2 型糖尿病小鼠应用环氧泽泻烯对血糖水平的影响

魏 涛 范小娟

（1 徐州医科大学公共实验研究中心 221000 2 江苏省军区徐州第三离职干部休养所门诊部 221000）

糖尿病对人体健康存在严重危害，是一种常见代谢性疾病，2 型糖尿病患者人数较多，且患者多表现出高血糖症状。2型糖尿病由于无法根治，主要治疗方式为降低以及控制患者血糖。2 型糖尿病由于受到多种因素的影响而导致人体内的胰岛素分泌不足，或是人体无法充分利用胰岛素，继而出现血糖水平持续升高的现象。当人体长期处于高血糖状态下时，人体的大血管、微血管以及神经均会出现不同症状的病变，对人体器官造成影响，影响患者正常生活，严重情况下威胁患者身体健康。中药泽泻能够提取出良好的降糖活性，但是药物具体降糖成分以及降糖机制并不明确。泽泻的一种重要药效物质基础为倍半萜类化合物，该物质基础代表成分为环氧泽泻烯，具有一定的抗炎效用。

本篇文章研究环氧泽泻烯对血糖水平，建立2 型糖尿病小鼠模型，给予环氧泽泻烯，分析小鼠血糖值变化。现作如下报道。

1 资料与方法

1.1 实验动物

本次研究中所选取的小鼠鼠龄不足7 周，体重大约为21～23g，小鼠其他生命体征相同，并无统计学差异。

1.2 细胞

小鼠3T3-L1 前脂肪细胞。

1.3 药物与试剂

药物：罗格列酮、链脲佐菌素、葡萄糖、烟酰胺、胰岛素。

试剂：油红O 和哈里斯氏苏木精染剂、葡萄糖荧光示踪剂2-[N-(7-硝基苯-2-氧代-1，3-重氮基-4-基)氨基]-2-脱氧-D-葡萄糖（2-NBDG）、环氧泽泻烯、胎牛血清、胰酶、低糖DMEM 培养基。

1.4 仪器

本次研究使用仪器为：罗氏血糖仪、荧光显微镜XTZ-Y3、IFS-110-8 型CO2恒温培养箱。

2 方法

2.1 2 型糖尿病模型诱导

小鼠禁食过夜，注射240mg·kg-1烟酰胺，注射15 分钟之后，注射100mg·kg-1链脲佐菌素，以此建立模型。

2 天后，再次采用腹腔注射的方式给予小鼠剂量相同的烟酰胺以及链脲佐菌素。

3 周后对小鼠空腹血糖值以及第22 天的口服葡萄糖耐受试验期间的小鼠空腹血糖进行测试，判断2 型糖尿病模型诱导是否成功。相较于空白对照组，采用腹腔注射方式注射烟酰胺以及链脲佐菌素的小鼠空腹血糖值水平明显高于11.1mmol·L-1，证明建模成功。小鼠模型分为三组，一组为模型组、一组为使用罗格列酮的小鼠、一组使用不同浓度的环氧泽泻烯小鼠（5、10、20 mg·kg-1）。罗格列酮组浓度为10 mg·kg-1，环氧泽泻烯组浓度分别5mg·kg-1、10mg·kg-1、20 mg·kg-1；上述每组各分配10 只小鼠，每只小鼠接受为期3 周的灌胃处理，同时还应准确测量小鼠体质量以及血糖。灌胃主要采用生理盐水以及10mg·kg-1罗格列酮，除此之外，还应测定小鼠体重确定适宜环氧泽泻烯剂量。

2.2 测定造模期间血糖浓度

在第一次为小鼠注射烟酰胺以及链脲佐菌素之前，采集20μL 的小鼠血液，给药后，血液采集时间为7 天一次，测定小鼠血糖值。小鼠用药22 天之后进行耐量试验，小鼠禁食过夜实施灌胃，灌胃方式为给予剂量相同的葡萄糖溶液，控制剂量为2mg·kg-1，在小鼠灌胃前以及灌胃后第30、60、120 分钟对小鼠血液标本进行采集，分别测定小鼠血糖浓度。确定本次研究中的模型组，主要为血糖值测定两次均高于11.1mmol·L-1的小鼠。

2.3 口服葡萄糖耐量试验

试验于灌胃后第22 天开展。小鼠禁食过夜实施灌胃，模型组以及常规组给予生理盐水，采用10mg·kg-1罗格列酮对罗格列酮组实施灌胃，分别采用5、10、20mg·kg-1环氧泽泻烯为环氧泽泻烯组实施灌胃，2 小时后，采用2mg·kg-1的葡萄糖溶液为各组小鼠实施灌胃，分别于灌胃前以及灌胃后第30、60、120 分钟采集血液标本，对血糖浓度进行测定。

2.4 环氧泽泻烯测定2 型糖尿病小鼠降糖活性

用药前以及用药后均应测量小鼠血糖水平，用药后需按照间隔7 天的频率进行血糖测量。同时应在实验过程中，观察小鼠使用不同浓度的环氧泽泻烯后的血糖水平。

2.5 体重测定

分别记录2 型糖尿病模型建立过程中以及建立后灌胃给药过程中，各组小鼠体重变化状况。

2.6 细胞培养

放置培养基与培养箱中，培养基应采用DMEM 培养基，并在其中加入血清，将3T3-L1 前脂肪细胞放置其中。控制培养箱温度为37℃，控制细胞培养箱中的二氧化碳浓度为5%。

2.7 油红O 染色

诱导3T3-L1 前脂肪细胞，使其分化。实际诱导操作：接种前脂肪细胞，利用无血清培养基培养细胞，培养1 日之后，更换培养基为含血清培养基，并分别采用含有浓度为0.5、1μmol·L-1的环氧泽泻烯或是含有浓度为0.5、1μmol·L-1罗格列酮的DEME 培养基继续培养3 天。对照组小鼠细胞不需采用药物进行处理，直接用1μmol·L-1胰岛素进行处理。培养时间足够12 天后，实施染色。

2.8 统计学分析

本研究涉及到的数据采用SPSS25.0 进行录入和统计分析，相关数据采用均值±标准差描述，组间的差异比较采用配对样本t 检验，血糖值采用单因素方差分析，p＜0.05 为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 建立2 型糖尿病模型期间的小鼠体重

对建立模型期间的小鼠进行体重记录，模型内小鼠体重有所降低，降低差异较为明显。

3.2 2 型糖尿病小鼠血糖受环氧泽泻烯的影响

相较于2 型糖尿病模型组小鼠，罗格列酮给药前以及给药第7、14、21 的小鼠血糖明显降低。不同浓度下，环氧泽泻烯产生的降血糖活性不同。10mg·kg-1组高于5mg·kg-1剂量组，但不具有统计学意义（P＜0.05）。且10mg·kg-1组与20mg·kg-1组达到的效果相近。

3.3 环氧泽泻烯对2 型糖尿病小鼠口服葡萄糖耐受试验的影响

实验中第30 min 以及60min 时，罗格列酮组、环氧泽泻烯组的血糖值有降低趋势，且低于模型组。但与模型组进行对比后可知，罗格列酮的降低趋势更加显著，而5mg·kg-1环氧泽泻烯的降低趋势并不显著，这证实5mg·kg-1环氧泽泻烯并不具有显著降糖效果。

3.4 环氧泽泻烯对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响

对小鼠前脂肪细胞分化状况进行记录，在前脂肪细胞分化期间，罗格列酮具有良好的加速效果，不同浓度的环氧泽泻烯也能促进（0.5、1μmol·L-1）对前脂肪细胞分化，相较于罗格列酮，0.5、1μmol·L-1环氧泽泻烯在促进细胞分化中的浓度依赖趋势更强。

4 讨论

2 型糖尿病是一种较为复杂的代谢血糖疾病，是一种原发型疾病。大多数糖尿病患者呈现出2 型糖尿病病症，该疾病患者群体多为中年人，年龄多在四十岁左右。目前现有的技术对该疾病无法进行彻底根治，治疗方式只能采取措施进行缓解，降低患者血糖，缓解患者病情状况。引起2 型糖尿病的因素较多，例如患者生活方式、不健康的饮食习惯，遗传因素以及环境因素都可能会引发2 型糖尿病。

2 型糖尿病危害较大，对人体多个器官都有影响。对于患者肾脏的伤害，呈现在病情早期，早期2 型糖尿病患者血糖等指标较高，肾脏循环功能受到影响，随着病情的逐渐加重，出现肾衰竭现象，直接使肾脏功能受损，威胁病人健康。由2型糖尿病引发的肾脏功能缺失，是造成患者死亡的重要因素之一。除了肾脏功能受损，患者还会出现不同的并发症，例如昏迷或是脑补功能受损，造成患者出现瘫痪现象，不能正常生活。

现阶段，一般市面上用于治疗2 型糖尿病的西药，服用后患者表现出一定的不良反应。使用中药进行加工处理，获得的治疗药物具有更有高的治疗效果，且副作用较小。在糖尿病的治疗中重要具有显著应用前景。有研究指出，肽类、黄酮、苷类、生物碱等均具有良好的降糖活性，但是药物具体活性物质尚未明确。基于上述情况，在中药资源中选取机制明确、活性物质安全的药物用于2 型糖尿病治疗具有重要意义。在本研究中，将2 型糖尿病小鼠的体重作为参考值，采用环氧泽泻烯进行灌胃，小鼠血糖值低于给药前血糖值，这提示环氧泽泻烯在2 型糖尿病小鼠中具有显著降糖效用。对小鼠进行葡萄糖耐量实验，罗格列酮的降低趋势更加显著，而5mg·kg-1环氧泽泻烯的降低趋势并不显著。在脂肪细胞油红O 染色实验中，记录小鼠细胞分化状况，实验结果显示，环氧泽泻烯浓度不同，产生的效果不同，如果浓度为0.5、1μmol·L-1，对3T3-L1 前脂肪细胞分化有一定积极意义，对于胰岛素敏感性能够起到一定的强化效用。

综上所述，环氧泽泻烯具有显著降糖效果，能够促进脂肪分化，但针对药物的具体作用机制还需进行深入研究。