日粮中添加复方中草药对巴马香公猪精液品质及免疫功能的影响

张 斌，宋囡囡，刘 浩，李 玲，邱树磊，郭广富，武彩红*

（1.江苏农牧科技职业学院，江苏泰州 225300；2.泰州医药高新技术产业开发区凤凰畜牧兽医站，江苏泰州 225300）

巴马香猪遗传性稳定，具有早熟、耐粗饲、抗病力强和产仔多等特点，是我国优良的地方猪种，2001年被列入国家种质资源保护计划（舒黎辉和邢君，2015）。作为优良种质资源被保护，同时，因巴马香猪肉质营养丰富和味道鲜美，被作为食品开发；又因其体重轻，生长慢，作为试验动物被广泛应用于生物医学研究领域。此外，巴马香猪因其毛色“两头乌”，外形圆润俊俏，深受宠物市场青睐（玉萍等，2011）。

巴马香猪因具有独特的种质特性而具有良好的开发利用前景。在目前疫情频发的背景下，对巴马香猪进行高效繁殖研究与开发显得尤为紧迫。因此，本研究以巴马香公猪为研究对象，研究在日粮中添加复方中草药对其精液品质及免疫的影响，对提高巴马香猪繁殖和种质资源保存具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试验动物和分组 试验将12只健康、成年、性成熟性能相近的巴马香公猪随机分为4组，每组3只，1组为对照组，饲喂基础日粮；2组为低剂量复方中草药组，在基础日粮中添加1%复方中草药；3组为中剂量复方中草药组，在基础日粮中添加2%复方中草药；4组为高剂量复方中草药组，在基础日粮中添加3%复方中草药。

所有试验动物每天饲喂2次，1.0 kg/次，自由饮水。分别在试验开始后第0、7、14和21 d采集精液，检测精液品质；空腹前腔静脉采集血液，分离血清，-20℃保存，用于测定免疫指标。

1.2 复方中草药组方及制备 淫羊藿、菟丝子、补骨脂、覆盆子等以一定比例混合后粉碎，然后于温箱中烘干后分装备用。

1.3 测定方法

1.3.1 精液采集 手握法无菌采集精液，将精液盛于37℃预热的烧杯中，用量筒测量精液体积。

1.3.2 精子活力测定 参照张斌等（2018）方法，精液经稀释后置于预热载玻片上，加盖玻片后显微镜下计数200个精子中直线运动精子所占的百分率，即为精子活力。

1.3.3 精子畸形率 采用吉姆萨染色法，具体方法参照 GB 23238-2009（2009）。精液抹片，干燥后置于中性福尔马林液中固定15 min，经吉姆萨液染色1.5 h，显微镜下计数200个精子中的畸形精子所占百分率，即为精子畸形率。

1.3.4 免疫指标 血清中IgA、IgG、IgM含量测定分别按照猪IgA、IgG、IgM ELASA检测试剂盒说明书操作，利用酶标仪在450 nm波长测量各孔的OD值，然后根据公式换算，得出血清中IgA、IgG、IgM含量。

1.4 数据处理 试验数据采用SPSS统计软件中ANOVA进行统计分析。

2 结果分析

2.1 日粮添加复方中草药对巴马香公猪精液品质的影响 由图1可知，给药后14 d，中、高剂量组精液量显著高于对照组（P＜0.05）；而21 d时，所有给药组精液量均显著高于对照组（P＜0.05），但以中剂量组增加最为明显，且显著高于低、高剂量组（P＜0.05）。给药后各组的精液量呈增加趋势，但低剂量组14、21 d时精液量显著高于0、7d（P ＜ 0.05）；中剂量组 7、14和 21 d精液量均显著高于0 d（P＜0.05）；在高剂量组中，仅21 d时精液量显著高于0、7 d（P＜0.05）。

图1 日粮中添加复方中草药对巴马香公猪精液量的影响

由图2可见，与对照组相比，不同给药组在同一日龄下，7、14 d时仅中剂量组精子活力显著高于对照组（P＜0.05），21d时各给药组精子活力与对照组均存在统计学差异（P＜0.05）。同一给药组相比，低剂量组14、21 d时精子活力与0、7 d间存在显著差异（P＜0.05）；中剂量组在给药后7、14和21 d时，精子活力与0 d均存在显著差异（P＜0.05），但14、21 d间差异不显著（P＞0.05）；在高剂量组中，虽精子活力逐渐升高，但仅21 d时精子明显高于0、7d（P＜0.05）。

图2 日粮中添加复方中草药对巴马香公猪精子活力的影响

由图3可知，中剂量组精子畸形率在14 d和21 d时显著低于对照组，低、高剂量组精子畸形率在21 d时也显著低于对照组（P＜0.05）。与同一给药组相比，随着给药时间增加，除高剂量组14 d外，14 d和21 d各给药组间精子畸形率均明显降低（P＜0.05）。

图3 日粮中添加复方中草药对巴马香公猪精子畸形率的影响

2.2 日粮中添加复方中草药对巴马香公猪免疫指标的影响 由表1可知，给药后0、7d各组IgA、IgG和IgM含量与对照组无明显变化（P＞0.05）；14 d和21 d中剂量组IgA显著高于对照组（P＜0.05）。组内相比，21 d各给药组IgA和IgG含量均最高（P＜0.05）。就IgM含量来看，组间和组内相比均无显著差异（P＞0.05）。

表1 日粮中添加复方中草药对巴马香公猪血清中IgA、IgG、IgM含量的影响 g/L

3 讨论

3.1 日粮中添加复方中草药对巴马香公猪精液品质 精子是精液的主要成分，精子数量、活力、畸形率等直接影响精液质量（李叶子和刘波，2016）。因此，本试验主要通过精液量、精子活力和精子畸形率评价日粮中添加复方中草药对巴马香公猪精液品质的影响。在动物繁殖方面，中草药改善公畜精液品质也发挥了积极作用（杨飞来等，2020）。

本试验复方中草药选择淫羊藿、菟丝子、补骨脂、覆盆子为主药。其中淫羊藿主要含有黄酮、生物碱、多糖等壮阳类活性成分（黄涛，2017），具有雄激素样作用。菟丝子主要包含黄酮、多糖、糖苷化学成分，具有补肝肾、益精髓作用（刘运镇等，2014）。补骨脂具有补肾助阳，固精缩尿功效（杨阔等，2021）。覆盆子具有补肾益精、补助肾阳功效（曾小艳等，2020）。杨飞来等（2020）研究表明，淫羊藿提取物可显著改善公猪精液量和精液品质。菟丝子黄酮可通过保护生精细胞，抑制生精细胞凋亡，促进生精细胞活性（2021）。严迪华等（2012）研究表明，日粮添加含有一定剂量的补骨脂和覆盆子的中草药复方制剂可显著提高种公猪的精液品质。本试验中，在日粮添加淫羊藿、菟丝子、补骨脂、覆盆子等组成的复方中草药在提高巴马香公猪精液量，增加精子活力，降低精子畸形率方面具有一定作用，特别是中剂量组在给药14 d和21 d时作用显著。

3.2 日粮添加复方中草药对巴马香公猪免疫功能的影响 免疫球蛋白是由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类具有抗体活性的球蛋白，包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中IgA、IgG、IgM常用于评价动物机体免疫能力。IgA主要存在于外分泌液中，是黏膜细胞表面的主要免疫活性成分；IgG含量高，持续时间久，是发挥免疫功能的主要因子（Allaire等，2018）。本试验复方中草药的主药淫羊藿、菟丝子、补骨脂、覆盆子均具有提高和改善机体免疫功效（曾小艳等，2020）。本试验结果表明，日粮中添加复方中草药可有效提高巴马香公猪血清中IgA和IgG含量，说明该复方中草药可提高巴马香公猪免疫能力。