外周血LncRNA-p3134表达水平在妊娠期糖尿病诊断中的价值

谢 芳, 李 强, 赵爱国, 杨卫华

(中国科学院大学深圳医院 内分泌代谢科, 广东 深圳, 518107)

妊娠期糖尿病(GDM)是临床中十分常见的妊娠综合征，与孕产妇和新生儿不良结局有关[1-2]。GDM的危险因素包括超重和肥胖、产妇高龄、家族病史或任何形式的糖尿病。GDM给孕产妇、发育中的胎儿带来了健康风险，包括发生妊娠妇女2型糖尿病(T2DM)的高可能性，以及后代中可能出现不良心脏代谢表型[3]。胰岛素分泌功能异常以及抵抗性增强是妊娠期糖尿病患者的重要生理特征[4]。糖尿病病因非常复杂，主要是由致病基因和环境共同作用引发。长链非编码RNA(LncRNA)是参与基因表达调控的重要因子。LncRNA异常表达能够对疾病的发生起到促进或者抑制作用，可在心血管疾病、糖尿病、肿瘤等多种疾病的发病过程中发挥重要作用[5-6]。相关研究[7]显示, LncRNA-p3134是调控胰岛素信号通路的关键因子，并与胰岛β细胞功能调控相关。本研究通过检测LncRNA-p3134表达，探究其表达与胰岛素敏感性、胰岛β细胞功能和GDM发生的相关性，为指导临床上GDM诊疗工作开展以及后续研究LncRNA-p3134表达引起GDM的作用机制提供理论依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2019年12月中国科学院大学深圳医院收治的82例GDM患者为研究对象，纳入GDM组。纳入标准: ① 按照美国糖尿病学会诊断标准[8]诊断为GDM者; ② 年龄≥18岁，单胎妊娠者; ③ 知情同意并自愿参与研究者。排除标准: ① 妊娠前已确诊妊娠糖尿病者; ② 严重心、肝、肾等器质性疾病者; ③ 急性感染期、恶性肿瘤者; ④ 高血压、蛋白尿、血液病患者; ⑤ 信息资料不全者。另取116例非GDM患者作为对照组。本试验已通过医院伦理委员会批准，且所有纳入研究的患者均已签署知情同意书。

2组患者年龄、孕前体质量指数(BMI)、孕周、收缩压和舒张压方面比较，差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。见表1。

表1 非GDM组和GDM组人口学资料及临床资料比较

1.2 方法

1.2.1 外周血采样和RNA提取: 对患者进行全血标本采集，采集前空腹8～10 h。收集全血标本2.5 mL于PAXgeng RNA管中，室温环境下静置2 h后放入-80℃冰箱保存待用。提取外周血RNA，经过逆转录得到cDNA。

1.2.2 荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测: 对内参片段和目的片段大小进行检测，内参基因U6的大小为94 bp, 目的基因LncRNA-p3134的大小为100 bp。以U6作为内参基因，引物均由Primer Premer5 软件设计并由上海生工公司合成。荧光定量PCR反应体系总量为20 μL, 包含cDNA模板5 μL及上、下游引物各0.5 μL、2×SYBR Green qPCR SuperMix体积为10 μL, 4 μL dH2O。共设置40个循环，后做溶解曲线分析。实验过程中设置3个复孔，结果取三者的平均值。

1.2.3 PCR结果计算: 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果使用Ct值来表示，采用比较CT法进行相对定量，计算方法为，即为LncRNA-p3134基因的相对表达量。

1.3 观察指标

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 GDM组和对照组外周血中LncRNA-p3134表达水平比较

外周血中，GDM组LncRNA-p3134相对表达水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2 。

表2 2组外周血中LncRNA-p3134表达水平比较

2.2 GDM组和对照组临床特征比较

对照组TC、TG、FPG、FCP、HbA1c和GA低于GDM组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 2组临床特征比较

2.3 LncRNA-p3134表达与GDM发生相关性

LncRNA-p3134表达与ISOGTT(r=-0.532,P<0.001)、HOMA-β(r=-0.417 9,P<0.001)呈负相关，与HOMA-IR(r=0.556,P<0.001)、GDM(r=0.726,P<0.001)呈正相关，见图1。

2.4 LncRNA-p3134表达对GDM发生的影响

校正混杂因素后, LncRNA-p3134表达是GDM发生的独立影响因素(OF=P<0.05), LncRNA-p3134表达相对量越高则GDM发生风险越大。见表4。

表4 多元logistics回归分析LncRNA-p3134表达对GDM发生的影响

2.5 LncRNA-p3134诊断GDM的作用

ROC曲线分析显示, LncRNA-p3134诊断GDM的曲线下面积(AUC)为0.853(95%CI为0.799 4～0.906,P<0.05), 敏感度和特异度分别为75.0%、83.0%, 最佳截断值为0.580。见图2。

3 讨 论

妊娠期间女性内分泌系统可发生一系列复杂的变化，孕妇常常由于饮食习惯和结构、活动与锻炼的改变，容易发生妊娠期高血压、GDM等并发症。中国GDM的患病率呈逐年上升趋势[9]。GDM能够引起妊娠妇女体内代谢紊乱，导致妊娠合并症、不良妊娠结局的发生，还会对胎儿的生长发育产生影响。研究[4]认为, GDM的发生与胰岛素敏感性和功能有关。相比孕前，妊娠期母体对胰岛素的敏感性下降，胰岛β细胞对血糖的兴奋表现应答失调，导致胰岛素分泌功能异常及抵抗性增强。而胰岛β细胞发挥作用的机制和其功能发挥受到多种分子调控[10-13], 其中LncRNA是近年来学者关注的重点。CHENG Y Q等[14]研究发现, LncRNA-PVT1敲除可通过靶向调控miR-181a-5p提高胰岛β细胞的胰岛素分泌能力。FENG Y等[15]报道指出, LncRNA-DANCR是在胰岛INS-1细胞中拮抗miR-33a-5p功能的海绵，而GDM患者外周血中miR-33a-5p表达上调，与血糖呈正相关(P<0.05), miR-33a-5p的过度表达或显著抑制或促进INS-1细胞的生长和胰岛素分泌。LncRNA-p3134是新提出的与胰岛β细胞功能有关的长链非编码RNA, 但其与GDM的发生发展相关性研究鲜有报道。本研究通过检测妊娠妇女外周血中LncRNA-p3134的表达水平和与GDM发生的相关性，证明了LncRNA-p3134在GDM妊娠妇女外周血中高表达，同时与胰岛素敏感性以及胰岛β细胞功能有关，可能通过参与相关分子机制影响GDM的发生。此外，在GDM诊断中具有一定作用，可作为GDM早期诊断的候选分子标记物。

本研究中, GDM妊娠妇女外周血中LncRNA-p3134相对表达水平较非GDM妊娠妇女高(P<0.05), 且LncRNA-p3134表达与ISOGTT、HOMA-β、HOMA-IR、GDM发生有关(P<0.05), 提示LncRNA-p3134在GDM中异常表达，可能通过调控胰岛素敏感性和胰岛β细胞功能引起GDM的发生。RUAN Y T等[7]研究发现，在T2DM患者中LncRNA-p3134可通过PI3K/Akt/mTOR信号正调控胰岛β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌，但在妊娠妇女中是否也通过同一个信号通路发挥作用尚未明确，可以推测妊娠妇女外周血LncRNA-p3134水平与糖代谢失衡以及胰岛β细胞功能有关。 本研究结果表明, LncRNA-p3134表达是GDM发生的独立影响因素(P<0.05), LncRNA-p3134表达相对量越高则GDM发生风险越大。阮玉婷[16-17]研究报道, LncRNA-p3134在GDM中稳定高表达，并与血糖水平呈正相关，与评估胰岛β细胞功能的指标HOMA-β指数呈显著负相关，可能与LncRNA-p3134参与糖代谢过程中胰岛β细胞的调控有关。LncRNA-p3134表达对GDM的独立影响，可能可作为GDM早期诊断的新标志物[18-19]。本研究采用ROC曲线分析LncRNA-p3134对GDM诊断的效能，结果发现, LncRNA-p3134表达可诊断GDM的发生，其灵敏度和特异度较高，预测效能也较好(AUC为0.853), 提示LncRNA-p3134可作为GDM早期诊断的候选标志物，单一或联合其他已知指标，构建GDM诊断的分子体系，可早期诊断临床上GDM发生，并及时给予干预措施，还有助于围产期保健和防止妊娠合并症发生引起的不良结局。

本研究也存在一定的不足之处，样本量小，病例来源单一，研究结果存在一定的选择偏倚; 外周血中LncRNA-p3134表达水平检测的有效性没有进行凝胶电泳检测，质量控制部分不够严谨; 缺乏具体分子作用研究，不能深入探讨LncRNA-p3134在GDM发生发展中的作用机制，上述方面有待后续进一步深入研究。

综上所述, LncRNA-p3134在GDM中表达水平较非GDM高，其可能通过影响胰岛素敏感性以及胰岛β细胞功能导致GDM的发生。LncRNA-p3134在临床上可能可作为GDM诊断的候选标志物。