挥关键作用。基于此，以我院480 例脑梗死患者作为研究对象，检测其血清miR-181d 和miR-210 表达量水平，进一步分析其在颈动脉狭窄和预后不良中的影响意义，旨在为指导治疗及改善预后提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取邢台市第三医院2017年10月～2019年10月收治的480 例脑梗死患者，根据颈部超声结果将其分为颈动脉狭窄组278 例和无颈动脉狭窄组202 例。然后随访患者半年内预后情况，根据患者预后情况将患者分为预后良好组192 例和预后不良组288 例。

纳入标准：①符合脑梗死诊断标准，经CT 及头颅MRI 检查确诊为脑梗死者，年龄＞18 岁；②均为首次发病，且发病后于1 周内就诊；③临床资料完整；④患者知情且签署知情同意书。排除标准：①入院前服用过他汀类、叶酸药物者；②并发心、肝、肾等重要器官功能障碍或严重疾病者；③并发严重感染性疾病者；④沟通困难或精神障碍、认知障碍者；⑤拒绝或不配合研究者。研究获医院伦理委员会批准。

1.2 仪器与试剂 飞利浦IU22 彩色多普勒超声仪；上海屹谱仪器制造有限公司紫外分光光度计；赛默飞世尔中国公司试剂盒。

1.3 方法 入院后所有患者均采用彩色多普勒超声仪进行颈动脉超声检查，动脉管腔狭窄率＞50%为颈动脉狭窄，根据是否存在颈动脉狭窄将患者分为颈动脉狭窄患者和无颈动脉狭窄患者。并于入院后取其空腹静脉血约3 ml，3 000 r/min，离心10 min 取上清液置于-70℃冰箱待测。采用紫外分光光度计检测血清miR-181d 和血清miR-210 相对表达量，并提取总RAN，然后使用Takara 公司试剂盒进行反转录为cDNA，采用QRT-PCT 对cDNA进行PCR，再将其放入荧光定量PCT仪上进行反应，共循环40 次，然后计算miR-181d 和miR-210 相对表达量。并搜集两组患者年龄、性别、高血压、高血脂、糖尿病、冠心病、吸烟史、喝酒史心房颤动等临床资料。

1.4 统计学分析 应用SPSS19.0 数据软件建立数据库，计量资料均符合正态分布，用均数±标准差（±s）表示，组内比较采取配对样本t检验，组间比较采取独立样本t检验；计数资料采取χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。应用逐步Logistic回归分析影响脑梗死预后不良的危险因素，入选标准为P＜0.05。根据危险因素绘制ROC 曲线分析危险评分模型对预后不良的预测价值。

2 结果

2.1 两组一般资料及血清miR-181d，miR-210 水平表达比较 见表1。两组性别、年龄、发病时间等一般资料较为接近，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。颈动脉狭窄组患者血清miR-181d 表达量水平显著高于无颈动脉狭窄组，而miR-210 表达量水平均显著低于无颈动脉狭窄组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

表1 两组一般资料及血清miR-181d，miR-210 水平表达比较（±s）

表1 两组一般资料及血清miR-181d，miR-210 水平表达比较（±s）

类 别 颈动脉狭窄组（n=278） 无颈动脉狭窄组（n=202） t/χ2 值 P 值性别（男/女） 135/143 84/118 2.296 0.130年龄（岁） 5 6.47±5.34 57.26±5.49 1.581 0.115发病时间（天） 2.35±1.14 2.48±1.16 1.224 0.221血清miR-181d 水平 2.42±0.46 1.75±0.34 17.513 0.000血清miR-210 水平 1.57±0.36 1.92±0.33 10.888 0.000

2.2 不同颈动脉狭窄程度患者血清miR-181d 和miR-210 表达量比较 颈动脉轻度狭窄患者血清miR-181d 表达量（1.15±0.23）显著低于中度狭窄（1.36±0.26）、重度狭窄（1.42±0.35）患者，差异均有统计学意义（t=5.874，6.246，均P=0.000）。颈动脉轻度狭窄患者血清miR-210 表达量（1.39±0.35）显著高于中度狭窄（1.29±0.28）、高于重度狭窄（1.16±0.22）患者，差异有统计学意义（t=2.172，5.427，P=0.031，0.000）。

2.3 影响脑梗死患者预后不良的单因素分析 见表2。随访半年内预后情况，预后良好192 例，占40.00%；预后不良288 例，占60.00%。两组各危险因素比较，性别、年龄、并发高血脂、并发冠心病、吸烟史、喝酒史等资料差异均无统计学意义（均P＞0.05）。两组高血压、糖尿病、心房颤动、血清miR-181d 和血清miR-210 等资料差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

表2 影响脑梗死患者预后不良的单因素分析[n（%）]

2.4 影响脑梗死患者预后不良的多因素分析 见表3。将有统计学意义危险单因素纳入多因素回归分析，采用Logistic 回归方程进行分析，结果显示，血清miR-181d 表达量升高（OR=1.164，95%CI：1.137～71.192），血清miR-210 表达量降低（OR=10.196，95%CI：6.677～15.570）是脑梗死患者预后不良的独立危险因素（OR ＞1，P＜0.05）。

表3 影响脑梗死患者预后不良的多因素分析

2.5 脑梗死患者预后不良预测价值 见图1。以特异度为横坐标轴，灵敏度为纵坐标轴，计算ROC曲线面积，来评估预后不良的准确性，血清miR-181d 预测脑梗死预后不良的ROC 曲线下面积为0.76（95% CI：1.013～1.124），此时的敏感度和特异度分别为71.23%和73.45%。而血清miR-210 预测脑梗死预后不良的ROC 曲线下面积为0.79（95% CI：1.125～1.206），此时的敏感度和特异度分别为73.42%和75.36%，联合检测的ROC 曲线为0.83（95% CI：1.147～1.235），此时敏感度和特异度分别为79.33%和82.41%。

图1 血清miR-181d，miR-210 预测脑梗死 预后不良ROC 曲线

3 讨论

脑梗死因具有高达50%的致残率，约10%的病死率而被临床重点关注，但因其无明显临床表现易错过最佳治疗时机，但复发率较高，且复发后会严重影响患者的日常生活和社会功能，甚至增加死亡率[6]。因此，明确影响不良预后因素，并对其进行有效治疗对于提高患者生活质量及生存率具有重要意义。据相关研究表明[7]，血清miR-181d 和miR-210 通过miRNA 进行信号传导和免疫调节参与炎性反应，与脑梗死的发生发展存在密切联系。为进一步探究其对脑梗死颈动脉狭窄与不良预后的影响作用，研究对不同颈动脉狭窄及不同预后结果患者进行血清miR-181d 和miR-210 相对表达量比较，发现其水平表达变化与颈动脉狭窄程度相关，并且是影响脑梗死患者预后不良的重要影响因素，在临床治疗及改善预后中具有良好预测价值。

本研究结果显示，颈动脉狭窄患者血清miR-181d 表达量处于较高水平，而miR-210 表达量处于较低水平，且颈动脉轻度狭窄程度越严重，提示血清miR-181d 和miR-210 表达量与脑梗死患者颈动脉狭窄程度密切相关。进一步分析发现，较高表达血清miR-181d 和较低表达的血清miR-210 是影响脑梗死患者预后不良的独立危险因素，血清miR-181d 和miR-210 表达量脑梗死预后密切相关。因此，血清miR-181d 和miR-210 可作为脑梗死患者颈动脉病变程度的重要评估指标之一，且与预后有着重要联系[8-9]。近年来相关报道表明[10-11]，炎性因子通过炎症反应促进脑组织的炎性反应及血管斑块的形成，其炎性因子水平与病情严重程度及梗死面积密切相关。机体炎症是影响脑梗死的重要因素，与机体氧化应激激活、促进NF-KB 通路信号传导、进而引起脑缺血再灌注、从而导致神经损伤有关，参与脑梗死的发生与发展。因此，有效评估患者炎症反应及脑损伤程度对于及时改善预后具有积极意义。

miRNA 是主要存在于中枢神经的RNA，在促进神经系统发育方面具有重要作用，是脑损失的特异性miRNA。当脑梗死发生时，脑区血液屏障被破坏，miR-181d 进入血液而被检测到，并随着脑梗死严重程度的加重，其神经元损伤严重程度的增加，miR-128d 表达水平升高，提示其水平表达与脑梗死程度呈正相关[12-13]。而miRNA 参与细胞增殖和分化、凋亡、炎症反应等过程中，miR-181d 可诱导炎性因子释放，较高水平表达可抑制炎症抑制因子水平升高。而神经元是由线粒体功能决定，过高水平miR-181d 表达会导致线粒体功能紊乱，进而加剧神经元损害[14-15]。因此，血清miR-181d 可通过调节机体炎症反应，促进NF-KB 信号传导，影响神经元，进而导致神经损伤，对其水平变化对神经功能损失评估具有重要作用，同时可为临床治疗提供依据，这与相关研究中脑梗死患者血miR-128d 表达水平呈较低表达，且表达水平与脑梗死严重程度存在负相关的报道一致[16-17]。

而miR-210 是一种缺氧激活因子，在缺氧情况下minR 表达水平升高，若脑部损伤患者miR-210 表达下调则说明患者脑部损伤情况严重。近年来的研究也同样表明[18-19]，miR-210 表达水平变化可反映脑部损伤情况，对于预后评估具有重要意义。并且血清miRNA 可被准确检测到，其miRNA 表达量具有作为脑梗死生物学标志物的潜在价值，且血清检测简单方便，准确性较高，具有临床应用价值较高[12,20-21]。由此可知，对脑梗死患者进行血清miR-181d 和miR-210 检测，可及时了解脑梗死病变情况，对于预防不良预后具有积极意义，并有助于临床诊断和及时治疗，有助于降低复发和死亡等不良事件发生，对提高患者生存质量具有重要意义[22-23]。

另外，ROC 曲线结果显示，血清miR-181d预测脑梗死预后不良的ROC 曲线下面积为0.76（95% CI：1.013～1.124），此时的敏感度和特异度分别为71.23%和73.45%。而血清miR-210 预测脑梗死预后不良的ROC 曲线下面积为0.79（95% CI：1.125～1.206），此时的敏感度和特异度分别为73.42%和75.36%，联合检测的ROC 曲线为0.83（95% CI：1.147～1.235），此时敏感度和特异度分别为79.33%和82.41%，说明血清miR-181d 和miR-210 对于脑梗死患者预后不良发生具有较好预测价值，其敏感度和特异度较好，可为临床预防脑梗死发生提供可靠参考，并经曲线证实其对预测脑梗死患者预后的敏感度高达70%以上，联合检测准确性更好，可为临床及时诊断和治疗提供指导，有助于降低脑梗死预后不良事件的发生[24-25]，具有较高临床预测价值。

综上所述，血清miR-181d 表达量升高，血清miR-210 表达量降低是脑梗死患者预后不良的独立危险因素，在预防脑梗死预后方面具有重要预测价值。