热空气处理柞蚕卵对孵化率的影响研究

马 静 张永君 杨 爽

(1河南省蚕业科学研究院，河南郑州 450003； 2南召县蚕业中心，河南南召 474662)

柞蚕卵是不滞育卵，产下后在22 ℃保护下，每天发育1个胚胎阶段(卵龄)[1]。利用温汤或热空气处理家蚕卵防治家蚕微粒子病多有报道[2-5]，防治效果与处理时的胚胎阶段有密切关联，最佳处理时间为产卵后12～18 h。关于柞蚕卵运用热处理防治柞蚕微粒子病，吴玉林等[6]用50 ℃温汤浸早期柞蚕卵10～20 s，刘淑敏等[7]使用微波处理柞蚕卵均取得一定的防治效果，他们都是利用热能刺激柞蚕卵以产生抗菌物质或直接杀灭微孢子虫；褚金祥等[8]利用热空气处理柞蚕蛹对防治柞蚕微粒子病也有一定的效果。但利用热空气处理柞蚕卵防治微粒子病尚未见报道。柞蚕微粒子病是一种柞蚕胚胎传染性病害，也是柞蚕生产上的主要病害，目前主要是通过雌蛾目选和显微镜检查淘汰患病雌蛾及其所产蚕卵的方法防治。河南省多数蚕种场普通种都是采用目选雌蛾的办法制种，目选后雌蛾产的柞蚕卵销售给蚕农，仍常造成柞蚕微粒子病胚胎传染，据我们调查，目选蚕卵放养的蚕茧带毒率为30%～100%。为探求一种热空气处理柞蚕卵的方法，既能对柞蚕微粒子病胚胎传染起到防治作用，又不会对柞蚕卵孵化造成不良影响，2017—2019年我们对101柞蚕卵不同胚胎阶段采用48 ℃热空气处理进行了试验研究，因2017—2019年的试验结果基本相同，故仅将2019年试验结果报告如下，供同仁参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 供试柞蚕品种 柞蚕品种101，由河南省蚕业科学研究院柞蚕资源研究室提供。取交配12 h以上的101雌蛾400只，拆对后剪去三分之二翅和三分之一的足节放入纱网袋中，在22 ℃产卵室产卵8 h 后取出雌蛾，因雌蛾在产卵室4 h为产卵高峰，故蚕卵感温按22 ℃、4 h计。以柞蚕卵感温22 ℃ 24 h 为第1个胚胎阶段即L-1，感温22 ℃ 48 h为第2个胚胎阶段L-2，柞蚕卵经过10个胚胎阶段就出蚕收蚁；我们把柞蚕卵胚胎阶段划分为10个，即L-1、L-2、L-3、L-4、L-5、L-6、L-7、L-8、L-9、L-10。

1.1.2 主要仪器设备 LRH-70型生化培养箱，购自上海一恒科学仪器有限公司；DHG-9030A型鼓风干燥箱，购自上海精密仪器仪表有限公司。

表1 48 ℃热空气处理不同时间柞蚕带毒卵不同胚胎阶段的孵化率(2019年)

处理时间/min不同胚胎阶段的孵化率/%L-1L-2L-3L-4L-5L-6L-7L-8L-9L-104094.6793.6794.0092.0093.0091.6794.0091.3393.0092.004593.3391.6792.3393.3393.0091.3393.3392.6791.6792.335093.6792.0092.0093.0093.0089.00 *92.0091.0092.3392.335592.3392.6792.6793.0092.6781.67 **92.3392.3392.3393.006092.6792.3392.6792.6792.6768.33 **77.67 **86.67 **90.6791.676595.0093.0092.6794.0093.6763.33 **74.00 **80.67 **92.0093.337093.0093.6794.0094.3393.0049.00 **71.33 **89.33 *93.6792.677594.0094.0092.6792.0092.6766.00 **62.33 **41.67 **92.3391.338093.3393.6792.3392.0087.33 **59.67 **41.00 **24.67 **92.6792.008592.3393.3392.3389.33 *81.00 **44.33 **33.67 **13.00 **91.6789.33 *对照92.6792.6792.6792.6792.6792.6792.6792.6792.6792.67

L-1、L-2……L-10分别表示第1、第2……第10胚胎阶段，即不同卵龄；*表示差异显著，**表示差异极显著。

1.2 试验方法

1.2.1 柞蚕卵热空气处理温度的设定 根据家蚕卵干热空气处理46 ℃、60 min，不影响实用孵化率，而且对家蚕微粒子病胚种传染的防治效果可达到93%～100%[4]进行试验设计。由于我们在预试验中发现，48 ℃热空气处理90 min L-1、L-2、L-3柞蚕卵会有4.33%失水而干瘪，孵化率降低4.33%，推测是由生理性失水造成的，而且随着处理时间增加，生理性失水造成的干瘪急剧增加，48 ℃处理95 min 有9.33%的柞蚕卵失水干瘪，处理100 min有33.33%的柞蚕卵失水干瘪，故将48 ℃热空气处理最长临界时间点设为85 min。据此推算出临界处理时间点孵化率应为90%，符合一化性柞蚕种卵质量指标[9]。另外，考虑安全方面的因素和根据预备试验的结果将柞蚕卵热空气处理的温度设为48 ℃。

1.2.2 柞蚕蛾的镜检 试验雌蛾从产卵室取出后立即进行镜检，将镜检无毒和镜检带毒的雌蛾和所产蚕卵分别保存。

1.2.3 柞蚕卵的消毒 因柞蚕卵是无滞育期，自然条件下，温度超过7.5 ℃胚胎就开始发育，为了胚胎阶段精准和试验结果科学，将感温22 ℃ 4 h的101品种的柞蚕卵混合均匀后用含0.03%有效氯的漂白粉溶液进行卵面消毒，消毒后晾干备用。

1.2.4 试验分区 将镜检无毒的每100粒101蛾卵装入透气纸袋中作为1个小区，共装303个纸袋，计303个小区，其中3个小区作为无毒卵对照区；另外，将镜检带毒的每100粒101蛾卵装入透气纸袋中作为1个小区，也装303个纸袋，共计303个小区，其中3个小区作为有毒卵对照区。

1.2.5 柞蚕卵的热空气处理 将分区后的柞蚕卵全部放入温度22 ℃、相对湿度75%的生化培养箱中保护，因柞蚕卵在产卵室已经感温4 h，故首次保护20 h为L-1，取出30个小区放入48 ℃热空气中处理，之后每间隔24 h(1个胚胎阶段)取30个小区放入48 ℃热空气中处理，每次放入48 ℃热空气中处理的30区柞蚕卵，处理40 min后取出3区，之后每间隔5 min取出3区，直至全部取出，处理时间分别为40、45、50、55、60、65、70、75、80、85 min，最长热空气处理时间为85 min。柞蚕卵在48 ℃热空气中处理后，重新放入温度22 ℃、相对湿度75%的生化培养箱中保护至孵化，调查处理区和对照区的孵化率。河南省普通种孵化率一般在93.00%左右，且3 d收蚁孵化率降低3.00%以上，孵化率会低于90.00%，不符合一化性柞蚕种卵质量指标[9]，会对柞蚕生产造成损失，因此以孵化率低于对照区3%为临界处理时间点。

1.3 数据处理与分析

采用Excel 2003软件对数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 48 ℃热空气处理不同时间对柞蚕带毒卵不同胚胎阶段孵化率的影响

从表1可以看出，48 ℃热空气处理不同时间对柞蚕卵不同胚胎阶段的孵化率有不同的影响，处理45 min对所有胚胎阶段的孵化率均没有不良影响，超过45 min，L-4、L-5、L-6、L-7、L-8部分试验区的孵化率与对照区相比有不同程度的下降，最低区孵化率仅有13.00%(L-8处理85 min)，比对照区低了79.67个百分点。L-1、L-2、L-3、L-9胚胎阶段48 ℃热空气处理85 min以内，孵化率与对照区相比差异不显著；L-4、L-10胚胎阶段48 ℃热空气处理80 min以内，L-5胚胎阶段48 ℃热空气处理75 min以内，L-6胚胎阶段48 ℃热空气处理45 min以内，L-7、L-8胚胎阶段48 ℃热空气处理55 min以内，孵化率在91.00%～95.00%之间，与对照区相比差异不显著。L-5胚胎阶段48 ℃热空气处理超过80 min、L-6胚胎阶段48 ℃热空气处理超过55 min、L-7和L-8胚胎阶段48 ℃热空气处理超过60 min，孵化率在87.33%～13.00%之间不等，极显著低于对照区。

2.2 不同胚胎阶段柞蚕卵对48 ℃热空气处理的耐受力

从表1可以看出，胚胎阶段不同耐受48 ℃热空气时间长短也不同，L-1、L-2、L-3、L-4、L-5等胚胎发育早期阶段和L-9、L-10胚胎发育后期阶段对热空气的耐受性较强，L-6、L-7、L-8等胚胎发育中间阶段对热空气的耐受性较弱，整体来说以L-6对48 ℃热空气的耐受性最弱。48 ℃热空气最长处理时间临界点为85 min，最短为45 min。

2.3 带毒卵与无毒卵48 ℃热空气处理后的孵化率

图1 48 ℃热空气处理对带毒卵与无毒卵不同胚胎阶段孵化率的处理时间临界点

48 ℃热空气处理不同胚胎阶段的101柞蚕卵，带毒卵区与无毒卵区的孵化率时间临界点见图1。根据一化性柞蚕种卵质量指标[9]，热空气处理101柞蚕卵孵化率90.00%为临界处理时间点，即与对照区的孵化率相差2.67个百分点，101柞蚕卵48 ℃临界处理时间各个胚胎阶段均超过45 min，L-1、L-2、L-3、L-9等胚胎阶段的耐受时间为85 min，均为处理最高临界时间点。我们调查还发现，孵化率在带毒卵和对照卵之间没有明显差异，用针挑开L-9胚胎阶段的卵壳发现卵内胚胎已经形成白色蚁蚕，48 ℃热空气处理可能会影响柞蚕体质，即不宜在L-9胚胎阶段采用48 ℃热空气处理来防治柞蚕微粒子病。

3 小结与讨论

柞蚕微粒子病一直是柞蚕的重要病害之一，目前主要是通过镜检和目选淘汰带毒蛾、卵进行防治，但由于镜检和目选工作量大且相对集中，人工操作误差不可避免，造成柞蚕微粒子病难于防治和杜绝，给柞蚕生产造成严重危害。已有研究显示，热空气处理家蚕卵防治家蚕微粒子病处理的温度为46 ℃、时间为40～60 min[2-5]，48 ℃热空气处理40～60 min，多数蚕卵因失水过多而凹陷[10]，48 ℃热空气处理家蚕卵超过60 min就会因为失水过多而严重影响孵化率[9]。本次试验研究结果表明，柞蚕卵用48 ℃热空气处理85 min对L-1、L-2、L-3、L-4、L-9、L-10等胚胎阶段的孵化率无不良影响，柞蚕卵对48 ℃热空气处理的耐受性比家蚕卵强。

热空气处理家蚕卵防治家蚕微粒子病以产卵后18 h为最佳处理时间点[11]。本试验结果表明，柞蚕胚胎阶段在L-1、L-2、L-3均表现出对热空气处理85 min具有较强的耐受性，根据热空气处理家蚕卵防治家蚕微粒子病的研究结论，建议柞蚕卵以L-1、L-2、L-3胚胎阶段为防治柞蚕微粒子病处理时间点，处理时间为60 min，处理温度48 ℃。

另外，柞蚕微孢子虫在柞蚕卵中的形态和对热空气耐受性有待进一步研究，柞蚕微孢子虫与家蚕微孢子虫一样存在芽殖体和裂殖体，芽殖体和裂殖体耐热空气要比微孢子虫弱，也是热空气处理防治柞蚕微粒子病的最佳时期[4-5]。热空气处理柞蚕卵防治柞蚕微粒子病胚种传染的最适宜胚胎阶段应与防治效果相关联起来，不同胚胎阶段热空气处理对柞蚕微粒子病的防治效果有待进一步试验和验证，通过研究形成能够在实际生产中推广应用的一项热空气处理防治柞蚕微粒子病的技术。