猪圆环病毒3型感染情况的初步调查

肖 兴 ，蒋小玲 ，芮 雪 ，贺晓霜 ，段燕方 ，周双海 ＊

（1.衡阳市畜牧水产事务中心，湖南 衡阳 421001；2.北京农学院动物科技学院，北京 102206）

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV）是目前已知的最小的动物病毒，其属于DNA病毒。在20世纪，猪圆环病毒1型（PCV1）和猪圆环病毒2型（PCV2）相继被发现，其中前者对猪没有致病性，后者则能引起包括母猪繁殖障碍在内的多种疾病，并被认为和猪皮炎与肾病综合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）有关，给世界养猪业造成了较大经济损失[1]。2016年，一篇文献报道在PDNS病猪与流产母猪体内检出一种新型猪圆环病毒，并被命名为PCV3[2]；同年，另一篇文献报道在心肌炎与多系统炎症病猪体内也检出大量的PCV3[3]；最近，一篇文献报道用PCV3单独感染试验成功复制出PDNS病例[4]。这些资料表明PCV3也对猪具有致病性。一些文献报道，PCV3已在中国一些猪场存在[5-6]。PCV3作为正在传播的一种新的猪病病原，了解当前其流行情况是有必要的。

1 材料与方法

1.1 临床血清样品

湖南地区160头断奶仔猪和京津冀地区363头断奶仔猪的血清都采集于2020年。

1.2 主要实验材料

病毒DNA提取试剂盒和PCR试剂Taq Master Mix都是湖南艾科瑞生物工程有限公司产品；检测PCV3核酸的上游引物P1（序列为5-TGCCAGGGCTTGT TATTCTGA-3）和下游引物P2（序列为5-GGACACT CGTAGCAC CACAAAA-3）[6]由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.3 实验方法

按照试剂盒说明书提取血清中的病毒DNA，用常规PCR方法检 测PCV3核 酸。PCR体 系 为：10 μL Taq Master Mix、5 μL病毒DNA、10 pmol上 游 引 物P1、10 pmol下游引物P2，体系总体积为20 μL。PCR程序为：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，循环40次；72 ℃ 10 min。取10 μL PCR产物在1.8%琼脂糖凝胶上进行电泳30 min后，在凝胶成像仪上观察是否有381 bp大小的特异性目的条带。

1.4 统计分析

用卡方检验对不同猪场的个体阳性率数据进行差异显著性分析。

2 结果与分析

对国内部分地区16个猪场的523头断奶仔猪的病毒核酸检测结果（表1）显示，猪场阳性率为68.75%，总的个体阳性率为31.74%，不同猪场的个体阳性率介于0%~80.00%之间，整体存在极显著（χ2=147.4，P<0.01）差异。

表1 病毒核酸检测的整体结果

鉴于所有检测猪场的个体阳性率的整体存在极显著差异，于是进行再分割分析。结果（表2）显示，可以按照个体阳性率的高低分割成4个组，即个体阳性率为0%的组（占31.25%）、个体阳性率大于0%但不大于20%的组（占18.75%）、个体阳性率大于20%但不大于70%的 组（占31.25%）、个 体 阳性率大于70%的组（占18.75%），这4个组之间差异达到极显著（χ2=145.9，P<0.01）水平。进一步分析发现，有半数猪场的个体阳性率超过20%，其中超过70%的占18.75%（3/16）；低于20%的也占半数，其中个体阳性率为0%的占31.25%（5/16）。

表2 病毒核酸检测的分组结果

3 讨论

目前，PCR方法是检测PCV3感染的最常用方法。对采集于湖南省和京津冀地区共16个猪场的523头断奶仔猪血清的PCR检测结果显示，猪场阳性率为68.75%，超过三分之二，说明多数检测猪场存在PCV3感染；总的个体阳性率为31.74%，接近三分之一，说明有不少检测个体感染了PCV3；同时，不同猪场之间的个体阳性率的差异非常显著，有的高达80%，有的低到为0。进一步分析发现，PCV3感染率超过20%以上的猪场达到50%，超过70%的猪场接近20%，而低于20%的猪场也达到50%，还有超过30%的猪场为0%。张帆帆等[7]对2016-2017年江西省256份样品进行PCR检测后发现PCV3感染率为1.17%，季程远等[8]对2017年广西地区63份猪淋巴结样品进行PCR检测后发现PCV3感染率为19.0%，温海京等[9]对2018—2019年京津冀地区120份仔猪样品进行PCR检测后发现PCV3感染率为40.8%，这些文献报道了近年来我国一些地区的PCV3感染率，不同地区表现为高低不一。本次对2020年湖南省和京津冀地区的初步调查也显示出类似的结果，并且进一步分析了不同猪场的感染率数据，发现PCV3感染率在接近20%的猪场高达70%以上、在大约半数的猪场低于20%、在超过30%的猪场仍然为0%。由于PCV3被认为与母猪繁殖障碍、PDNS和心肌炎等疾病有关[2-3]，并且已有试验证实PCV3感染能够引起PDNS[4]，充分表明PCV3对猪具有明显致病性。因此，存在母猪繁殖障碍和PDNS等疾病的猪场，有必要关注和防范临床上的PCV3感染。