不同培养温度对红托竹荪菌丝生长的影响*

巩玉辉，陈翠翠，方 晔，张 军，刘亚雯，彭洪斌，宋 雕，管 杰

（贵州金蟾大山生物科技有限责任公司，贵州 毕节 553300）

红托竹荪 [Dictyophora rubrovalvata Zang,Ji et Liou)]，属担子菌门（Basidiomycota） 鬼笔科（Phallaceae） 竹荪属（Dictyophora） 食用菌。我国竹荪食用历史悠久，早在唐代段成式的《酉阳杂俎》一书中已有记载，野生竹荪多生长在有大量竹子残体和腐殖质的竹林地，其味道鲜美可口，素有“菌中皇后”“山珍之王”的称号，且价格昂贵[1-3]。红托竹荪是贵州省特色食用菌，随着产业发展，对菌种的质量要求也越来越高，优良的菌种是生产的基础。试验主要通过测定不同温度下红托竹荪菌丝的速度、生长势等，选择最适合红托竹荪母种生长的温度，为红托竹荪母种质量的评价标准提供相关数据支撑和参考。同时，通过观察不同温度下的菌丝生长状态，也为红托竹荪的栽培提供一定的参考。

1 试验材料与方法

1.1 试验菌株

菌株采用贵州金蟾大山生物科技有限责任公司选育的JCZS-14-33菌株。

1.2 试验培养基

培养基 （培养皿）：土豆100 g(煮水过滤）、葡萄糖5 g、果糖25 g、蛋白胨5 g、硫酸铵2.5 g、杂木屑70 g（粒径100目）、琼脂粉18 g，水1 000 mL[4-5]。

按照操作方法进行培养基的配置，将配置好的培养基121℃灭菌30 min，灭菌后倒入无菌培养皿，每个培养皿倒入厚3 mm〜5 mm的培养基。

1.3 菌丝体培养

利用超净工作台进行接种，用5 mm的打孔器在母种平板中距老接种块2 cm〜3 cm处打孔取菌种块，菌种块放于平板培养基中央进行接种[6]，接种完毕后分别放入10℃、15℃、20℃、25℃、28℃恒温培养箱中培养，每隔7 d用十字交叉法划线记录菌丝的生长速度[7]、菌丝状态、菌丝的均匀度等。菌丝生长速度（V，mm·d-1）的计算公式如下：

式中：D1为第1次测量直径（mm）；D2为第2次测量直径（mm）；d2为测量天数（d）；d1为初始天数（d）。

1.4 统计学处理

采用SPSS 23.0软件进行单因素方差和线性相关分析。

2 试验结果

试验于2021年5月21日进行培养基的制作，2021年5月22日接种，每个温度试验接种平板12个，菌种接种后2 d开始观察记录萌发生长情况，其后定期测量菌丝的生长速度，观察其生长速度的差异。

2.1 菌种萌发差异分析

接种后2 d观察记录其萌发结果，培养温度10℃、15℃时，萌发率为0；培养温度20℃、25℃、28℃时，萌发率为100%。不同温度下菌种萌发时间记录见图1。

图1 不同温度下菌丝萌发时间Fig.1 Germination time of mycelium at different temperatures

由图1可知，温度是影响红托竹荪菌丝萌发的主要因素，温度越低，红托竹荪菌丝的萌发速度越慢，红托竹荪菌丝在15℃时萌发时间开始延长，在20℃以上菌丝2 d即可萌发。可见生产中培养红托竹荪菌丝时培养温度不低于20℃为宜，温度过低会影响菌种的萌发以及生长速度。

2.2 菌丝生长速度差异分析

在培养过程中有的平板中菌丝生长不规则、不均匀或者出现前期萌发后期不生长的现象，标记为异常平板。温度对红托竹荪生长速度的影响结果见表1、图2。

图2 不同培养天数及不同温度菌丝生长速度差异Fig.2 Difference of mycelial growth rate in different culture days and temperatures

表1 不同温度及不同时期菌丝生长情况统计表Tab.1 Statistics of mycelial growth in different temperatures and periods

由表1和图2可知，随着温度的变化，红托竹荪菌丝生长速度具有明显差异。其中10℃、15℃不适合红托竹荪菌丝的生长，但在2个温度区间内红托竹荪的菌丝没有死亡，只是生长速度受到抑制，据此可以指导生产，合理安排红托竹荪的栽培季节。红托竹荪菌丝在温度20℃以上时，随着温度升高生长速度加快，差异比较显著。

红托竹荪菌丝在平板上前10 d生长比较慢，菌丝在10 d〜16 d生长比较迅速，且各个时期内差异较明显，通过长满平板时间可以测算出生长速度与实际培养中较为一致。10 d〜20 d为菌丝快速生长期，此时间段可以作为红托竹荪菌丝生长阶段特异性、一致性和稳定性栽培试验（DUS）测试时间段参考依据。不同培养温度下菌丝生长形态见图3。

图3 不同温度菌丝生长速度及形态Fig.3 Growth rate and morphology of mycelia in different temperatures

由图3可知，25℃时红托竹荪菌丝生长比较正常，均匀度也较高，是适合红托竹荪菌丝生长的。20℃时菌丝生长虽然比25℃稍慢，但菌丝形态各方面都基本不受影响。从菌丝生长异常平板数量来看，28℃时菌丝生长开始被抑制，其生长不均匀性增加，显著影响菌丝形态，生产中28℃不适合菌丝培养。由此可知红托竹荪菌丝最佳培养温度为20℃〜25℃，此区间内菌丝均匀性、一致性较好。

2.3 菌丝耐低温测试结果

经过10℃、15℃培养的菌丝没有死亡，但是其生长速度比较慢，按照2.2中的测试方法将菌种全部重新接种后放于25℃进行培养，测定其生长速度及生长情况，结果详见表2、图4和图5。

表2 菌丝耐低温测试结果统计表Tab.2 Statistics of test resalts of low temperature resistance of mycelium

图4 菌丝生长形态Fig.4 Morphology of mycelium

图5 不同时间段菌丝生长速度Fig.5 Mycelial growth rate in different time periods

由表2、图4和图5可知，红托竹荪菌丝在10℃、15℃培养时菌丝生长较慢，但是将其恢复到25℃温度培养后菌丝可以恢复活性，且两者的生长速度差异不显著。由此可以说明10℃〜15℃时红托竹荪菌丝只是生长较慢。

3 结论

试验采用适合红托竹荪栽培的培养基，通过不同的温度栽培红托竹荪并进行观察、记录和分析，得出结论如下。

不同培养温度平板中红托竹荪菌丝随着温度升高生长速度加快。10℃下菌丝可以萌发但是很少生长；28℃菌丝生长最快，但是菌丝相对不均匀；20℃〜25℃菌丝生长比较均匀，菌丝致密，一致性好。研究表明25℃最适合红托竹荪菌丝生长。

红托竹荪的生物学特性决定了其生长速度非常缓慢。在前10 d菌丝生长非常慢，在第10天〜第20天适应培养基后，其菌丝生长速度较快，此阶段可以作为DUS测试时菌丝生长速度的参考判定标准。在工厂化生产过程中，菌丝快速生长阶段要注意环境调控，防止温度过高引起烧菌。

红托竹荪菌丝经过低温培养之后再转接至培养基上，放置于合适温度下培养即可正常萌发，菌丝前10 d生长速度差异显著，后续生长速度差异不显著。转至25℃培养20 d时，50%以上可以长满平板。红托竹荪在10℃下不会死亡，只是生长的非常慢。