肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液中IL-6、IL-25、IL-35的水平及其临床意义

顾丽娜，郭 赟，项红霞，徐惠良⋆

（无锡市儿童医院1. 儿感染性疾病科2.儿呼吸内科，江苏 无锡 214000）

肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是一种介于细菌与病毒之间的病原微生物。研究表明，MP 是引起社区获得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）的主要病原体之一。近年来，随着肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP） 发 病率的逐渐上升，难治性MPP 及重症MPP 越来越受到临床上的重视。MPP 患者多为儿童。有研究指出，部分MPP 患儿可继发坏死性肺炎、大量胸腔积液及闭塞性细支气管炎。目前，临床上对MPP 的具体发病机制尚未阐明。但有大量的研究证实，MPP 的发生与患儿存在免疫功能损伤密切相关。多种炎性细胞因子在MPP 的发生及进展中起着重要的作用。有研究指出，MP 感染机体后会激活T 淋巴细胞，引起辅助型T 细胞1(T helper 1 cell，Th1)/ 辅 助 型T 细 胞2(T helper 2 cell，Th2) 的失衡，从而可影响多种信号传导通路[1]。本文主要是探讨MPP 患儿肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）中白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-25（interleukin-25，IL-25）、白细胞介素-35（interleukin-35，IL-35）的水平及其临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2019 年1 月至2020 年12 月在无锡市儿童医院住院治疗的30 例MPP 患儿及同期因支气管异物或畸形入院的20 例患儿作为研究对象。将其中30 例MPP 患儿作为MPP 组，将其中20 例因支气管异物或畸形入院的患儿作为对照组。MPP 组患儿的纳入标准是：1）病情符合《实用儿科学》中关于MPP 的诊断标准，有呼吸道症状，影像学检查提示其存在肺部炎症浸润；2）血清特异性免疫球蛋白M 抗体呈阳性；3）未合并细菌、病毒及真菌感染；4）未合并肺结核、支气管哮喘或其他肺部疾病；5）近期内未应用过糖皮质激素及免疫调节剂；6）未合并过敏性疾病或免疫相关性疾病。MPP 组30 例患儿中有男16 例，女14 例；其年龄为2 ～14 岁，平均年龄（3.8±1.1）岁。对照组20 例患儿中有男12 例，女8 例；其年龄为2 ～14 岁，平均年龄（4.2±2.7）岁。两组患儿的性别构成比及年龄相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 对两组患儿均进行纤维支气管镜检查和支气管肺泡灌洗术，使用利多卡因对其进行气道黏膜表面麻醉。置入纤维支气管镜，探查各支气管段后，用温生理盐水反复灌洗患侧肺段。收集BALF 并退镜，保证BALF 的回收率在40% 以上。将收集到的标本送往实验室进行检测，在4℃下对其进行离心处理（离心速度为1000 r/min，离心时间为10 min），留取上清液，储存于-80℃的冰箱中待检。

1.2.2 细胞因子测定 采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术检测两组患儿BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 的含量。IL-6 检测试剂盒由美国R&D Systems 公司提供，IL-25检测试剂盒和IL-35 检测试剂盒分别由武汉博士德生物公司、杭州联科生物公司提供，所有实验步骤均严格按照产品说明书进行。

1.3 观察指标

比较两组患儿BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 的水平。

1.4 统计学处理

采用SPSS 24.0 软件对本研究所得数据进行统计学分析，计量资料用均数± 标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ² 检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

MPP 组患儿BALF 中IL-6 的水平高于对照组患儿，其BALF 中IL-35 的水平低于对照组患儿，差异有统计学意义（P＜0.05）；其BALF 中IL-25 的水平与对照组患儿相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 两组患儿BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 水平的比较（± s）

表1 两组患儿BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 水平的比较（± s）

组别 IL-6（pg/mL） IL-25（pg/mL） IL-35（ng/mL）MPP 组（n=30） 36.96±21.54 52.06±7.25 2.18±0.64对照组（n=20） 19.19±13.89 51.77±3.92 2.77±0.84 t 值 2.220 0.133 -2.073 P 值 0.039 0.896 0.049

3 讨论

MPP 是临床上常见的一种呼吸道疾病。在所有CAP患儿中，MPP 患儿占20% ～30%[2]。MPP 的发病机制复杂，多数学者认为免疫因素在MPP 的发生发展中起着重要的作用。MP 携带的黏附分子可与宿主靶细胞结合，使肺组织吞噬细胞的功能丧失，从而可影响人体的免疫功能。MP 引起肺部炎症时，Th1 被激活，其在分泌细胞因子的同时可造成肺组织的损伤[3]。在对MPP 患儿进行支气管肺泡灌洗术时收集的BALF 直接来自于患侧肺段，能直接反映MP 感染后肺组织的免疫炎症状态。IL-6是一种具有广泛生物学活性的细胞因子。在人体出现炎症反应时，IL-6 可诱导T 淋巴细胞活化，促进炎症因子的产生，同时可抑制Th1 极化，促进Th2 分化，从而可加快B 淋巴细胞的分化增殖，并促进其产生抗体。上述机制与MPP 患儿出现的肺外症状可能有一定的关系[4]。大量的研究表明，MPP 急性期患儿会出现血清IL-6 水平明显增高的情况[5]。本研究的结果显示，MPP 组患儿BALF 中IL-6 的水平高于对照组患儿，P＜0.05。这提示，IL-6 参与了MP 感染后的肺部炎症病理过程。IL-25是由活化的Th2 产生的一种炎症因子。有研究指出，IL-25可诱导和增强Th2 型免疫反应，并可抑制Th1 及辅助型T 细胞17(T helper 17 cell，Th17) 介导的免疫反应[6]。本研究的结果显示，MPP 组患儿BALF 中IL-25 的水平与对照组患儿相比，P＞0.05。这提示，IL-25 并没有参与到MPP 发生发展的过程中，但笔者认为此研究结论需要更多实验数据的支持。IL-35 是一种具有免疫抑制功能的细胞因子。其受体包括四种不同的二聚体。有研究指出，IL-35 的两个亚基在与受体结合后可通过转录因子传递信号，激活酪氨酸激酶- 信号转导和转录激活因子信号通路，参与免疫调节。本研究的结果显示，与对照组患儿相比，MPP 组患儿BALF 中IL-35 的水平较低，P＜0.05。这提示，IL-35 作为一种抑制性细胞因子，在MP 感染后的肺部炎症病理过程中发挥着免疫调节作用，但其具体的免疫调节机制仍需要进一步的研究。有研究指出，MP 在进入人体并与相关受体结合后，可促进巨噬细胞产生细胞因子与趋化因子，介导广泛的免疫反应，从而可导致T 细胞亚群的紊乱，使Th1/Th2 失衡。当Th2 型细胞免疫占主要优势时，Th1 型免疫反应会受到抑制，进而可使人体无法发挥正常的免疫功能，出现免疫抑制。细胞因子作为免疫细胞之间传递信息的重要物质，它的失衡会在MPP 的发生和发展中起到重要的作用。在本次研究中，MPP 组患儿BALF 中IL-6 和IL-35的水平与对照组患儿相比存在明显差异，这提示IL-6 及IL-35 均与MPP 的发生发展有关。

综上所述，免疫损伤机制及其过程中所产生的细胞因子变化在MPP 的发生及进展中有着重要的作用。本次研究发现MPP 组患儿BALF 中IL-6、IL-35 的水平与对照组患儿相比存在显著差异，提示这两种细胞因子参与了MPP 的发生发展，但其具体的免疫调控机制有待进一步的研究。