实验用雪貂的饲养管理探析*

2021-12-04何滋林姚敏桦赵博厚祁艺新纪庆超常雯雯刘晓东隋宏书

实验动物科学 2021年5期

何滋林姚敏桦韦涛赵博厚祁艺新纪庆超常雯雯刘晓东隋宏书

(山东第一医科大学组织学与胚胎学教研室，泰安 271000)

雪貂(Mustelaputoriusfuro)，哺乳纲食肉目鼬科貂属。成年雪貂平均体质量0.5～2.7 kg，平均体长33～41 cm，平均尾长7.6～10 cm，寿命为7～10岁。雪貂属夜食性动物，性情温和、行动敏捷且好奇心强。其消化系统短且缺乏盲肠，因此机体代谢快。

在普通条件下，雪貂生理状况易受多种因素影响，容易患病。因此，建立一套科学的、可行的且规范的饲养方法非常重要。结合实验动物管理规定和本实验室雪貂饲养管理的经验，总结出一套规范、实用及可行性高的操作程序。

1 生活环境

1.1 居住环境

根据王宁等[1]报道，动物生物安全实验室与生活区的距离应符合《生物安全实验室建筑技术规范》的要求，笼舍和设施的设计应充分考虑为动物提供舒适的环境和足够的空间。笼-盆结合笼舍，笼和盆采用不锈钢和聚乙烯材料，材料无毒、硬度大且耐磨性强；笼网格间距3 cm且网丝直径2 mm，防止小雪貂逃逸。笼舍较大的空间满足了雪貂爱群居和活泼好动的需要；塑料底盘内盛有由优质木屑和散砂按5∶1配成的垫料。垫料应该保证清洁、干燥、吸水、无虫以及毒害物质不能超标，不能含有杀虫剂和杀菌剂。分层饲养既能节约饲养面积，又利于通风。在分娩期，雪貂笼内放置内置产笼可以提高雪貂分娩成功率，同时也为幼崽提供安全舒适的环境。

1.2 外周环境

根据王宁等[1]报道，雪貂生活的适宜温度是22～24 ℃，相对湿度是40%～60%，雪貂缺少汗腺，当温度超过32 ℃，成年貂会焦躁、紧张不安，甚至出现热虚脱的症状。雪貂主要通过呼吸系统散热，所以要注意控制饲养间温度。雪貂的呼吸道对异物敏感，过多的灰尘会刺激雪貂气道，饲养间要定期进行除尘操作。空调处理比较简单，按一般舒适性的空调系统进行设计，包括进风和除尘装置、消毒设备以及处理室内温度和相对湿度的设备。

2 饲养方式

饮用水要求：(1)煮沸消毒灭菌，无需蒸馏、离子交换和反渗透，以满足动物对微量元素的需求；(2)温度保持30 ℃左右，防止水温过高或过低刺激雪貂消化道；(3)随时注意水质变化，定期对水壶进行消毒处理，防止细菌滋生，消毒周期一般为3 d[ 1 ]。饮水装置：动物专用滚珠水壶。

雪貂对营养要求比较高，饲喂市场上销售的雪貂颗粒料，会出现营养不良，生长缓慢，分娩后的母貂甚至出现食仔的应激反应。根据马建章等[2]报道，雪貂生长发育情况见表1所列，3月龄内的雪貂使用羊奶喂养；4月龄内雪貂生长旺盛，应该选用高蛋白质及高脂肪的饲料；4月龄后生长放缓，使用高蛋白质及高脂肪的饲料，雪貂会出现溢脂(貂毛变黄、脱毛，首先出现“老鼠尾”)。因此，改进饲料：将熟鸡肉和貂哺乳期膨化混合饲料(爱得利都牌，主要成分见表2所列)使用搅拌机充分混匀，制成不同生长阶段的肉粒状饲料，为充分符合雪貂的肉食特性，投喂时适当添加羊奶，同时以雪貂颗粒料作为辅食。饲料保证蛋白质不低于38%，脂肪不低于18%。

表1 雪貂生长发育情况[2]

表2 爱得利都貂哺乳期用膨化混合饲料产品主要成分(%)

表3 不同生长阶段雪貂饲料配方

3 雪貂的实验操作

3.1 抓取保定

雪貂牙齿锋利会带来危险，抓取时必须佩戴防护手套。单手抓住雪貂的颈背部，将其四肢悬空进行固定，大多数雪貂在这种姿势下比较放松和配合，可以进行皮下或腹腔药物注射(图1)。

图1 雪貂抓取

3.2 雪貂体温及体质量的测量

由于体温及体质量变化是构建流感病毒模型后，病程进展变化的重要指标，因此，除了需在生物安全柜内进行测量外，也需要在每天的同一时刻进行测量以排除动物体温和体质量在1 d内的波动。体温测量时，将甘油润滑后的电子体温计插入雪貂直肠，保持体温计读数5～10 s无变化后进行记录。雪貂的正常体温范围是37.8～40 ℃，平均体温是38.8 ℃，电子体温计检测操作简便快捷、数值稳定且记录准确，对雪貂无影响。测量体质量时，将雪貂从笼具内取出放于电子秤上保持读数静止3 s以上再进行记录，精确度0.01 kg。

3.3 雪貂麻醉

根据张涛等[3]报道，麻醉剂的配方和用量见表4所列，使用配制的麻醉剂为舒泰50和速眠新Ⅱ。将舒泰50和速眠新Ⅱ按照1∶5的体积比充分混合，每只雪貂使用剂量为0.05～0.08 mL/kg。按照上述方式抓取雪貂使其仰卧，使用75%乙醇棉球在雪貂大腿内侧消毒，将麻醉剂注入其大腿肌肉组织中。每只雪貂注射0.08 mL麻醉剂后，观察雪貂眼睛及四肢的松弛状态和程度来确定是否完全麻醉。研究统计显示,雪貂在该剂量下维持麻醉时间为45～90 min，该剂量能保证对雪貂有效的麻醉，同时不会过度麻醉导致雪貂长时间不能苏醒。浅麻醉用在流感病毒经鼻造模，因为雪貂本身的喷嚏反射会影响造模的成功率；雪貂采血或处死时，需要深层麻醉，采取注射麻醉方法，保证对雪貂操作有足够时间，同时严格控制麻醉剂的用量，降低过度麻醉给雪貂和实验造成的影响。另外，麻醉剂需要专人负责管理，提前配制好足量的麻醉剂。由于存在个体差异，同质量雪貂会出现耐受性情况，可适当补充注射麻醉剂。实验已通过山东省第一医科大学福利伦理审查，编号：山东省医动批：NO.2021-662。

表4 麻醉配方和用量[3]

3.4 雪貂心脏采血和分离血清

Matsuoka等[4]实际操作显示，雪貂前腔静脉血管较细，颈部皮肤较疏松，针头容易滑落，所以采用易操作且成功率较高的心脏采血，且一次采血不能超过10%的动物血液量。将雪貂按上述方式抓取和麻醉，仰卧平放在生物安全柜内的操作盘中，使用剃毛器将雪貂胸前的体毛剪掉，用手探明心脏搏动最强部位，通常在胸骨左缘的正中，位于倒数第2～3肋骨中间。采血部位用75%乙醇擦拭消毒，使用1 mL一次性注射器垂直缓慢刺入心脏，缓慢拔针抽血，直到血开始填充注射器，收集所需血量后，拔出针头，使用消毒脱脂棉轻压注射部位止血。将血液转移到血清分离管，室温静置25 min以上，12 000 r/min离心10 min，将分离血清转移至另一干净离心管中，-20 ℃保存。研究显示雪貂每周一次心脏采血0.5～0.6 mL，连续采血不超过两个月，对雪貂健康状况和体征指标无明显影响。

3.5 雪貂处死和组织取样

雪貂在组织取样及剖检前需要执行安乐死。使用0.4 mL麻醉药注射雪貂大腿肌肉，使其在1～2 min深度麻醉，可以通过心脏穿刺采集大量血液(50 mL左右)，然后心脏穿刺注射安乐死 Euthanasia Ⅲ 溶液(每毫升包含50 mg苯妥英钠和390 mg戊巴比妥钠)[4]。正确收集雪貂的组织样本对于分析非常重要，需使用单独的器械收集不同组织样品，将要收集的组织所需要器具放在用75%乙醇消毒的烧杯中，每个组织单独放入一个烧杯。用无菌纱布轻拭擦净，将采集的组织放入预先称质量和标记清晰的收集管内尽快冻存。根据Matsuoka等[4]报道，理论上，雪貂组织应优先收集病毒含量低的组织，如脑、心、肝、脾及肾组织，使高病毒含量器官(如肺)造成的污染降低到最小。

3.6 实验结束废弃物和动物的处理

实验结束后，在不影响实验结果的情况下，应选择“仁慈终点”，避免动物延长承受痛苦的时间[1]。实验产生的固体废弃物主要包括实验过程中使用的仪器、一次性器具、动物尸体、组织等。对于价值较高可以重复使用的仪器(如剪刀、解剖刀等)，使用高压蒸汽灭菌法或微波消毒法进行灭菌消毒，这两种方法具有稳定可靠的灭菌作用[5]。一次性器具用后必须毁型和无害化处理，严禁重复使用[6]。动物尸体和组织切片装入专用医疗垃圾袋中，仔细消毒后放入冷柜中贮存，转交专业公司进行无害化处理[5]。