宫颈癌患者血清miRNA-21和miRNA-218表达水平及与预后的关系

陈剑

研究发现[1]，宫颈癌的发生和发展涉及到多基因的异常调控。微小RNA（miRNA）是一类能参与疾病调控的短链非编码RNA，其可通过靶向识别mRNA的非翻译区，调控转录后水平，进而影响靶基因的表达[2]。miRNA参与多种复杂生物学过程，且不同肿瘤具有不同的miRNA的表达谱。miRNA-21是在胶质瘤中发现的一种促癌基因，通过抑制细胞凋亡来促进肿瘤的发生发展[3]。研究发现[4]，miRNA-218在乳腺癌、肝癌、胃癌及神经胶质瘤等多种恶性肿瘤中表达下调。本研究拟分析宫颈癌患者外周血清中miRNA-21及miRNA-218的表达水平及与预后的关系。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2015年8月至2017年8月浙江省金华广福医院收治的宫颈癌患者140例（观察组），纳入标准：（1）确诊为原发性宫颈癌；（2）未经历过药物、手术及放疗等治疗；（3）不合并其他肿瘤患者；（4）均行手术治疗者。排除标准：（1）肝、肾及心等重要器官功能障碍者；（2）精神类疾病者；（3）不能配合术后随访者。其中年龄29～60岁，平均（45.1±14.1）岁；FIGO临床分期为I型91例，II型28例，III型21例；病理类型为鳞癌65例，腺癌37例，鳞腺癌38例；分化程度为高分化24例，中分化85例，低分化31例；脉管浸润程度为一半及以上浸润75例，其余65例；淋巴结转移77例，无转移63例。

另选同期本院行子宫全切手术治疗的子宫肌瘤患者30例设为对照组，纳入标准：（1）术后宫颈筛查无癌变且无宫颈癌家族史患者；（2）无合并其他肿瘤或肝肾心等重要器官功能障碍者；（3）无精神类疾病者。其中年龄28～59岁，平均（44.3±13.8）岁。本研究经医院医学伦理委员会审批批准，入组患者及其家属均同意并在知情同意书上签字。

1.2 方法 采集观察组术前及手术1周后空腹静脉血5 ml，对照组术前空腹静脉血5 ml，室温静置1 h后以3 000 r/min离心10 min，分离血清并置于―70℃下保存，待测。采用实时荧光定量PCR（qPCR）法测量血清内miRNA-21和miRNA-218的表达水平：将抽提的细胞总RNA经严格遵守试剂盒操作，根据A260定量结果进行逆转录，并根据目标基因mRNA序列引物设计原则，用软件primer express3.0设计合并qPCR检测引物及探针。miRNA-21和miRNA-218引物序列见表1，目标基因探针和内参基因探针均为5’端采用FAM报告荧光标记，3’采用TAMRA淬灭荧光标记。采用2-Ct法计算miRNA的相对表达量。本研究试剂盒均采购于美国Applied Biosystems公司。

表1 miR-21和miR-218的引物序列

1.3 随访 观察组出院后采用电话及复查等多种形式随访36个月，3个月/次，随访期间记录患者生存情况。以下情况之一视为随访终点：36个月内患者死亡；36个月内患者退出该项目；36个月随访结束。

1.4 统计方法 数据采用SPSS 21.0软件分析，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验；计数资料采用2检验；生存分析采用Kaplan-Meier生存曲线；影响因素分析采用Logistic分析。P＜0.05为差异统计学意义。

2 结果

2.1 血清miRNA-21和miRNA-218表达水平比较术前及术后，观察组血清miRNA-21表达水平均高于对照组（均P＜0.05），miRNA-218表达水平均低于对照组（均P＜0.05）。两组手术前后血清miRNA-21和miRNA-218表达水平差异均有统计学意义（t≥4.18，均P＜0.05）。见表2。

表2 两组血清miRNA-21和miRNA-218表达水平

2.2 血清miRNA-21和miRNA-218与临床特征的关系 观察组miRNA-21表达水平中位数为4.56，miRNA-218表达中位数为3.34，以此为依据，将观察组分为miRNA-21高表达组（miRNA-21表达≥4.56，n=85）和miRNA-21低表达组（miRNA-21表达＜4.56，n=55），miRNA-218高表达组（miRNA-218≥3.34，n=90）和miRNA-218低表达组（miRNA-218＜3.34，n=50）。

miRNA-21高、低表达组FIGO分期、脉管浸润程度及淋巴结转移差异均有统计学意义（均P＜0.05）；miRNA-218高、低表达组FIGO分期、脉管浸润程度及淋巴结转移差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

表3 血清miRNA-21和miRNA-218表达与临床特征的关系 例

2.3 血清miRNA-21和miRNA-218表达与预后的关系 miRNA-21高表达组36个月总生存率显著低于低表达组（52.9%vs 76.4%，2=11.55，P＜0.05）；miRNA-218低表达组36个月总生存率显著低于高表达组（55.3%vs 72.7%，2=6.40，P＜0.05）。见封二彩图3～4。

2.4 宫颈癌预后独立危险因素分析 Logistics回归分析显示，FIGO期、淋巴结有转移、miRNA-21高表达及miRNA-218低表达均是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素（均P＜0.05）。见表4。

表4 宫颈癌预后独立危险因素Logistics回归分析

3 讨论

miRNA表达水平被认为与多种肿瘤的发生发展密切相关[5]，其通过调控RNA的转录水平、调节蛋白质编码基因的表达，而使目的基因mRNA翻译上调、下降或降解。研究显示，在宫颈癌组织及正常宫颈组织中miRNA具有不同的表达特征。miRNA-21是发现最早，研究较多的一种小分子RNA，王红等[6]通过总结近年来对miRNA-21的研究中发现，其在生长发育、癌症发生、免疫反应和骨分化等生物过程中均发挥重要作用。万淑琼等[7]在检测宫颈癌变组织中miRNA含量时发现，宫颈癌组织中HPV阳性区域miRNA-21含量显著高于HPV阴性区域，证实了miRNA-21在宫颈癌变组织中的作用。本研究结果显示，术前及术后，观察组血清miRNA-21表达水平均高于对照组（均P＜0.05）。

近年来，多项国外研究证实miRNA与恶性肿瘤的临床分期、淋巴结转移、脉管浸润及预后等临床特征密切相关。Karakatsanis等[8]研究指出，肝癌肿瘤分期和预后情况与miRNA-21高表达相关。本研究结果显示，miRNA-21高、低表达组FIGO分期、脉管浸润程度及淋巴结转移差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

近年来miRNA-218在肿瘤组织中的异常表达引起研究者的广泛关注。Liu等[9]研究显示，miRNA-218在肿瘤的发生过程中起到了抑癌基因的作用。Gao等[10]认为HPV高危型感染可以下调miRNA-218的表达水平，且其低表达水平可能与宫颈癌发病机制相关。本研究结果显示，本研究结果显示，术前及术后，观察组血清miRNA-218表达水平均低于对照组（均P＜0.05）。同时在研究miRNA-218与临床症状关系时发现，miRNA-218表达的高低与宫颈癌FIGO分期、脉管浸润程度、淋巴结转移具有密切联系。

研究显示[11]，年龄、肿瘤大小、脉管浸润程度、宫旁浸润程度及FIGO分期等均为影响宫颈癌预后的相关因素。本研究结果显示，FIGO期、淋巴结有转移、miRNA-21高表达及miRNA-218低表达均是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素（均P＜0.05）。其中miRNA-21高表达组36个月总生存率显著低于低表达组（P＜0.05），miRNA-218低表达组36个月总生存率显著低于高表达组（P＜0.05）。结果提示miRNA-21高表达与miRNA-218低表达与宫颈癌预后情况密切相关。

综上所述，宫颈癌患者血清miRNA-21呈表达上调，血清miRNA-218表达下调，二者表达量与FIGO分期、淋巴结有转移及宫颈癌患者术后36个月生存率密切相关。