江苏省泰州市部分市售鸡蛋黄曲霉毒素B1 污染状况调查

2021-12-11杨勇环林甲凌饶中程黄子涵王海燕

中国动物检疫 2021年12期

杨勇环，林甲凌，饶中程，黄子涵，谢静，王海燕

（江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300）

1960 年英国伦敦发生“火鸡X 病”，后来被确诊为黄曲霉毒素（Aflatoxins，AF）中毒。AF 是由黄曲霉等霉菌产生的次生代谢产物[1]，1993 年国际致癌研究机构将其列为一级致癌物质[2]。AF 种类较多，目前已鉴定出B1、B2、G1、G2、M1、M2 等20 余种，其中B1 最常见且毒性最强，能够引起严重的肝损伤，是我国评价饲料、粮食和动物产品（奶制品除外）安全性的重要指标之一[3]。

玉米等粮食作物或其他饲料原料常因保存不当、湿度较大等原因导致黄曲霉等霉菌大量繁殖。AF 性质较为稳定，发生污染后很难消除[2]。动物食用被AF 污染的饲料，会导致毒素在各种器官和组织中残留[4]，并通过肉、蛋、奶等畜牧产品，随食物链传递进入人体，进而威胁人类健康。AF 潜在的经济、生态和健康风险已经成为关注的焦点[4-10]。目前，针对农产品AF 污染的影响，各国开展了广泛调查研究，且根据自身实际情况，在相关法律法规中制定了不同食品及动物饲料中AF 的最大限量标准，以控制或降低AF 污染对人类健康造成的危害[1]。但是也有不少食品没有规定最大限量标准，如禽蛋。鸡蛋作为人们常食用的动物源性食品，其安全的重要性不言而喻。为此，购买了江苏省泰州市多个超市和集贸市场不同产地、不同批次的在售鸡蛋，抽取样本进行AFB1 检测，了解鸡蛋中AFB1 的污染情况，以期为鸡蛋产品的卫生安全保障提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 样品

2020 年12 月上旬，在泰州市不同超市、集贸市场采集不同厂家、不同品种、不同时间的60 个种类/批次的鸡蛋各30 枚，每个种类/批次随机选取3 枚进行检测，总计抽检了180 枚鸡蛋样品，样品信息见表1。

表1 鸡蛋样品基本信息

1.2 仪器

SunriseTM酶标仪，购自瑞士帝肯集团公司；Eppendorf 5810R 多功能台式离心机，购自德国艾本德股份有限公司；Thermo Scientific 微量移液器（8 道30～300 μL），购自赛默飞世尔科技有限公司；Dragon Med 微量移液器（单道20～200 μL、单道200～1 000 μL），购自大龙医疗设备有限公司。

1.3 试剂与耗材

AFB1 ELISA 检测试剂盒（PZ-MM-HQMB01），购自北京普赞生物技术有限公司；甲醇（AR）、氯化钠（AR），购自天津市津东天正精细化学试剂厂；去离子水，由实验室自行制备。

1.4 方法

1.4.1 提取液配制称取氯化钠180 g，加入去离子水1 350 mL，完全溶解后，再加入甲醇，振荡混匀，共配制样品提取液4 500 mL，用于鸡蛋中AFB1提取。

1.4.2 样品处理参考试剂盒说明书，剔除鸡蛋中的蛋清，称取5 g 蛋黄放置于50 mL 离心管中，然后加入25 mL样品提取液，剧烈振荡使充分混匀，4 000 r/min 离心5 min，吸取50 μL 上清液于2 mL带盖试管中，再加入950 μL 去离子水（稀释倍数为100），摇匀后待检。

1.4.3 AFB1 残留量测定将检测试剂盒从4 ℃冰箱中取出，于室温回温至20～25 ℃（内含6 个标准品，分别为0、0.01、0.04、0.16、0.64、2.56 μg/kg），放置1 h，开始检测。将样品和标准品对应酶标板微孔按序编号，每个样品和标准品做2 孔平行。首先加标准品/样品 50 μL 到对应的微孔中，再加入 AFB1 酶标物 50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板室温避光反应20 min 后，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300 μL/孔，充分洗涤5 次，每次间隔30 s，最后一次用吸水纸拍干；加入显色液100 μL/孔，用盖板膜盖板室温避光反应10 min；加入终止液50 μL/孔，轻轻振摇混匀，设定酶标仪于450 nm 处，测定每孔OD 值。

1.4.4 检测结果判定《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）[3]规定固体、液体食品中的AFB1 最高限量为20 μg/kg。所检测的样品中AFB1 残留量高于20 μg/kg，判为超标，否则判为未超标。但该标准并未对鸡蛋中的AFB1 残留限量作限定。本次检测将每个样品的平均OD 值与标准品OD 值进行比较，确定残留量范围，分析污染状况。设0.16 μg/kg 参比液的OD 值为0.825，0.64 μg/kg 参比液的OD 值为0.311。当0.311 ≤OD ＜0.500（0.20～0.64 μg/kg），表示有微量的残留；当OD ＜0.311（＞0.64 μg/kg）表示为一定的残留。

2 结果与分析

本次调查发现：有15 枚样品的AFB1 残留量为0.20～0.64 μg/kg，全部来自超市，占检测鸡蛋总数的8.33%（15/180），占超市鸡蛋样品的13.89%（15/108）；来自集贸市场的24 个品种共计72 枚鸡蛋样品AFB1 残留量均小于0.16 μg/kg（表2）。

表2 泰州市抽检鸡蛋中AFB1 检测结果（OD 值）

来自超市的13 个场家的鸡蛋样本中，有8 个场家的不同批次样品AFB1 残留量远低于0.16 μg/kg，5 个场家存在介于0.20～0.64 μg/kg 的样品，检出可疑样本百分比由高到低分别为，9 号场家（66.67%）、10 号场家（55.56%）、5 号场家（33.33%）、12号场家（33.33%），7号场家（8.30%），详见表3。

表3 超市中部分场家鸡蛋样品AFB1 残留检出情况

3 讨论

人类长期摄入含有AF 的食物，如玉米、谷类及动物产品等，会出现毒素蓄积，严重时会出现急性中毒，引起肝脏坏死出血，而慢性中毒则会引起肝癌等疾病[9]。据有关调查[5-7]，我国的粮食和饲料中AFB1 污染率很高。为此，在食品安全国家标准GB 2761—2017 中，我国明确规定了不同食品中的AFB1 的最高限量。但是，在国标中我国并未对鸡蛋中AFB1 含量作出限定，而世界范围内到目前为止也还没有对鸡蛋中AF 残留量作出限量规定[3，10]，这从某种程度上增加了危害食品安全与人类健康的风险[1，10]。

目前，我国对鸡蛋中AFB1 残留量的研究报道较少[4]。鸡蛋被AFB1 污染的主要原因是在养殖环节中产蛋鸡食用的饲料发霉，真菌大量繁殖后产生了大量的AF。当产蛋鸡摄入过量AF 后可发生食欲减退、产蛋率下降、免疫机能下降等问题，毒素还可经输卵管传递至鸡蛋中，集中于蛋黄，从而导致鸡蛋中出现AFB1 残留[4，8]。本研究对泰州市部分地区市场上销售的鸡蛋应用商品化的ELISA试剂盒进行了AFB1 残留检测，结果发现在抽检的180 枚鸡蛋样品中，15 枚样品中的AFB1 残留量为0.20～0.64 μg/kg，占8.33%，全部来自超市，占超市样品13.89%；而购自集贸市场的鸡蛋样品（多为农村散养鸡所产）中AFB1 残留量较低，远低于0.16 μg/kg，这可能与散养鸡不使用饲料饲喂相关。养殖场的饲料很多来自同一批原料，如果有污染，则可能出现一定量的残留。

本次调查中采用的是ELISA 试剂盒检测法，与液相色谱等方法相比，可靠性略低，但操作方便，成本较低。可以先用该方法对大量样本进行初筛，对可疑或阳性的样本再用其他更可靠的方法进一步验证。

预防鸡蛋中AF 污染要从源头入手。首先，在粮食贮藏过程中，要保持通风，控制好贮藏环境的温度和湿度，降低霉菌的滋生概率，保持良好的卫生环境。其次，在饲料的生产环节中，应当严格控制饲料原料质量，尽量选择抗霉菌作物或者霉菌毒素污染程度较轻地区的作物，严格控制原料的含水量，在不影响饲料的正常生产和使用的前提下，尽量缩短饲料原料的库存期；在生产过程中要严格控制生产条件，防止饲料吸湿发潮。最后，在饲料的贮存、运输和使用过程中，尽量缩短库存时间，加强通风除湿，可配合使用一定的防霉剂和吸附剂。在蛋鸡饲养环节，要严格把控饲料质量，定期对饲料做好检测和监测，及时更换问题饲料。

本研究仅对泰州市部分超市和集贸市场进行了采样，样品数量和地域的代表性有一定局限性。希望今后更多的研究单位和研究者对此进一步深入研究，也建议相关主管职能部门加快开展禽蛋中AFB1 残留量的检测和监管工作，制定相应的最高残留量标准，以保障禽蛋产品安全。