复方卡森颗粒成型工艺及质量标准研究*

康雨彤，蔡晓翠，王新堂，贺金华

(新疆维吾尔自治区药物研究所，乌鲁木齐 830004)

复方卡森颗粒为新疆维吾尔医学专科学校直属医院院内制剂，是按照维吾尔医理论组方的维药复方制剂。处方由玫瑰花、小茴香、黄瓜子和葫芦子仁等药材组成，具有通滞利肝、利尿消肿的功效，在新疆维吾尔自治区维吾尔医院和新疆维吾尔医学专科学校直属医院临床应用多年，用于治疗肝炎。该品种原医疗机构制剂标准处方组成明确，但制备工艺参数不明确，且质量标准为院内制剂内部标准，只有玫瑰花的薄层色谱定性鉴别，质量可控性差，易使成品质量差异较大，从而影响其临床治疗效果。为充分发挥民族医药的疗效优势，遵循维吾尔医用药理论，按照中药新药研究的技术要求及《中华人民共和国药典》2020年版的规定[1]，运用现代先进制药技术和生产工艺，制成特色鲜明、剂型合理、使用方便的复方卡森颗粒，并采用现代质量控制研究方法，对复方卡森颗粒的制剂工艺和质量标准进行了系统的研究，保证了该制剂的可控性、有效性和安全性，为我区维吾尔新药研究和开发奠定了基础，也为推进民族医药现代化做出积极贡献。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器 U3000高效液相色谱仪(Thermo Fisher Scientific)；BP211D电子分析天平(Sartorius，感量：0.01 mg)；SK3300H型超声清洗仪(频率59 kHz，功率160 W，上海科导超声仪器有限公司)；DT-500A型电子计数天平(常熟市金羊砝码仪器有限公司金羊天平仪器厂，感量：0.01 g)；WFH-201B紫外透射反射仪(上海精科实业有限公司)；SP-20E型全自动点样仪(上海科哲生化科技有限公司)；DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

1.1.2试药 没食子酸(批号：100831-201204，纯度89.9%)、茴香醛(批号：110838-201106)、玫瑰花对照药材(批号：121508-200702)均来源中国食品药品检定研究院。乳糖(批号：20140008)为上海华茂药业有限公司生产；糊精(批号：140310)、可溶性淀粉(批号：131209)为陕西奥克药用辅料有限公司生产；微晶纤维素(批号：140226)为安徽山河药用辅料股份有限公司生产。复方卡森颗粒，批号：20170418，20170426，20170428，由新疆西部加斯特药业有限公司提供。甲醇为美国Fisher公司产色谱纯，其他试剂均为国产分析纯。

1.2方法

1.2.1复方卡森颗粒成型工艺条件的优选 本方为维吾尔药复方制剂，前期以玫瑰花中没食子酸为指标性成份，筛选和优化了水提取、除杂、减压浓缩和干燥工艺，最终得干膏粉，溶解性相对较好。但中药复方药粉大都具有不同程度的吸潮性，故选用具有防潮作用的辅料作为制剂的赋形剂具有重要的意义[2-3]。

(1)吸湿率的测定。将底部装有氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器置于25 ℃的恒温培养箱内恒温24 h，使干燥器内的相对湿度达75%[4]。取浸膏粉适量，分别与乳糖、糊精、淀粉和微晶纤维素按1：1比例混合，取适量置于已干燥恒重的称量瓶底部，厚度约2 mm，准确称定质量后，置于上述玻璃干燥器内(称量瓶盖揭开)于25 ℃保存，放置168 h定时称质量(6，12，24，48，72，96，120，144，168 h)，计算吸湿百分率，吸湿百分率(%)=(吸湿后的质量-吸湿前的质量)/吸湿前的质量×100。

(2)混合辅料的选择。按表1称取规定量的浸膏粉与混合辅料混匀，用适量80%乙醇做润湿剂制软材，制粒，烘干，过筛整粒。不同处方要求易制粒整核测定颗粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸湿性，并以各指标的综合评分评价，优选最佳混合辅料[5-6]。综合评分=(最小吸湿率值/吸湿率值)×25+(成型性值/最大成型性值)×25+(溶化性值/最大溶化性值)×20+(堆密度值/最大堆密度值)×15+(最小休止角值/休止角值)×15。

(3)混合辅料比例的选择。称取规定量的浸膏粉与混合辅料混匀，用适量的80%乙醇做润湿剂制软材，制粒，烘干，过筛整粒。测定颗粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸湿性，并以各指标的综合评分评价，优选最佳混合辅料比例。见表2。

表2 不同混合辅料比例的筛选

(4)浸膏粉和混合辅料比例的选择。称取规定量的浸膏粉与混合辅料混匀，用适量的80%乙醇做润湿剂制软材，制粒，烘干，过筛整粒。测定颗粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸湿性，并以各指标的综合评分评价，优选最佳浸膏粉和混合辅料比例。见表3。

表3 不同比例浸膏粉与混合辅料的筛选

(5)润湿剂的选择。称取规定量的浸膏粉与混合辅料混匀，分别用适量60%，70%，85%，87%，90%乙醇做润湿剂制软材，制粒，烘干，过筛整粒。测定颗粒的成型性、堆密度、休止角、溶化性及吸湿性，并以各指标的综合评分评价，优选最佳润湿剂。见表4。

(6)验证实验。为进一步确认工艺稳定可行，按上述工艺进行了中试放大生产，并按《中华人民共和国药典》2020年版四部附录0104颗粒剂项下规定，对3批中试样品进行检查。

1.2.2复方卡森颗粒质量标准研究

(1)薄层色谱鉴别。①玫瑰花鉴别：取本品3 g，加乙醇30 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液；另取玫瑰花对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液；取处方中缺玫瑰花阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(通则0502)实验，吸取上述两种溶液各2 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-水(3：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，放置10 min，置紫外光灯(365 nm)下检视[7-8]。

②小茴香鉴别：取本品100 g，照挥发油测定法(2020年版《中华人民共和国药典》四部通则2204)实验，自测定器上端加水使充满刻度部分并溢流入烧瓶时为止，加入正己烷2 mL，加热回流1.5 h，分取正己烷层，作为供试品溶液；另取茴香醛对照品，加无水乙醇制成每毫升含1 μL的溶液，作为对照品溶液；取处方中缺小茴香阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(通则0502)实验，吸取供试品溶液10 μL、对照品溶液1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(17：3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，放置20 min，日光下检视[9-11]。

(2)没食子酸含量测定。①色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，0.05%磷酸为流动相B，进行梯度洗脱(0.00～15.00 min，3%A；15.00～20.00 min，3%→90%A；20.00～25.00 min，90%→3%A；25.00～35.00 min，3%A)[12-13]；检测波长：272 nm，柱温：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1。

表4 不同润湿剂的筛选

②对照品溶液的制备：精密称取没食子酸对照品适量，加水制成每毫升含没食子酸50 μg的溶液，即得。

③供试品溶液制备方法的考察：Ⅰ供试品溶液处理溶剂的确定：供试品溶液的制备：取本品约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水和流动相50 mL，密塞，称定质量，超声处理(电压：220 V，频率：50 Hz)30 min，放冷，再次称定质量，并用相应的溶剂补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。每种溶剂平行处理两份。依法测定没食子酸的含量，结果用水处理的样品含量为9.46 mg·g-1，用流动相处理含量为9.30 mg·g-1，用水作溶剂处理样品时，样品中没食子酸含量较大，结合药典和文献中的方法，选择用水作为处理样品的溶剂[14-15]。

Ⅱ 供试品溶液的处理方式及时间的确定。供试品溶液的制备：取本品约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水50 mL，密塞，称定质量，分别回流提取和超声提取(电压：220 V，频率：50 Hz)45，60，90，120 min，放冷，再次称定质量，并用水补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。每种提取方式和时间平行处理两份。依法测定没食子酸的含量，结果相同提取时间下，回流提取均比超声提取含量高；随着回流提取时间的增加，含量也随之增加，回流1.5 h后含量也不再增加，故确定供试品溶液的处理方式：回流提取，提取时间：1.5 h。

④专属性考察：按照处方工艺制备不含玫瑰花的样品作为阴性样品，将没食子酸对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液进行测定，记录色谱图。

⑤线性关系考察：精密称取没食子酸对照品适量，加水制成每毫升含500 μg 的溶液，摇匀，即得对照品储备液。分别吸取上述储备液0.25，0.5，1，1.25，2 mL，置于10 mL量瓶中，加水稀释制成不同浓度的对照品溶液，分别精密吸取上述溶液各10 μL注入液相色谱仪，进行线性关系考察。

⑥精密度：Ⅰ仪器精密度：取同一份对照品溶液，连续进样6次。

Ⅱ 重复性：取本品约0.25 g，精密称定，平行6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入水50 mL，密塞，称定质量，回流提取1.5 h，放冷，再次称定质量，并用水补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液即得。按上述含量测定方法测定。

Ⅲ中间精密度：取本品，在不同日期，经不同人员按“2.2.2.⑥.Ⅱ”项下供试品处理方法进行制备，按上述含量测定方法测定。

⑦对照品和供试品溶液的稳定性：取对照品溶液和重复性1#供试品溶液置于冰箱4 ℃冷藏，分别放置不同时间，按上述含量测定方法测定。

⑧加样回收率：取本品约0.125 g，精密称定，平行6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入没食子酸对照品溶液(C=1.223 mg·mL-1，纯度89.9%)1.0 mL，再精密加入水49 mL，按“2.2.2.⑥.Ⅱ”项下供试品处理方法进行制备，按上述含量测定方法测定。

⑨3批样品含量测定结果：取3批样品，采用“1.2.2(2)③”建立的供试品溶液的制备方法制备，并按含量测定方法测定。

2 结果

2.1成型工艺研究

2.1.1吸湿率 各样品放置168 h后，浸膏粉的吸湿百分率高达23.97%，且吸湿现象非常严重；而浸膏粉与各辅料混合后的吸湿百分率大大降低，其中乳糖的抗湿能力最强，但浸膏粉与乳糖混合物的液化现象较其他辅料混合物严重，综合考虑选择使用混合辅料作为本制剂辅料使用。见图1。

图1 浸膏粉与不同辅料的混合物吸湿曲线

2.1.2混合辅料的选择 按各处方的综合评分，混合辅料乳糖：糊精=1：1的综合评分最高，确定混合辅料为乳糖和糊精。见图2。

图2 不同混合辅料筛选结果

2.1.3混合辅料比例的选择 按各处方的综合评分，乳糖：糊精=1：1的综合评分最高，确定混合辅料比例为乳糖：糊精为1：1。见图3。

图3 不同混合辅料比例的筛选结果

2.1.4浸膏粉和混合辅料比例的选择 按各处方的综合评分，浸膏粉：乳糖：糊精=2：1：1的综合评分最高，确定浸膏粉和混合辅料比例为1：1。见图4。

图4 不同比例浸膏粉与混合辅料的筛选结果

2.1.5润湿剂的选择 由图5不同润湿剂结果可知，处方组成及比例为浸膏粉：乳糖：糊精=2：1：1，润湿剂为75%乙醇的综合评分最高，故确定润湿剂为75%乙醇。

图5 不同润湿剂的筛选结果

2.1.6验证实验 3批样品的溶化性、粒度、装量差异等均符合规定。见表5。

2.2复方卡森颗粒质量标准研究

2.2.1薄层色谱鉴别 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图6。供试品薄层色谱图中与对照品薄层色谱图相应位置上，显相同颜色的斑点，见图7。

2.2.2没食子酸含量测定 ①专属性考察：阴性无干扰，此方法专属性良好。见图8。

表5 复方卡森颗粒检查项结果

1.样品；2.样品；3.样品；4.玫瑰花对照药材。

1.样品；2.样品；3.样品；4.茴香醛对照。

②线性关系考察：没食子酸对照品溶液的浓度在11.25～89.97 μg·mL-1范围内，与其峰面积显示有良好的线性关系，回归方程：Y=0.396 3X+0.350 5，r=0.999 9。

图8 没食子酸对照品(A)、样品(B)及阴性品(C) HPLC色谱图

③精密度：Ⅰ仪器精密度：峰面积均值为18.315，RSD为0.06%，仪器精密度良好。Ⅱ重复性：含量均值为8.56 mg·g-1，RSD为1.40%，建立的含量测定方法重复性良好。Ⅲ中间精密度：含量均值为8.51 mg·g-1，RSD为1.03%，建立的含量测定方法中间精密度良好。

④对照品和供试品溶液的稳定性：对照品溶液在26 h内的峰面积均值为18.243，RSD为0.58%；供试品溶液在21 h内的峰面积均值为17.312，RSD为0.003%，供试品溶液在21 h内稳定性良好。

⑤加样回收率：回收率实验结果符合要求。见表6。

⑥三批样品含量测定：批号为20170418，20170426，20170428的样品中，没食子酸含量分别为8.82，9.55，9.37 mg·g-1，平均含量8.99 mg·g-1。

3 讨论

医院制剂临床疾病治疗工作中发挥着重要的作用，是新药开发的基础和重要来源。让院内中药制剂走向市场，开发成新药，要求新制剂确有疗效，安全无毒，具有严格的质控标准。新疆维吾尔医学专科学校直属医院院内制剂复方卡森颗粒，质量标准只列入了性状、玫瑰花的薄层鉴别及颗粒剂项下规定的检查项，无其他药材的鉴别及处方中特征成分的含量测定，标准较低，不能很好的控制本品的质量。因此，需要发挥临床与基础，多学科合作的优势，对复方卡森颗粒进行全面研究，提高质量标准，使产品的质量更加的稳定可靠，从而扩大本品的用药范围，使其成功地走向市场。

表6 没食子酸加样回收率实验

中药浸膏粉易吸湿，吸湿后易导致颗粒变软、化学成分发生变化、流动性降低、结块甚至霉变，给中药颗粒剂的生产和储存带来较大困难，甚至影响制剂的质量和疗效。辅料作为药物制剂的基础材料和重要组成部分，对制剂的吸潮性有着明显的影响。原院内制剂复方卡森颗粒制剂所用辅料为蔗糖，而通过筛选研究发现辅料选择乳糖和糊精更为合理，减少了患者糖的摄入量，扩大了用药人群。

本实验对处方中的玫瑰花、小茴香、黄瓜子和葫芦子仁等药材进行了薄层色谱条件的摸索，发现黄瓜子、葫芦籽仁等药材均有阴性干扰，因此确定了玫瑰花和小茴香薄层色谱鉴别方法，并对鉴别方法分别进行了不同温度(10，25，45 ℃)和湿度(45%，75%)的耐用性考察，结果玫瑰花和小茴香药材薄层色谱鉴别方法耐用性均良好，重现性好，结果可靠。

由于本组方成分复杂，药材有效成分和药理作用的研究报道相对较少。在前期生产工艺指标性成分筛选基础上，采用HPLC法，以没食子酸为含量测定指标，对本品含量进行控制。参照2020版《中华人民共和国药典》一部中地榆、广枣、委陵菜、拳参等药材中没食子酸测定所用波长270～273 nm相近，故选择272 nm作为没食子酸含量测定用波长，选定用甲醇-0.05%磷酸系统进行测定。结果在此条件下没食子酸保留时间较短，分离效果良好，阴性样品溶液中其他成分对测定无干扰，符合测定要求。

本研究所建立的TLC 和HPLC 方法专属性强、灵敏度高、重现性好，可用于复方卡森颗粒的质量控制。