一例水貂流感病毒与绿脓杆菌混合感染的诊断

●赵会光（安丘市畜牧业发展中心 山东 安丘 262100）

1 临床症状与剖检病变

主诉水貂发病半个月左右，有尖叫、咬笼等神经症状，死亡水貂口鼻流血。经调查，该养殖场的水貂在分窝后正常免疫水貂肠炎与犬瘟热疫苗，未免疫肺炎疫苗；水貂饲料中包括未熟制的鸭架、鸭肠等，且发病之前更换过饲料。

病死水貂外观口鼻处有鲜红色血液，营养状况良好。剖检发现：肺严重出血、水肿，呈黑红色，气管环出血；脾脏肿大，有出血斑；肝脏肿大、质脆；肾肿大出血；脑膜出血。部分水貂胃底有溃疡灶，肠道黏膜出血。

2 检测方法

2.1 细菌分离鉴定

取病死水貂的肺脏及肝脏组织，接种于TSA（胰蛋白胨大豆琼脂）平板，置于37℃恒温培养箱培养18 h。

取单菌落接种于PDP（绿脓菌素测定培养基）斜面，置于37℃恒温培养箱培养，观察斜面有无色素，在试管内加入氯仿提取液，然后加浓度为1moL/L的盐酸1mL，振摇后静置并观察颜色变化。同时取单菌落过夜摇菌后，以通用引物[1]进行16S rDNA的PCR扩增，预期扩增片段大小为1 428bp，将扩增产物送至测序公司测序，测序结果在NCBI网站进行BLAST比对。

2.2 可疑病毒病检测

采集病死水貂的肺、肝、脑、淋巴结等组织，用组织研磨仪研磨后，12 000rpm/min离心5min，取上清液按照核酸提取试剂盒的操作说明提取核酸。参照文献[2]及国家标准《犬瘟热诊断技术》（GB/T 27532-2011）、国家标准《犬细小病毒病诊断技术》（GB/T 27533-2011），使用特异性检测引物进行PCR扩增，分别检测流感病毒、犬瘟热病毒、水貂肠炎病毒，预期扩增片段大小分别为229bp、455bp、609bp。

3 结果

3.1 细菌分离鉴定

病死水貂肺脏和肝脏组织均在TSA平板上分离得到中等大小、圆形、黄绿色、有特殊芳香的菌落，绿脓菌素测定试验为阳性（盐酸溶液呈粉红色）。16S rDNA扩增产物经测序比对发现，该分离菌为铜绿假单胞菌，又称绿脓杆菌。

3.2 可疑病毒病检测

经PCR检测，流感病毒扩增得到约为229bp的目的条带，犬瘟热病毒及水貂肠炎病毒无目的条带。

4 讨论

综合临床症状、剖检病变及实验室检测结果，确诊该病为流感病毒与绿脓杆菌混合感染所致，经更换饲料、给予抗菌治疗一段时间后，该病得到基本控制。当前水貂养殖行业困顿，囿于成本压力，该养殖场水貂的养殖环境和饲料来源都没有得到很好的控制。流感病毒在养殖水禽（鸭、鹅）中多为隐性感染，未经熟制消毒，则很可能通过饲料感染水貂。若此时养殖场环境高温、高湿，流感病毒与绿脓杆菌二者共同作用，加重病情，就会造成更严重的经济损失。

近年来研究表明单纯的绿脓杆菌感染很难导致水貂出血性肺炎[3]，严重的出血性肺炎伴随神经症状往往都是混合感染。出血性肺炎在临床上之所以难治、屡治不愈，有两个方面的原因：一是抗生素滥用导致细菌耐药严重，这需要我们在给药前针对分离菌株做药敏试验，合理选择药物，并遵守用药剂量和疗程；另一方面就是由于混合感染的存在，往往易只发现一种而忽略了其他致病因素，因此在诊断和治疗过程中应该特别注意考虑混合感染。