牛结核杆菌病的研究进展

郭志文，武帅

（1.吕梁市动物疫病预防控制中心 山西吕梁 033000；2.吕梁市饲料兽药工作站 山西吕梁 033000）

1 病原

该病的病原为结核分支杆菌，该病原隶属于分枝杆菌科分枝杆菌属，为革兰氏阳性小杆菌，抗酸染色试验结果呈阳性。结核分支杆菌可在患病牛的组织和粪便中检查到，常成团存在，不易被分离出来。其菌落形态呈无色透明的半球形，随着培养时间的延长，可见菌落颜色变暗，呈现出乳头样外观。结核分支杆菌对外界环境的刺激具有很强的抵抗性，正常条件下结核分支杆菌可在环境中存活1年左右，对结核分支杆菌最佳的培养温度为38～40℃，63℃中可存活0.5h，结核分支杆菌对3%的甲醛消毒液敏感。

2 流行病学

尽管牛分枝杆菌可在环境中生存数月，但其主要通过感染牛产生的气溶胶传播。已有研究证实牛通过气溶胶感染只需要不超过10个病原体，而经口途径感染则需要1,000万个病原体。奶牛感染牛分枝杆菌的风险较高。这是因为在挤奶及冬季圈养时奶牛有较多相互密切接触的机会。犊牛可以通过摄入被污染的牛奶发生感染，而摄入感染可能是该病传播给猪和猫的途径。牛分枝杆菌野生动物储存宿主是一些国家的放牧牛发生感染的主要来源。这些野生宿主主要包括欧洲的獾、新西兰的刷尾负鼠、非洲的岬水牛和其他反刍动物。野生或饲养的鹿都特别易感，并可能作为感染牛的储存宿主。野生动物作为储存宿主导致感染发生的相对重要性取决于若干因素，包括该动物是否是这个病原的维持宿主或偶尔感染的宿主、这种动物感染后的排菌量，以及与牛群的接触程度等。澳大利亚野猪就是牛分枝杆菌的一个偶尔感染的宿主。如果它们不与感染的牛接触，那么它们就不能维持这个细菌的感染。野猪经口途径感染，出现含有很少牛结核杆菌的小病灶，因而被视为牛群低风险的感染源。相比之下，獾则是牛分枝杆菌的维持宿主，病变主要发生在獾的肺部，并导致感染性气溶胶的产生。此外，在獾患病晚期其与牛群的接触有所增加，因为此时的獾在白天会表现出接近放牧牛群的异常行为。

3 致病机理

牛分枝杆菌的毒力涉及它在宿主巨噬细胞的生存和复制的能力。该菌特异性的毒素尚未发现，其毒力是许多致病因素协同作用的结果。这该种分枝杆菌通过呼吸道进入宿主体内后，被巨噬细胞和树突细胞吞噬。分枝杆菌被树突细胞吞噬后被带到附近的淋巴结。宿主对这种细菌感染的初始分反应是非特异性的，是由分枝杆菌细胞壁中的蜡质和脂质引发的。该菌干扰吞噬体-溶酶体融合作用，使其在巨噬细胞的吞噬体中存活下来，这可能是通过延缓吞噬体成熟，以及使溶酶体消化失败实现的。死亡的巨噬细胞释放出的细菌被周围活的吞噬细胞所吞噬。吞噬了分枝杆菌的巨噬细胞的迁移可以引起这种感染在体内的扩散。

4 临床症状

感染的牛只有的在疾病晚期才出现临床症状，且有广泛病变的牛仍可能表现为健康状态。随着病情的发展，身体损耗症状可能会变得明显。在肺结核晚期，动物可能最终发展为咳嗽和间歇性发热。受感染的乳腺组织部分可能会出现明显硬化，并伴有乳前淋巴结肿大。在该病早期阶段，尸检可能难以观察到一些微小病变。这些病变主要由改变了的巨噬细胞即上皮样细胞聚集而形成。由巨噬细胞融合形成的多核朗罕氏巨细胞也可能出现。在陈旧的病灶中，早期纤维性增生导致结核包样结节的形成，其核心有一个干酪样坏死区域（外观与软奶酪相似）。典型的结核性结节特征性的组织学外观。

5 诊断程序

结核菌素试验是标准的牛活体检验程序。该检测方法是基于结核菌素引起的迟发型超敏反应，也适用于猪和饲养的鹿的检验。牛在感染后30～50d通常能检测到结核菌素的阳性反应。结核菌素是由分枝杆菌产生的，也称为纯蛋白衍生物。检测时，进行PPD皮内注射来检测动物敏感性。结核菌素试验主要有两种方法：

1）PPD皮内试验，即在尾部皱褶处皮内注射0.1mL牛PPD。72h后检查注射部位，阳性反应的特点是出现硬块或水肿隆起。

2）双PPD比较皮内试验，即将0.1mL禽PPD和0.1mL牛PPD分别皮内注射至颈部侧面相距12cm的位点。使用游标卡尺分别测量结核菌素注射前和注射后72h注射部位的皮肤厚度。注射牛PPD部位的皮肤厚度超过注射禽PPD部位的皮肤厚度4mm或以上，即可认为发生了感染，这样的牛被称为阳性反应牛。结核菌素试验中假阳性结果的发生可能是由于动物被不是牛分枝杆菌的分枝杆菌所致敏。在假阳性发生率较高的国家，人们更倾向于比较皮内试验，而不是单一皮内试验。

结核菌素试验中假阴性结果也可能发生，其原因是：在牛产生针对结核菌素的迟发型超敏反应能力之前（在感染后30d内）接受结核菌素测试，牛不发生此类超敏反应。有些感染牛结核分枝杆菌的牛对结核菌素不产生迟发型超敏反应，即所谓的“无反应性”，具体的机制尚不明确，这些牛可能正处于结核病进展期。注射结核菌素后可能出现短暂的脱敏现象，通常在60d内恢复反应性。由于应激导致的免疫抑制，包括分娩后的初期或使用免疫抑制药物，可能会导致结核菌素试验出现假阴性。

6 牛分枝杆菌的分离要求

1）样本的去污处理，以消除快速增长的污染的杂菌。磨碎的样品用2%～4%的氢氧化钠或5%的草酸处理30min，再用酸或碱进行中和。然后，离心弃去上清液，沉淀中含有浓缩的分枝杆菌，用于分离培养。

2）在无甘油、但含有0.4%丙酮酸钠的改良罗氏培养基的斜面上，接种上述离心沉淀，在37℃有氧条件下培养8周。

3）分离株鉴定标准：生长速率和菌落形态特征，菌落涂片呈抗酸染色阳性，和细菌的生化特性。

7 加强环境管理

牛的饲养方式不管是采取室内还是室外饲养，都要注意保持栏舍的干燥、干净、通风、舒适，冬暖夏凉。栏舍内的垫料应有30cm厚，最好离开地面5～10cm，垫料必须及时更换，注意做好消毒，最好天天消毒。冬季室外饲养的犊牛要注意防风，可用垫料草捆或饲料包装袋做成挡风墙，有条件的牛场在犊牛出生后及时采用保温灯，穿上棉马甲等保暖。室内饲养的犊牛既要保温又要通风，防止室内氨气等污浊气体浓度过高。夏季要注意防晒，及时搭建遮荫网，增加饮水，防止中暑等。█