昭通黄花酢浆草化学成分及不同采收期总黄酮含量的分析*

杨加琼，姜洁欣，宗大庆，彭 野，成 娇，赵静峰

(1 昭通卫生职业学院，云南 昭通 657000； 2教育部自然资源药物化学重点实验室，云南省天然产物转化与应用重点实验室，云南大学化工学院，云南 昆明 650091)

酢浆草科酢浆草属黄花酢浆草，在我国主要分布于云南、华北、华中、华南和四川等地。其全草均可入药，性寒味酸，归肝、肺、小肠经 ，民间调查及研究表明，酢浆草具有清热解毒、抗炎杀菌、抗肿瘤、抗氧化、保肝等活性，还可用于治疗跌打损伤、月经不调、痢疾、咽喉肿痛等症，对心血管系统、消化系统、神经系统等也有一定的影响[1]。现代研究表明，酢浆草中含有挥发油、萜类、酚酸、黄酮等多种化学成分[2]。为探讨昭通黄花酢浆草药效物质基础，本实验对其全草进行化学成分分析，以期寻找有效的活性成分，对其70% 乙醇提取物进行分离提纯得到6个化合物，鉴定了其中4个化合物，分别鉴定为：异牡荆素(1)、6-C-β-glucopyanosyl-7-O-methylluteolinidin(2)、原儿茶醛(3)、对羟基苯甲醛(4)。

酢浆草化学成分中黄酮含量较高，黄酮类化合物是一类重要的天然有机化合物，广泛存在于自然界植物中，其生理活性主要有抗炎、抗毒素、抗菌等作用[3]，因此酢浆草药理活性与总黄酮含量息息相关。一些药材中黄酮类化合物在不同采收期的含量会有一定差异[4]，目前，酢浆草的黄酮类化合物研究多局限在总黄酮含量测定及提取工艺方面，关于酢浆草在不同的采收期总黄酮动态积累是否有差异尚未见报道。为探讨昭通黄花酢浆草总黄酮含量，课题组前期已采集昭通 6个地区黄花酢浆草测定其总黄酮含量[5]，本实验在此基础上，以2020年5月中旬至12月中旬采收的黄花酢浆草为研究对象，测定不同采收期黄花酢浆草总黄酮含量变化情况，以期为黄花酢浆草的合理采收提供相应科学依据。

1 仪器与试剂

Agilent 1260高效液相色谱仪，UV-1900紫外可见分光光度仪，成都安恒达科技有限公司；Bruker DRX 400光谱仪，T-214电子分析天平，赛多利斯科学仪器有限公司；AB QSTAR脉冲星质谱仪，JHBE-50S型闪式提取器，郑州赛克斯玻璃仪器有限公司；Hei-VAP型旋转蒸发器，郑州予华。

柱层析硅胶(200～300目)，青岛海洋公司；薄层层析硅胶板，德国Merck公司；所使用的乙醇、二氯甲烷等试剂， Aldrich、Acros、TCI、百灵威或韶远等化学试剂公司；样品均采自昭通昭阳区北部新洲小区，采收时间分别为2020年5-12月共8批样品。

2 方法与结果

2.1 化学成分

2.1.1 提取与分离

取干燥的酢浆草全草粉末5 kg，用70% 乙醇料液比1: 70，闪式提取法提取，每次提取3 min，提取三次，合并提取液过滤减压浓缩得浸膏551 g。浸膏加水分散，分别用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压浓缩得正丁醇层浸膏123 g，乙酸乙酯层浸膏98 g ，正丁醇层先经正相硅胶柱层析，以氯仿-甲醇(40 :1→0:1)梯度反复洗脱，得到3个组分，分别经Agilent 1260高效液相色谱仪经水-甲醇(20%:80%→50%:50%)反相反复洗脱，分离得到化合物1(15.1 mg)、化合物2(7.3 mg)，乙酸乙酯层以石油醚-乙酸乙酯(50:1→1:1)、氯仿-甲醇(60:1→1:1)进行反复柱层析，分离得到化合物3(11.3 mg)、化合物4(10.5 mg)。

2.1.2 结构鉴定

化合物1：黄色粉末。 分子式为C21H20O10。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:7.88(2H，d，J=9.2 Hz，H-2′，6′)，6.90(2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′) ，6.76(1H， s，H-3)，6.51(1H，s，H-8)，4.56(1H，d，J=9.6 Hz， H-1″)；13 C-NMR(400 MHz，DMSO-d6) δ:162.5(C- 2)，102.7(C-3)，181.9(C-4)，161.1(C-5)，108.8(C-6)，162.2(C-7)，93.5(C-8) ，156.1(C-9)，103.3(C-10)，120.8(C-1′)，128.4(C-2′，6′)，116.1(C- 3′，5′)，160.6(C-4′)，73.1(C-1″)，70.5(C-2″)，78.7(C-3″)，69.8(C-4″)，80.9(C-5″)，61.3(C-6″)。以上数据与文献[6]报道的异牡荆素基本一致。

化合物2：黄色粉末。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)(由于旋阻异构引起信号分裂) δ:7.46(2H，overlap，H-2′，6′)，6.95 /6.93(1H，d，J=8.8 Hz，H- 5′)，6.88/6.86(1H，s，H-8)，6.84 /6.83(1H，s，H- 3)，4.61 /4.59(1H，d，J=9.2 Hz，H-1″)，4.57 /4.19(1H，t，J=9.2 Hz，H-2″)，3.90 /3.87(3H，s，7- OCH3)，3.71 /3.68(1H，d，J=10.8 Hz，H-6″a)，3.20 /3.18(1H，d，J=6.0 Hz，H-6″b)，3.14(3H，m， H-3″～5″)；13C-NMR(400 MHz，DMSO-d6)(由于旋阻 异构引起信号分裂) δ:164.3 /164.2(C-2)，105.0 / 104.5(C-3)，182.7 /182.3(C-4)，160.7 /160.0(C-5)，110.1 /110.1(C-6)，164.1 /163.8(C-7)，91.4 / 90.6(C-8)，157.1 /156.7(C-9)，105.0 /104.5(C-10)，121.4 /121.2(C-1′)，110.1 /110.0(C-2′)，145.8 /145.5(C-3′)，150.7 /150.3(C-4′)，116.4 / 116.4(C-5′)，121.1 /121.1 (C-6′)，73.2 /72.8 (C- 1″)，70.7 /70.0(C-2″)，79.5 /79.5(C-3″)，70.7 / 70.1(C-4″)，82.0 /82.1(C-5″)，62.2 /61.9(C-6″)，56.9 /56.7(7-OCH3)。以上数据与文献[7]报道的6-C-β-glucopyrano-syl-7-O-methylluteolinidin基本一致。

化合物3：灰白色粉末。分子式为 C7H6O3。1H-NMR(400 MHz，Pyr-d5) δ:9.87(1H，s，-CHO)，7.80(1H，d，J=1. 6 Hz，H-2)，7.44(1H，dd， J=8.0，1.6 Hz，H-6)，7.27(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)；13C-NMR(400 MHz，Pyr-d5) δ:129.8 (C-1)，115.0(C-2)，146.0(C-3)，152.7(C- 4)，114.8 (C-5)，123.9(C-6)，190.7(-CHO)。以上数据与文献[6]报道的原儿茶醛基本一致。

化合物4：白色固体。ESI-MS m/z:123[M+H]+；分子式为 C7H6O2。1H-NMR(400 MHz，CD3OD) δ:9.88(1H，s， -CHO)，7.77(2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6)，6.90(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)；13C-NMR(400 MHz，CD3OD) δ:133.4(C-1) ，136.7(C-2，6)，118.3(C-3，5)，166.5(C-4)，192.9(-CHO) 。以上数据与文献[6]报道的对羟基苯甲醛基本一致。

2.2 不同采收期总黄酮含量测定

采用课题组前期文献[5]相同方法，测定其吸光度，计算酢浆草总黄酮含量，测定结果见表 1。

表1 不同采收期酢浆草中总黄酮的含量Table 1 The content of total flavonoids in Oxalis corniculata L in different harvesting periods

3 讨论与结果

由于试验时间比较短，因此分离得到的化合物较少，但所得到的化合物有其主要代表性黄酮类化合物异牡荆素。在不同采收期的酢浆草总黄酮含量分析中，结果表明，一年中不同月份采收的酢浆草总黄酮含量存在差异，6月总黄酮含量最高，12月总黄酮含量最低。大多药材中总黄酮含量的变化波动主要与其生长环境，生长周期，初采时间，采收次数等有关[8]。为了避免产地带来的影响，我们选择同一产地的酢浆草进行研究，但在采收的过程中不能确定所采集样品的具体初采时间、生长周期等因素，因此，有待于进一步确保这些因素来研究酢浆草不同采收期总黄酮含量，以得到更准确的试验数据。但本试验所得结果还是能为昭通黄花酢浆草进一步开发及确定黄花酢浆草采收期提供了相应科学依据，避免了不适时宜的采集黄花酢浆草，造成资源浪费，使黄花酢浆草药材得到更有效的利用。