Slit2、MAGE-A3在宫颈癌组织中表达及临床意义

张晶晶 尚瑞彦 王淑丽 田晓娜

临床宫颈癌具有较高的基础发病率，在合并HPV16或者HPV18感染的群体中，宫颈癌的发病风险更高[1]。宫颈癌的发生，增加了疾病中晚期病情进展的风险，使患者总体生存时间显著下降[2]。在宫颈癌发病的基础领域，可以发现肿瘤蛋白的改变，能够在癌细胞的发生或者肿瘤中晚期病情进展方面发挥作用。Slit2能够通过调控癌基因的激活程度，降低癌基因的转录活性，避免癌细胞的过度增殖，进而稳定肿瘤细胞的扩增过程[3]；黑色素瘤相关抗原(MAGE-A3)能够通过提高肿瘤细胞内信号通路的激活程度，增加癌细胞DNA的分裂速度，促进肿瘤细胞的异常分裂。有部分研究者探讨了黑色素瘤相关抗原的表达与宫颈癌的关系，认为黑色素瘤相关抗原的异常波动，能够显著促进宫颈癌生物学特征的恶化，但对于Slit2的分析不足。为了揭示Slit2、MAGE-A3的表达与宫颈癌患者的病情关系，可以为临床上宫颈癌的诊疗提供一定的依据，本文收集我院2017年2月至2019年2月保存的宫颈癌标本97例作为研究对象，对Slit2、MAGE-A3的表达及其与宫颈癌患者的病情关系进行比较和探讨，并将结果进行如下报告。

1 材料与方法

1.1 一般资料

本文收集我院2017年2月至2019年2月保存的宫颈癌标本97例作为研究对象，同时选取正常宫颈组织97例作为对照，纳入标准：①均经病理组织学确诊；②年龄>18岁；③临床资料保存完整。排除标准：①接受过放疗、化疗等抗肿瘤治疗；②合并有其他恶性肿瘤、免疫系统疾病、肝肾功能障碍。二组的研究者在一般资料比较，无统计学差异(P>0.05)，见表1。

表1 二组一般资料比较

1.2 检测方法

采用石蜡切片，脱水操作后采用3%H2O2室温条件下孵育20 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，磷酸盐缓冲液稀释后的山羊血清封闭抗体5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗(购自赛默飞世尔中国 浓度：1∶1000)5 ml，37 ℃孵育2 h，或者放置4 ℃冰箱过夜孵育，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入生物素荧光标记的二抗(购自赛默飞世尔中国 浓度：1∶2000)3 ml，37 ℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶标记链霉卵白素，37 ℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，增强型HRP-DAB底物显色试剂盒(PA110)显色，自来水冲洗，复染，封片。

1.3 结果判断

随机选取5个视野，对染色强度和阳性细胞比例进行评价，其中染色强度：0分是无着色，1分是淡黄色，2分是黄色，3分是棕黄色；阳性细胞比例：0分是低于10%，1分是10%～30%，2分是31%～60%，3分是超过60%。阳性表达为两者比例得分之和≥3分。

1.4 统计学方法

本文得到的所有数据应用软件包SPSS 22.0进行分析，其中计量资料以均数±标准差来表示，行t检验，计数资料以%表示，行卡方检验，相关性采用Spearman秩相关。检验水准=0.05。

2 结果

2.1 二组Slit2、MAGE-A3表达比较

宫颈癌组织中Slit2阳性表达率明显低于正常宫颈组织(P<0.05)，而MAGE-A3阳性表达率明显高于正常宫颈组织(P<0.05)。见表2。

表2 二组Slit2、MAGE-A3表达情况比较(例，%)

2.2 Slit2、MAGE-A3表达与临床病理特征关系

TNM分期Ⅱ期、有淋巴结转移组织Slit2阳性表达率明显低于Ⅰ期和无淋巴结转移组织(P<0.05)；TNM分期Ⅱ期、中低分化、有淋巴结转移组织MAGE-A3阳性表达率明显高于Ⅰ期、高分化和无淋巴结转移组织(P<0.05)。见表3。

表3 Slit2、MAGE-A3表达与临床病理特征的关系(例，%)

2.3 相关分析

将宫颈癌组织Slit2、MAGE-A3表达进行相关分析，显示Slit2与MAGE-A3表达呈负相关(γs=-0.430，P<0.05)，见表4。

表4 相关分析

3 讨论

宫颈癌是临床上已知的发病病因较为清晰的恶性肿瘤，高危HPV病毒的感染，能够持续诱导柱状上皮细胞的病变，最终促进宫颈癌细胞的早期发生。HPV病毒颗粒感染后通过E6/E7蛋白的扩增和整合作用，提高了柱状上皮细胞癌基因的激活程度，增加了细胞周期的调控紊乱风险[4]。临床观察发现，宫颈癌患者的生存预后的恶化较为明显，其中晚期病情进展速度较快[5]。而通过对于宫颈癌临床病理特征的评估，能够为临床上宫颈癌诊疗提供依据。虽然宫颈鳞状上皮细胞抗原能够在宫颈癌的诊疗过程中发挥作用，但鳞状上皮细胞抗原评估宫颈癌临床病理特征的符合率较低，其对于宫颈癌病情评估的一致性仍然存在一定的不足[6-7]。本次研究通过对于宫颈癌病灶组织中Slit2、MAGE-A3的表达分析，能够具有下列几个方面的作用：①能够为临床上宫颈癌的生物学治疗提供免疫靶点；②能够为临床宫颈癌的病情的评估提供依据。

Slit2是癌细胞增殖调控因子，具有调控癌细胞周期的作用，可以抑制癌细胞的增殖速度，降低癌细胞G1/S期的细胞比例。基础分子领域的研究还认为，Slit2还能够提高癌基因错配的风险，抑制癌基因的激活程度[8]；MAGE-A3是黑色素瘤相关癌基因，其不仅能够影响到恶性黑色素瘤的发病过程，同时还能够提高癌细胞内MAPK信号通路的激活程度，促进癌细胞浸润和粘附能力的增强。现阶段临床上已有的相关研究，主要探讨了黑色素瘤基因在宫颈癌病灶组织中的表达情况，认为黑色素瘤相关基因与宫颈癌的发生或者放化疗敏感性有关[9-13]，但对于Slit2的表达与宫颈癌临床病理特征的关系研究不足。

免疫组化分析了Slit2、MAGE-A3在宫颈癌患者中的表达情况中发现，Slit2蛋白的表达阳性率在宫颈癌病灶组织中明显下降，而MAGE-A3的表达阳性率明显上升，相比于正常宫颈组织，均具有统计学差异，表明Slit2、MAGE-A3的异常表达可能影响到了宫颈癌的发病过程。Slit2的表达缺失，主要在于其表达缺失，失去了对于癌基因的错配修复作用，导致癌细胞内癌基因异常蓄积，增加了癌细胞周期紊乱的风险；MAGE-A3对于宫颈癌发生的影响，在于其能够提高HPV病毒整合E6/E7蛋白的能力，促进了宫颈癌细胞持续异常转录的风险。有其他研究者也认为，在宫颈癌患者病灶组织中，MAGE-A3蛋白的表达阳性率可随着宫颈癌患者病情进展速度的恶化而显著上升，在放化疗效果较差或者短期内复发的患者中，MAGE-A3蛋白的表达水平或者阳性率可翻倍上升[14]。在研究Slit2、MAGE-A3的表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系中发现，Slit2蛋白的表达阳性率在临床分期较晚或者淋巴结转移较为明显的宫颈癌患者中下降更为显著，Slit2的表达对于宫颈癌临床病理特征的影响，主要在于能够影响到宫颈柱状上皮细胞浸润突破宫颈基底膜组织的能力，增加了癌细胞粘附盆腔淋巴结组织的能力[15]；TNM分期Ⅱ期、中低分化、有淋巴结转移组织MAGE-A3阳性表达率明显高于Ⅰ期、高分化和无淋巴结转移组织，MAGE-A3的高表达对于宫颈癌病情的影响，在于其能够提高癌细胞伪足的形成能力，促进癌细胞分化诱导因子cyc的表达缺失，最终影响到癌细胞分化程度及淋巴结转移风险。相关关系分析可见，Slit2、MAGE-A3呈负相关关系，提示二者在宫颈癌的发病过程中可能发挥了一定的协调作用，Slit2、MAGE-A3可能在癌基因的调控和癌细胞生物学行为的修饰等方面有着相互拮抗的作用。

综上所述，宫颈癌组织Slit2表达下调，而MAGE-A3表达上调，两者在疾病发生发展中可能有重要作用，且两者间存在负相关关系。对于Slit2、MAGE-A3与宫颈癌临床预后的关系研究，以期为临床上宫颈癌的诊疗提供帮助。