多种肿瘤相关自身抗体在非小细胞肺癌中的诊断效果分析

陈美任

嘉应学院医学院附属医院检验科，广东梅州 514000

肺癌是指原发于气管、 支气管和肺的恶性肿瘤，该病发病率和死亡率有逐年上升的趋势，主要包括鳞癌、腺癌、小细胞癌和大细胞癌这几种主要类型，其中非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）约占80%以上[1]。由于肺癌早期症状不明显，确诊时多为中晚期，增加了治疗难度和患者死亡率。在肿瘤发病早期，机体免疫系统就可识别肿瘤相关抗原，从而激活机体免疫反应产生抗体，称为肿瘤相关自身抗体[2]。近年来，多项肿瘤相关抗原自身抗体（tumor associated autoantibodies，TAAB）联用在肺癌、乳腺癌等肿瘤得到应用。本研究联用7 项TAAB 包括抑癌基因53（p53 Tumor Suppressor，p53）、神经元胞质蛋白基因产物（protein gene product 9.5，PGP9.5）、性别决定区Y框蛋白2（sex determining region Y-box 2，SOX2）、G抗原7（G antigen 7，GAGE7）、肿瘤抗原4-5（GBU4-5）、人癌抗原（cancer associated gene，CAGE）和黑色素瘤抗原A1（melanoma antigen 1，MAGE A1）来评估其在NSCLC 临床诊断中的效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月至2020年7月于嘉应学院医学院附属医院行肺癌根治术的初治NSCLC 患者57例为研究对象，并设为NSCLC 组。纳入标准：①首次确诊为非小细胞肺癌，且符合第8 版肺癌TNM 分期标准[3]；②均接受肺癌根治术治疗；③配合相关指标检测及临床资料完善。排除标准：①复发、转移癌或合并其它肿瘤病史；②合并自身免疫性疾病者；③诊断为多种肿瘤者；④有化疗史及服用过靶向药物者。NSCLC组中，男31 例，女26 例；年龄58～75 岁，平均（63.54±3.24）岁；肿瘤分类：鳞癌19 例，腺癌25 例，其它13例；临床分期：Ⅳ期16 例，Ⅲ期9 例，Ⅱ期4 例，Ⅰ期28例；肿瘤直径：＞3 cm 24 例，≤3 cm 18 例，无法评估15例。排除。选择同期入院的52 例肺部良性疾病者作为良性组，选择同期入院的58 名健康人群设置为健康组。良性组中，男28 例，女24 例；年龄55～75 岁，平均（63.43±3.45）岁；肺部疾病包括肺炎41 例，肺气肿5 例，支气管炎6 例。健康组中，男31 例，女27 例，年龄54～73岁，平均（63.33±3.49）岁。三组的性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会审批通过。

1.2 方法

①采集所有NSCLC 患者肺部根治术前清晨空腹静脉血4 ml，良性组患者于入院检查时采集，健康组患者于体检时采集。室温静置30 min 后取血清，于4℃、1000 r/min 离心10 min 中离心处理，离心半径13.5 cm，分装置于-80℃待检测使用。②使用ELISA检测7 项肿瘤相关自身抗体，分别为p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1。将血清样本及试剂置于室温，选用7 种自身抗体谱检测试剂盒进行ELISA 检测，按照试剂盒说明书进行相关操作，使用美国伯乐iMark 酶标仪在450 nm 处读取吸光度值。做受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curves，ROC） 分析7 种肿瘤相关自身抗体诊断肺癌的价值，根据最大约登指数确定各自诊断临界值，如果血清肿瘤相关自身抗体的检测浓度低于诊断临界值即为阴性，否则为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较进行LSD-t 检验； 采用ROC 曲线分析多种肿瘤相关自身抗体在非小细胞肺癌中的联合诊断效果，曲线下面积越大，表示其诊断价值越高，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患者肿瘤相关自身抗体水平比较

NSCLC 组的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 水平均高于良性组和健康组，差异有统计学意义（P＜0.05）。良性组和健康组的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE、MAGE A1 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

表1 三组患者肿瘤相关自身抗体水平比较（U/ml，±s）

表1 三组患者肿瘤相关自身抗体水平比较（U/ml，±s）

与良性组比较，aP＜0.05；与健康组比较，bP＜0.05

组别 例数 p53 PGP9.5 SOX2 GAGE7 GBU4-5 GAGE MAGE A1 NSCLC 组良性组健康组F 值P 值57 52 58 2.26±0.53ab 1.23±0.33 1.18±0.24 178.909＜0.001 13.51±4.26ab 9.64±2.54 9.33±2.01 27.373＜0.001 13.51±4.26ab 9.64±2.54 9.33±2.01 27.373＜0.001 15.31±5.19ab 13.16±4.31 12.82±4.06 4.996 0.008 8.03±2.84ab 6.27±2.34 6.02±1.87 11.996＜0.001 10.36±3.63ab 8.14±2.65 6.89±2.66 19.363＜0.001 7.64±2.14ab 6.58±2.61 6.31±2.31 5.082 0.007

2.2 多种肿瘤相关自身抗体单独诊断NSCLC 的ROC 曲线结果

p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 单独诊断NSCLC 的曲线下面积均＞0.6（P＜0.05），均有一定诊断价值，根据最大约登指数确定诊断临界值分别为1.57 U/ml、12.92 U/ml、12.67 U/ml、14.64 U/ml、8.45 U/ml、8.23 U/ml、7.68 U/ml，单独诊断p53 敏感度最高达91.20%，其次为GAGE 达68.40%，GP 9.5 和GAGE7 均为59.60%（表2、图1，封3）。

表2 多种肿瘤相关自身抗体单独诊断NSCLC 的ROC 曲线结果

图1 多种肿瘤相关自身抗体单独诊断NSCLC 的ROC 曲线图

3 讨论

由于肺癌早期症状不明显，不易被发现，约80%患者确诊时已到肺癌中、晚期，不仅治疗难度大，而且预后不良，极易出现复发及癌细胞转移，因而中晚期肺癌患者死亡率极高。早发现、早确诊、早治疗是控制肺癌的有效手段[4-5]。目前，肺癌的早期筛查手段有限，主要依靠低剂量计算机断层扫描（low-dose computed tomography，LDCT） 和癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）、细胞角蛋白19 抗原片段（cytokeratin 19 fragment 21-1，CYFRA21-1）和鳞状上皮细胞癌抗原等肿瘤标志物抗原联合诊断进行筛查，虽然LDCT 敏感度高，但假阳性率也相对较高，对筛查良性和恶性肺部肿瘤具有一定局限性，因而临床应用也受到了一定限制。肿瘤标志物抗原联合诊断易受非病理因素，敏感度和特异度均无法满足临床诊断的需求[6-7]。

相关研究[8]显示，癌症发病早期，机体内肿瘤相关抗原发生表达、突变等一系列改变，从而引起机体自身反应性免疫应答，刺激B 细胞产生肿瘤相关自身抗体，少量机体内肿瘤相关抗原即可促使机体产生大量肿瘤相关自身抗体。相比于抗原，抗体具有半衰期长、含量高且稳定等优越性，因而在临床诊断应用价值更高。有研究[9]表明，肿瘤自身相关抗体可早在症状出现数年前于患者血清中检测出来，这大大提高了肺癌早期诊断的可能。目前，还未发现有单一肿瘤自身相关抗体可满足肺癌诊断的敏感度和特异度，本研究结果显示，NSCLC 组的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 水平均高于良性组和健康组，差异有统计学意义（P＜0.05），因而本研究选取7 种与肿瘤相关的自身抗体检测以提高肺癌诊断的准确性。国外有相关研究[10]表明，联用p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、GAGE 和MAGE A1 这7 项自身抗体在肺癌的诊断中敏感度和特异度可以达到76%和92%，敏感度和特异度均相对较高。研究[11]发现，p53是迄今为止与人类肿瘤相关性最高的基因，可划分为野生型和突变型，突变型p53 对癌症的发生和发展有促进作用。在肺癌中，p53 是发生率最高的DNA 序列改变，p53 通过基因突变，半衰期从20 min 延长至几小时，并造成细胞内蛋白产物堆积，促使机体产生免疫应答[12]；PGP9.5 是一类蛋白水解酶，在癌症的发生过程中，PGP9.5 诱导细胞周期蛋白泛素化上调，致使细胞生长失控，有研究者通过基因表达系列分析法发现PGP9.5 在肺癌早期高表达，且与肺癌进展关系特殊，因而可作为肺癌早期诊断的标志[13]；SOX2 的主要作用包括参与胚胎早期发育、 维持干细胞全能性、参与神经发育等，近年来，SOX2 被发现在多种肿瘤中高表达，因而SOX2 相关抗体可作为肺癌鉴别诊断中的一项指标[14]；GAGE7 和GBU4-5 在肺癌组织中的作用较为局限，但各种试验可检测出其在早期肺癌中的高表达，因而可作为联合诊断的一项指标；随着肿瘤免疫治疗在肿瘤治疗中应用越来越广泛，GAGE 作为最具免疫原性的肿瘤抗原也受到了极大的关注；MAGE A1 是目前应用前景较好的肿瘤标志物，尤其在鉴别良恶性肺结节方面[15-18]。由于本研究样本量有限，未对诊断效能尚可的相关联合诊断效能进行深入分析，相关结论及相关抗体联合诊断效能有待进一步研究和证实。

综上所述，7 项肿瘤相关自身抗体对NSCLC 的诊断具有重要的临床意义和应用价值。