IL-17F基因1507位点多态性与儿童肠道病毒71型感染严重程度的相关性

吴思菲 宋杰 陈宗波

(青岛大学附属医院儿科，山东 青岛 266003)

肠病毒71型(EV71)是一种无包膜、单链RNA病毒，它属于人肠道病毒A组。EV71可引起手足口病、无菌性脑膜炎、急性脑干脑炎等多种疾病，是婴幼儿手足口病重症感染的主要病原体之一[1-3]。EV71已成为一种神经元侵袭性病毒，在亚太地区多次爆发。2008-2012年，我国出现EV71手足口病大爆发，发病数超700万例，死亡2 457例[4]。EV71重症感染致残率和病死率均较高，而发病机制尚未明确。其感染与宿主易感性、病毒毒力、生活环境等多种因素有关。从宿主基因水平探讨EV71感染的易感性与严重性是目前研究的主要方向之一。白介素17F(IL-17F)是由Th17细胞分泌的一种炎性因子，它可以诱导多种促炎因子和趋化因子的产生[5]。IL-17F基因与IL-17基因位于同一染色体区，二者有50%的同源性[6]。IL-17F在多种感染性疾病及自身免疫性疾病中起重要作用，如慢性阻塞性肺疾病、自身免疫性肾脏疾病和类风湿关节炎[7-9]。已有研究表明IL-17F基因1507位点多态性与病毒感染有关，但目前IL-17F基因1507位点多态性如何参与EV71感染尚不清楚，为了明确EV71易感人群及避免EV71重症感染带来的危害，本研究旨在探讨IL-17F基因1507位点多态性与儿童EV71感染严重程度的关系。

1 对象与方法

1.1

以2014年6月—2018年6月就诊于青岛大学附属医院和青岛市妇女儿童医院EV71病毒核酸检测阳性的360例患儿为感染组，其中男189例，女171例；年龄(4.02±1.76)岁。根据中国卫生部发布的《手足口病诊疗指南(2010年版)》中的标准[10]，将感染组分为轻症组233例和重症组127例。两组儿童年龄、性别等一般资料比较差异无显著性。以同时期就诊于上述两所医院的350例健康查体儿童为对照组，男183例，女167例；年龄(5.03±2.12)岁。对照组儿童EV71病毒核酸检测均为阴性，且咽拭子、粪便等标本中无EV71，并除外其他感染、神经系统相关疾病的儿童。

1.2

采用上海吉凯基因技术有限公司开发的多重连接检测反应技术检测IL-17F基因1507位点的多态性。PCR反应引物，正向：5′-GAGGGAGGACCCTTCCTGA-3′，反向：3′-GCCCACCTTTTCTCCCCAAG-5′。PCR条件：①95 ℃ 2 min，循环1次；②94 ℃ 20 s，65 ℃ 40 s，72 ℃ 1.5 min，循环11次；③94 ℃ 20 s，59 ℃ 30 s，72 ℃ 1.5 min，循环24次；④72 ℃ 2 min，循环1次。将1 μL碱性磷酸酶加入PCR产物中，并在75 ℃条件下灭活15 min。双连接反应：95 ℃ 1 min，56 ℃ 4 min，循环38次；置于4 ℃下保存。最后采用GeenMapper 4.0(Applied Bio system，美国)进行数据分析。

1.3

采用SPSS 21.0软件进行统计学分析，不同组间基因型以及等位基因分布的比较采用卡方检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1

感染组TT基因型频率和T等位基因频率均较对照组高，差异有统计学意义(χ2=4.399、6.722，P<0.05)。见表1。

表1 两组IL-17F基因1507位点基因型和等位基因分布比较

2.2

重症组TT基因型频率和T等位基因频率均较轻症组高，差异有统计学意义(χ2=8.119、9.277，P<0.05)。见表2。

表2 重症组和轻症组IL-17F基因1507位点基因型和等位基因分布

3 讨 论

EV71感染已经在全世界多个国家和地区流行，其临床表现轻重不一，轻者仅表现为自限性手足口病或者疱疹性咽峡炎，重者则可能出现脑炎、急性迟缓性麻痹、神经源性肺水肿或肺出血，甚至心肺衰竭[11-13]。其中脑干脑炎、神经源性肺水肿、心肺衰竭等并发症是导致死亡的主要原因。EV71感染引起严重并发症的机制尚未明确，其感染主要取决于病毒、宿主和环境等多重因素。目前已有多种研究表明细胞因子的基因多态性与EV71感染有关，其中LV等[14]发现IL-17F基因多态性与EV71脑炎相关，且IL-17F基因7488位点C等位基因为感染的保护因素。

IL-17家族是具有独特结构的新型细胞因子家族，其家族成员在炎性疾病中起着积极作用。该家族包括6个成员的配体(IL-17A～IL-17F)和5个受体(IL-17RA～IL-17RE)[15]。IL-17A与IL-17F有58%的同源性，它们的细胞来源和功能也非常相似，且在连锁基因上共同表达，通常由Th17细胞产生[16]。KAWAGUCHI等[17]研究发现IL-17F基因7488位点与激活靶细胞产生细胞因子和趋化因子的能力低下有关，并对野生型IL-17F的炎症作用可能具有保护性。已有研究证实，Th1、Th17以及细胞因子IL-17A、IL-6等均与EV71感染发病机制有关[18-20]。由于IL-17F和IL-17A存在同源性，并且IL-17F基因1507位点的多态性与多种免疫性及炎性疾病有关。基于上述机制，本次主要研究IL-17F基因1507位点多态性与EV71严重感染的关系。

本研究结果显示，感染组TT基因型和等位基因T频率较对照组高，且差异均有统计学意义。重症组中TT基因型频率较轻症组高出约2倍，其T等位基因频率也较轻症组高，且差异均有统计学意义。结果提示IL-17F基因1507位点基因型TT及等位基因T与EV71感染相关，尤其是EV71重症感染,这与之前有关报道的结果一致[21]。

本研究存在几点不足：第一，由于各组样本量少，且研究对象局限于青岛地区，可能存在地域差异；第二，未探讨IL-17F基因多态性在EV71感染过程中的调控机制。