三阴性乳腺癌患者血清miR-146a，miR let-7a水平表达与临床病理特征和化疗疗效的相关性研究

王英英，朱 娇

（1.陕西中医药大学附属医院肿瘤二科，陕西咸阳 712000；2.兵器工业五二一医院肿瘤血液病科，西安 710065）

三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC)是指雌激素受体(estrogen receptor, ER)，人类表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2, Her-2)和孕激素受体(progesterone receptor, PR) 均呈阴性的乳腺癌(breast cancer, BC)。TNBC 约占BC 的20%，具有强侵袭性和预后较差等特点[1-2]。目前临床上仍缺乏个体化治疗方案，因此引起广大科研工作者的广泛关注。miRNA 是一类长度为19～25 nt 的非编码单链小分子，近年来研究显示miRNA 是TNBC 的潜在治疗靶点[3]。本研究通过检测TNBC 患者血清miR-146a 和miR let-7a 的表达水平，分析其与TNBC 临床病理特征和化疗疗效的相关性，旨在为TNBC 的临床诊疗提供依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择陕西中医药大学附属医院2014年7月～2016年6月行乳腺癌根治术的79 例女性患者为研究对象，经免疫组化(immunohistochemical, IHC)检测证实为TNBC。年龄21～60 岁，平均年龄45.68±8.78 岁；肿瘤直径1～14 cm，平均肿瘤直径5.27±1.21cm ；绝经前38例，绝经后41 例；I 期21 例、II 期28 例和III 期30 例；伴淋巴结转移42 例，不伴淋巴结转移37 例。本研究经由我院伦理委员会批准。

纳入标准：术前未经放疗、化疗者。

排除标准：①并发其他恶性肿瘤者；②严重肝肾功能异常者；③高血压、糖尿病和冠心病等。

1.2 仪器与试剂 盐酸表柔比星[辉瑞制药(无锡)有限公司，批准文号：国药准字H20000496]75 mg/m2，静脉滴注；环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司，批准文号：国药准字H32020857）500 mg/m2，静脉推注；紫衫醇(百时美施贵宝上海贸易有限公司，批准文号：国药准字H20110470)80 mg/m2，静脉滴注 ；Trizol 试剂购自Invitrogen 公司；血清RNA 提取试剂盒购自北京天根公司；UV-2450 紫外分光光度计(日本岛津公司)；ABI 7500 Fast 荧光定量PCR 仪(美国ABI 公司)；逆转录试剂盒(ABI Applied Biosystems 公司，美国)；miR-146a 和miR let-7a 引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.3 方法 采集TNBC 患者化疗前、后空腹肘静脉血5 ml，3 000 r/min 离心5 min，-80℃保存待测。 采用血清RNA 提取试剂盒提取血清中的总RNA，应用紫外分光光度计分析RNA 纯度。按照逆转录试剂盒操作说明将RNA 逆转录为cDNA。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRTPCR)检测血清miR-146a 和miR let-7a 的水平。

根据实体瘤疗效评价标准评定疗效：完全缓解(complete remission, CR)：病灶完全消失；部分缓解(partial remission, PR)：病灶最大长径总和减少≥30%；疾病稳定(stable disease, SD)：病灶最大长径总和减少20%～30%；疾病进展(progression of disease, PD)：病灶最大长径总和增加≥20%。

1.4 统计学分析 采用SPSS 21.0 统计学软件处理数据，满足正态性分布及方差齐性的计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验。计数资料以n(%)表示，采用χ2检验。相关性采用Spearman 秩相关分析，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 血清miR-146a 和miR let-7a表达水平与TNBC 患者临床病理特征的关系 见表1。血清miR-146a 和miR let-7a 在肿瘤直径≥3 cm，临床分期III 期和淋巴结转移的患者中的表达水平高于肿瘤直径＜3 cm，临床分期I～II 期和无淋巴结转移的患者，其差异均具有统计学意义(均P＜0.05)。

表1 血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平与TNBC 患者临床病理特征的关系

2.2 化疗前、后血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平的比较 TNBC 患者化疗后血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平(0.81±0.32，0.60±0.26)显著低于化疗前(1.77±0.51，1.92±0.77)，其差异具有统计学意义(t=11.31，10.11，均P=0.00)。

2.3 血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平与化疗疗效的相关性 化疗后，CR 5 例(6.33%)，PR 31例(39.24%)，SD 27例(34.18%)和PD 16例(20.25%)。根据化疗疗效分为疾病进展组(n=PD=16)和疾病控制组(n=CR+PR+SD=63)，疾病控制组患者血清miR-146a 和miR let-7a表达水平(0.37±0.12，0.51±0.17)低于疾病进展组(1.40±0.79，1.62±0.55)，其差异具有统计学意义(t=8.97，10.22，均P＜0.05)。Spearman 秩相关分析显示血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平与化疗疗效呈负相关(r= -0.199，-0.150，均P＜0.001)。

3 讨论

TNBC 是一类ER，Her-2 和PR均呈阴性的BC，其约占BC 病理类型的20%，侵袭性强、死亡率和复发转移率高、预后差[4-5]。有研究指出TNBC患者的5年总体生存率(overall survival, OS)明显低于非TNBC 患者[6]。目前由于TNBC 基因表达的特异性，临床上常采用化疗的治疗方案。miRNA 是一类长度为19～25 nt 的非编码单链小分子，何姝槿等[7]指出miRNA 通过上皮-间充质转化(epithelialmesenchymal transition, EMT)调节TNBC 的进展。因此，探究靶向调节因子miRNA 可为临床治疗TNBC 提供新方向并提升患者生存质量。miR-146a位于第5 号染色体的LOC28628 基因中的第二个外显子区，其可参与肿瘤的侵袭、转移过程，在免疫疾病中，miR-146a 通过核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)信号转导发挥调控作用[8-9]。let-7具有高度保守性、组织细胞特异性和时序性，其可用作肺癌和乳腺癌的肿瘤标志物[10]。let-7 作用靶点有Ras，ERK，HMGA2 和Her-2 等。本研究通过检测TNBC 患者血清miR-146a 和miR let-7a 的表达水平，分析其与TNBC 临床病理特征和化疗疗效的相关性，旨在为TNBC 的临床诊疗提供依据。

本研究分析了血清miR-146a 和miR let-7a 表达与TNBC 患者临床病理特征的关系，结果显示肿瘤直径≥3 cm，临床分期Ⅲ期和淋巴结转移的患者血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平较高，化疗后血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平显著降低，提示了miR-146a 和miR let-7a 很可能参与了TNBC 的发生、发展过程。本研究中79 例研究对象，其中疾病进展组16 例和疾病控制组63 例，说明盐酸表柔比星、环磷酰胺和紫衫醇联合的化疗方案效果较理想。进一步采用Spearman 秩相关分析分析血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平与化疗疗效的相关性，结果显示其与化疗疗效呈负相关。

综上所述，血清miR-146a 和miR let-7a 表达水平与肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移和化疗疗效相关。miR-146a 和miR let-7a 可作为TNBC 潜在的肿瘤标志物，值得深入研究和探讨。