如何正确面对免疫检测灰区？

文 李晓颖 （成都市成华区疾病预防控制中心）

不要着急，也不要担心。这种情况其实在医学实践中很常见，为此特别引入了“灰区”的概念。顾名思义，灰区是介于黑（异常）白（正常）之间的过渡区域，不能简单地判定它是正常还是异常。那我们应该怎么理解灰区呢？接下来，以免疫检测为例，我们探讨一下为什么会有灰区？面对灰区，我们应该怎么办？

免疫检测产生灰区的原因

方法学因素

免疫检验方法众多，有酶联免疫吸附试验、免疫比浊法、化学发光技术、荧光免疫技术、放射免疫技术、流式细胞术等。而每个大类，又包含多种不同的方法，比如：酶联免疫吸附试验包括夹心法、直接法、间接法、竞争法、捕获法、ABSELISA法等，化学发光技术包含直接化学发光免疫分析法、化学发光酶免疫分析法、电化学发光免疫分析法等。不同方法灵敏度和特异性不同，对结果的影响不同，产生灰区的概率也不同。

试剂因素

试剂应用的检测原理基于抗原抗体反应，但在实际的反应过程中，容易受到试剂的影响，比如，基质效应，而出现试验结果误差。因此在引进新项目前，需要对试剂进行严格评估，才能降低因试剂因素带来的影响。在实际评估时，首先要确定项目开展的必要性，了解检测方法以及原理，选择多家试剂盒进行对比，从中选择最合适的试剂盒，定期对检测结果进行反馈。比如HIV抗体检测试剂的选择，可以参考国家CDC发布的全国艾滋病病毒抗体诊断试剂临床质量评估报告，优先选择敏感性、特异性皆排名靠前的试剂。

样本因素

内源性干扰因素：包括类风湿因子、自身抗体、溶菌酶等。避免内源性因素的干扰，应重视试剂盒的合理选择。在遇到疑难病例时，也应优先考虑内源性干扰因素的存在，才能避免因素影响，对检测结果进行合理分析。

外源性干扰因素：包括样本溶血、严重脂血、样本污染、样本储存时间过长、样本反复冻融等。这些因素可造成非特异性显色致结果偏高、抗体效价降低致结果偏低等等后果。外源性干扰因素可以通过规范采样流程、严格收样把关、对样本进行过滤、离心等操作方式，提高样本的合格率。

自身因素：有部分早期感染，因感染时间短，体内抗体未达到一定水平，能检测出部分抗体的存在，但又不能达到阳性标准。有部分疾病晚期，因机体免疫水平极低，无法产生足够的抗体，也有可能导致检出但达不到阳性标准而成为灰区。

操作因素

严格按照试剂说明书和标准操作程序进行检测，才能有效避免操作因素带来的影响。以ELISA为例，测定操作步骤复杂，各步骤操作不当，均可能导致误差。ELISA测定中加样时，通常使用移液器。移液器长时间使用会产生磨损，严重磨损会导致移液器吸取液体的量不准确，会降低实验结果的准确性，因此须定期对移液器进行维护和校准。检测过程中，每次加不同样本时，若不按要求更换吸头，容易发生交叉污染。吸样速度过快，容易吸入空气，导致取样量过少。加样速度过快，容易产生气泡，使样本与预包埋的抗原/抗体无法充分接触。样品量大时，操作时差也大，通常使用96孔板，从第一个样开始到最后一个样加完，前后相差几十分钟，而之后整板同时孵育，导致每孔反应时间不一致，也会影响检测结果。

面对免疫检测灰区结果，我们该怎么办？

灰区之所以让人忐忑，正是因为它的不确定性。若是异常，那明确诊断，好好治疗；若是正常，便可排除或放下。模棱两可、不上不下，反倒让人心忧。其实不用紧张，知道了灰区产生的原因，我们就可以根据不同的原因寻求不同的解决办法。如果是方法学因素导致，那就换特异性更强的方法检测，甚至可以多用几种方法一起检测。例如，HIV抗体筛查结果可疑，可以做WB确证实验，如果结果是不确定，可以再检测核酸。如果是试剂因素导致，那就换更好的试剂，或者几种不同试剂做平行检测。如果是样本因素或操作因素，就重新采样检测或定期复查，甚至去上级医院检测。

从长期随访结果来看，最初的灰区结果，到最后多数确定为正常/阴性。但也有部分患者最终进展为异常/阳性。因此，拿到灰区结果，不必太过紧张，但也不能置之不理。放平心态，遵医嘱定期随访复查，才是解决问题的正确道路。