鹿血鉴别方法研究进展※

●韩欢胜 徐 馨 黄 翠 柴孟龙

（1.哈尔滨博蒙生物科技有限公司 黑龙江 哈尔滨 150030；2.黑龙江普惠特产有限公司 黑龙江 哈尔滨 150030；3.黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所 黑龙江 哈尔滨 150086）

鹿血是我国传统名贵中药，具有增强免疫力、抗疲劳、补血益精等保健功效。鹿血产量极少，在古代是王公贵族和达官贵人的专属保健品，随着人们生活水平和大健康意识的提高，鹿血逐渐走进百姓生活，但价格较高。新鲜鹿血不易保存，所以经常被制成各种鹿血产品，常见的鹿血产品有鹿血粉、鹿血颗粒、鹿血酒、鹿血胶囊、鹿血口服液和鹿血晶等。但因鹿血产品很难直观辨别真伪，容易被不法商家利用其他动物血液制成假冒伪劣产品。传统的鹿血鉴别方法是通过外观性状鉴别及一些理化方法进行鉴别，但对性状十分相似的血液样本却无法准确有效地鉴别。随着分子生物学技术的发展，人们将其应用到鹿血鉴别中，具有精准鉴别鹿血真伪的优势，为鹿血产品的开发提供了保障。本文对常用的几种鹿血鉴别方法进行总结，以供参考。

1 外观性状鉴别法

新 鲜 鹿 血 在0～4℃可 保 存10～15 d，在-10℃～-20℃可保存15～90 d。新鲜鹿血与其他动物血从颜色、基本性状等外观方面无法进行准确辨别，而参照行业团体标准T/CAAA 045—2020和T/CAAA 046—2020，可以对冻干鹿血粉和干燥鹿血粉进行外观性状鉴别。具体方法：取适量鹿血粉样品，置于洁净的白色瓷盘中，在自然光下观察、鼻嗅和口尝，纯正鹿血粉为粉末状、无结块，无可见异物，深棕色，有光泽，稍有铁腥味，无其他异味。假的鹿血粉颜色发黑，没有光泽。

2 溶解法

溶解法也是鉴别鹿血粉的一种常用方法，一些经验丰富的养鹿人常使用这种方法进行鉴别。具体方法：取一杯清水，再取少量鹿血粉样品撒入水中，纯正的鹿血粉会呈直线形坠入杯底，并出现一条红色血带。而假的鹿血粉则呈扩散型慢慢落入杯底。因溶解法需要有丰富经验的专业人员才能够操作，局限性强。

3 免疫沉淀法

免疫沉淀法是一种将蛋白质作为抗原，利用抗原与抗体特异性结合的特性，使可溶性抗原与相应抗体在特定条件下结合，通过观察是否出现沉淀物进行判定的鉴别方法。张振学等[1]根据法医血清学抗原抗体沉淀反应的理论，使用抗鹿Hb（血红蛋白）血清为抗体，对鹿血粉进行了鉴别试验。在无菌条件下制备抗鹿Hb血清并测定效价，确保抗鹿Hb血清特异性良好。将鹿血粉装入试管中，加入适量生理盐水搅拌并充分浸泡，离心取血清千倍稀释后，加入抗鹿Hb血清，进行沉淀试验，15 min后在日光下观察沉淀结果，出现白色沉淀环则为抗鹿阳性反应，不出现白色沉淀环则为假鹿血粉。抗原抗体法较传统方法鉴别结果更加客观，可以准确地鉴别鹿血粉的真伪，但需制备多种抗体，实验操作比较复杂。

4 聚丙烯酰胺凝胶电泳法

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是一种以聚丙烯凝胶作为载体的区带电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应和电荷效应，利用凝胶的网状结构和电泳物的大小形状不同形成分子筛效应，电泳物所带电荷的差异性形成电荷效应。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）可以分为非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（native-PAGE）和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），SDS-PAGE比较常用，在凝胶和样品中加入十二烷基苯磺酸钠（SDS）和强还原剂，使分子被解聚成多肽链,并消除不同分子间原有的电荷差异与结构差异，因此只根据亚基分子量即可分离并测定蛋白质的分子量。郭月秋等[2]采用SDS-PAGE方法，对鹿、牛、鸡、羊和猪5种动物全血进行了电泳检测，结果表明，各种动物全血的条带均有差异，鹿全血有13条条带，而牛、鸡、羊全血条带分别为8条、5条和6条，与鹿全血条带数差异显著。猪全血有11条条带，但在条带级数（颜色深浅）与鹿全血也有差异，易于区别。5次重复试验结果稳定一致，说明SDS-PAGE可以作为鹿血与其他动物血液鉴别的依据。聚丙烯酰胺凝胶电泳还可以对动物血清进行鉴别，不同种动物血清中蛋白质种类和含量不同。仓公敖等[3]用聚丙烯酰胺凝胶电泳对鹿、牛、猪、羊4种动物的血清蛋白进行了分离和鉴别，结果表明鹿血清蛋白的条带与羊、猪存在明显差异，牛和鹿的血清蛋白条带也不同，牛血清有3条区带，鹿血清有2条颜色较深的条带，不同动物血清蛋白电泳条带差异显著，可以将鹿血与其他动物血液进行区别鉴定。聚丙烯酰胺凝胶电泳法可以对新鲜血液进行检测，弥补了其他传统方法的局限性，但需要专业技术设备和试剂。

5 近红外光谱法

近红外光谱分析技术是基于有机分子的近红外吸收，从样品的背景变化中提取弱信息[4]，利用近红外光谱技术对样品进行鉴定的方法，具有方便、快速、高效、无污染等优点。目前，近红外光谱技术逐渐从农业应用推广到食品、化学、医药等领域。尹冬冬[5]应用PLS法结合NIR技术建立了鹿血真伪识别模型，PLS鹿血判别模型可以实现对鹿血真伪的快速检测，可对定标集鹿血样本和未知鹿血样本进行检测，准确率分别可达100%和93.3%。近红外光谱法应用范围广、污染小，但需要特定光谱仪和较为专业的操作人员。

6 分子生物学方法

近年来，随着分子生物学技术的的快速发展，利用特异性引物对微量样本进行快速检测的PCR技术，是当前很多物种真伪鉴别的有效方法之一。PCR技术利用特异性引物对特定DNA片段进行扩增，是一种生物体体外扩增的方式，具有简单快速、灵敏度高、特异性强、对样本纯度要求低等优点。PCR技术在鹿血鉴别中可以弥补传统鉴别方法的不足，从源头上对鹿血质量进行把关。并且对新鲜血液、鹿血粉、鹿血晶等均可进行鉴定。党平等[6]应用PCR技术对猪、马、驴、牛、羊、兔、鸡、鸭、鹅等常见家畜新鲜血液和鹿血精样本进行了特异性检测，鉴定用引物根据各物种线立体DNA（mtDNA）的特定序列进行设计，血样DNA提取后进行PCR反应，结果表明，以鹿的特异性引物对10种动物血液总DNA模板进行扩增，仅在鹿血中扩增出特异条带，其他物种DNA模板无扩增条带。沈海英等[7]用线粒体DNA特异性引物对鹿血、牛血、猪血和鹿血晶基因组CNA进行了PCR扩增，结果表明与党平的试验结果一致。PCR扩增后根据条带便可以确定血液样本物种归属，无需进行测序。但该方法无法对鹿科动物的不同种属及亚种进行鉴定，因此周辰杰等[8]进一步使用特异性引物对东北梅花鹿、东北马鹿、塔河马鹿、坡鹿、白唇鹿、鹿血晶进行了血液种属来源鉴定，结果表明东北梅花鹿、东北马鹿、塔河马鹿的引物都能够从鹿血晶DNA模板中扩增出特异性条带，说明名贵中药鹿血晶的鹿血来源于一种或多种鹿科动物的血液。

随着基因组学、蛋白质组学和代谢组学技术的快速发展，通过高通量、高分辨率的分析检测技术，在整体上分析探讨生命活动在代谢层面的特征和规律[9-11]，基因与蛋白质表达的微小变化在代谢产物上放大，可以通过代谢组学技术进行检测，应用在鹿血检测中，可以更精确地对鹿全血、鹿茸血、鹿心血等进行检测。张然然等[13]利用鹿全血与鹿茸血之间的小分子代谢物组分差异，对鹿全血和鹿茸血进行比较和定量分析，结果表明，鹿全血和鹿茸血小分子代谢物组分在种类上没有差异，但在含量上有差别，试验共筛选出28种显著差异代谢产物，鹿茸血中脂类、核苷酸及天然抗氧化剂麦角硫因含量较高。该研究证明了利用代谢组学技术可以对鹿血进行精准定位鉴别，为鹿血产品的分类开发提供了依据。

7 总结

鹿血是珍贵的动物类中药，营养价值高，保健功效显著，价格相对昂贵，但市场发展空间很大。由于鹿血产品多种多样，质量良莠不齐，国家没有统一的质量标准和检验鉴定标准，消费者对鹿血产品的真伪无法辨别。随着各种新兴技术的运用和中药现代化的发展，科研人员也在不断尝试使用新技术对鹿血及其产品进行鉴别，经过多年的探索和发现，以分子生物学技术为基础，根据鹿血自身特有的DNA序列，目前基本可以实现鹿血产品真伪的快速、便捷、有效鉴定。

更正声明：发表在本刊2020年第23卷第12期第56～57页的题为《抚顺寒地蓝莓产业化栽培技术集成》一文，作者为赵明。由于作者原因，作者信息提供有误。应赵明本人要求，将作者信息更正如下。作者姓名：何明莉1徐贵轩1杜俊臣2刘景峰2孙宪波3方天成4孙秀旭3。单位信息：1. 辽宁省果树科学研究所 辽宁 熊岳 115009；2. 辽宁省新宾县北四平乡政府 辽宁 新宾 113200；3. 抚顺丰晟农产品有限公司 辽宁 新宾 113201；4. 大连隆丰达生物科技发展有限公司 辽宁 大连 116300。基金项目：抚顺市人民政府（KJGJ-2016-08）；新宾特色蓝莓产业生产技术示范与推广（2016年）。作者简介：何明莉（1970-），女，满族，推广硕士，副研究员，现从事苹果育种研究与区域示范工作。